【摘要】：豬流感(Swine Influenza,SI)是由豬流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的急性、熱性、群發(fā)性和傳染性呼吸道疾病。目前,豬群中流行的主要亞型有H1N1、H1N2和H3N2,其中歐洲類禽H1N1亞型和古典H1N1亞型是我國(guó)的主要流行株。為了查明歐洲類禽H1N1亞型SIV在國(guó)內(nèi)豬群中的流行情況,本研究以歐洲類禽H1N1亞型SIV(A/swine/Tianjin/6/2011(H1N1),簡(jiǎn)稱TJ6)為抗原,通過(guò)血凝抑制試驗(yàn),對(duì)2014至2016年間福建、河北、黑龍江、山東、廣東、江蘇、浙江、上海采集到的共1080份豬血清樣品進(jìn)行了抗體水平的檢測(cè),研究結(jié)果顯示,上述地區(qū)歐洲類禽H1N1亞型SIV抗體陽(yáng)性率分別為:31.9%、19.5%、37.5%、22.2%、79.6%、56.9%、41.4%、51.9%,表明歐洲類禽H1N1亞型SIV在我國(guó)豬群中廣泛傳播且穩(wěn)定存在。本研究以MDCK細(xì)胞和BALB/c小鼠為模型,開(kāi)展了歐洲類禽H1N1亞型SIV病毒生物學(xué)特性的研究。以0.001個(gè)MOI的病毒劑量,將TJ6接種MDCK細(xì)胞,進(jìn)行病毒在細(xì)胞上生長(zhǎng)曲線的測(cè)定,然后按照104個(gè)TCID50對(duì)小鼠進(jìn)行攻毒,測(cè)量其體重變化情況以及肺研磨液的病毒滴度。研究結(jié)果顯示,TJ6在MDCK細(xì)胞上引起明顯的細(xì)胞病變(CPE),病毒滴度在接種后48小時(shí)到達(dá)最高;小鼠TJ6攻毒組中第3天左右出現(xiàn)小鼠體重最低值,且其肺研磨液中能夠檢測(cè)到病毒,之后體重回升,該病毒能夠造成小鼠明顯的體重變化及病理組織變化。本研究進(jìn)行了反向遺傳操作平臺(tái)的構(gòu)建。利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增TJ6的8個(gè)基因片段,將其連接到雙向表達(dá)載體PBD上,然后將8個(gè)陽(yáng)性重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,54h后收取細(xì)胞上清液,接種MDCK細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞脫落后收集上清,進(jìn)行血凝試驗(yàn),測(cè)得血凝效價(jià)為1:32。對(duì)拯救得到的病毒擴(kuò)增其8個(gè)基因片段并進(jìn)行序列測(cè)定,其測(cè)序結(jié)果與原毒株保持一致,細(xì)胞病變情況無(wú)明顯差別,證明病毒拯救成功。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.651

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2790444