【摘要】：豬圓環(huán)病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)是一種能在全球范圍內(nèi)引起重大經(jīng)濟(jì)損失的病毒。而目前對(duì)于PCV2與宿主之間相互作用的機(jī)制尚未被很好的詮釋。因此,開展PCV2感染機(jī)制的研究及開發(fā)新型的PCV2防治技術(shù)刻不容緩。我們前期研究發(fā)現(xiàn),在PCV2核衣殼蛋白(capsid)氨基酸序列的Loop CT末端含有嚴(yán)格保守的PXXP功能性基序,該基序可能與含有Src同源性3結(jié)構(gòu)域(src homology3 domain,SH3)或Src同源性2結(jié)構(gòu)域(src homology 3 domain,SH2)的酪氨酸激酶相互作用。已有研究表明這種相互作用在某些病毒與相應(yīng)宿主細(xì)胞的分子“交叉”中起著至關(guān)重要的作用,但PCV2與酪氨酸激酶的關(guān)系尚未被詮釋,本研究旨在從酪氨酸激酶角度出發(fā),初步探究PCV2的感染機(jī)制。1.PCV2的感染增加Abl和Src家族激酶的表達(dá)本研究首先檢測(cè)了在PCV2感染的PK15中11個(gè)酪氨酸激酶基因mRNA水平的表達(dá),結(jié)果表明Hck,Fyn,Fgr,Abl,Frk,Lck和Src基因在PCV2感染過(guò)程中上調(diào),我們猜測(cè)以上基因可能參與PCV2的生命周期。2.PCV2在PK15細(xì)胞中的增殖依賴Src家族激酶為了確定PCV2感染誘導(dǎo)的Abl和Src家族酪氨酸激酶基因?qū)CV2感染PK15細(xì)胞的影響,我們使用了針對(duì)以上基因的抑制劑PP2(Src激酶家族抑制劑)和STI571(Abl激酶家族抑制劑),結(jié)合PCV2和PCV2病毒樣顆粒(VLPs)兩種不同材料研究Src和Abl家族激酶與PCV2感染PK15細(xì)胞之間的關(guān)系。間接免疫熒光(IFA)和細(xì)胞ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明抑制劑STI571和PP2不影響PCV2 VLP的入侵。隨后,我們以PCV2拯救病毒為材料研究抑制劑STI571和PP2對(duì)PCV2增殖的影響。結(jié)果表明:抑制劑STI571和PP2抑制了PCV2的增殖、病毒DNA、Cap蛋白的合成及病毒的釋放。值得注意的是,PP2對(duì)PCV2增殖的抑制作用大于STI571,其中TCID50結(jié)果顯示PP2對(duì)PCV2釋放的抑制效果約為STI571抑制效果的2倍。綜上可知,Src和Abl酪氨酸家族激酶基因參與調(diào)控PCV2的增殖,且PCV2的增殖尤其依賴Src家族激酶。3.Src家族激酶與血小板源性生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)協(xié)同作用于PCV2增殖探究Src家族激酶通過(guò)何種途徑參與PCV2增殖,且該家族激酶是獨(dú)立作用還是與其它蛋白協(xié)同作用于PCV2的增殖,將有利于闡明PCV2的感染機(jī)制。已有的研究表明蛋白酪氨酸激酶Src家族的成員通過(guò)其SH2結(jié)構(gòu)域在體內(nèi)與活化的PDGFR結(jié)合,從而激活Src家族激酶的內(nèi)在活性,且PDGFR被證明與多種病毒的生命周期有關(guān)。我們猜測(cè)Src家族激酶可能與PDGFR協(xié)同作用于PCV2的增殖。為了驗(yàn)證猜想,我們首先在PCV2感染PK15細(xì)胞的不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)了PDGFR mRNA水平的表達(dá),接著使用PDGFR特異性的抑制劑(Crenolanib)進(jìn)一步確認(rèn)PDGFR在PCV2感染過(guò)程中發(fā)揮的作用,IFA結(jié)果表明抑制劑Crenolanib以藥物濃度依賴性的方式抑制PCV2的增殖。綜合以上結(jié)果可知,Src酪氨酸家族激酶與PDGFR協(xié)同作用于PCV2增殖。本研究結(jié)果對(duì)于揭示PCV2的侵染分子機(jī)理研究奠定了理論基礎(chǔ),也為開發(fā)可能的抗PCV2感染的潛在治療抑制劑提供了參考,而Src酪氨酸家族激酶與PDGFR協(xié)同作用的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 吳建楠;宋萌;;非受體酪氨酸激酶對(duì)細(xì)胞功能的影響及其研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2015年03期

2 郎洪武,張廣川,吳發(fā)權(quán),張創(chuàng)貴;斷奶豬多系統(tǒng)衰弱綜合征血清抗體檢測(cè)[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2000年03期

本文編號(hào)：2790401