【摘要】：鎘(Cd)是一種危害極大的重金屬污染物,它能造成機(jī)體氧化應(yīng)激,誘導(dǎo)細(xì)胞損傷�；钚匝�(ROS)是機(jī)體內(nèi)含氧并且性質(zhì)活潑的物質(zhì)的總稱,過(guò)量的ROS可造成機(jī)體損傷。研究發(fā)現(xiàn),鎘中毒會(huì)使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的ROS,并且發(fā)生細(xì)胞自噬,這提示ROS可能與鎘誘導(dǎo)的自噬存在關(guān)聯(lián)。黃芪多糖(APS)是黃芪提取物中具有抗氧化、抗應(yīng)激等生物學(xué)功能的多糖,但目前關(guān)于APS對(duì)動(dòng)物鎘中毒影響的研究很少。因此,本試驗(yàn)以雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)為研究對(duì)象,在建立染鎘CEF自噬和損傷模型的基礎(chǔ)上,研究APS與ROS之間的關(guān)系以及APS對(duì)鎘誘導(dǎo)細(xì)胞自噬損傷的影響及機(jī)制。首先,為建立Cd誘導(dǎo)CEF自噬和損傷模型,將CdCl_2溶液以不同劑量、不同時(shí)間孵育CEF,檢測(cè)CEF內(nèi)自噬蛋白LC3的表達(dá)及細(xì)胞活力變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同濃度CdCl_2溶液孵育的CEF內(nèi)LC3均有不同程度的表達(dá),在10μmol/L的濃度、孵育36 h時(shí)CEF內(nèi)LC3表達(dá)量最高且細(xì)胞發(fā)生損傷。之后,為研究APS通過(guò)ROS抑制Cd致CEF的損傷作用,將CEF分為對(duì)照組、10μmol/L Cd組、自噬抑制劑3-MA+Cd組、3-MA組、自噬激活劑RAPA組、活性氧抑制劑NAC+Cd組、NAC組、40μg/mL APS+Cd組、APS組,通過(guò)DCFH-DA染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS含量的變化,生物化學(xué)方法檢測(cè)過(guò)氧化物丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的活性變化,自噬體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)自噬小體數(shù)量變化,Western-blot法檢測(cè)自噬蛋白LC3、Beclin-1、mTOR表達(dá)變化,超微透射電鏡技術(shù)觀察CEF的病理形態(tài)變化,CCK-8法檢測(cè)CEF活力變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)Cd組CEF內(nèi)ROS含量較C組顯著升高(P0.05),而NAC+Cd組、APS+Cd組CEF內(nèi)ROS與Cd組相比顯著降低(P0.05);(2)Cd組CEF內(nèi)MDA含量顯著高于C組,SOD和GSH-Px活性顯著低于C組(P0.05),而APS+Cd組CEF中MDA含量與Cd組相比顯著降低(P0.05),SOD和GSH-Px活性極顯著高于Cd組(P0.05);(3)自噬體數(shù)量檢測(cè)顯示,RAPA組、Cd組與C組相比自噬體數(shù)量顯著增加(P0.05),3-MA+Cd組與Cd組相比自噬體數(shù)量顯著減少(P0.05);(4)Western-blot結(jié)果顯示,Cd組CEF內(nèi)LC3與Beclin-1的表達(dá)顯著高于C組(P0.05),APS+Cd組中LC3與Beclin-1的表達(dá)較Cd組明顯降低(P0.05);mTOR蛋白表達(dá)在Cd組顯著低于C組(P0.05),APS+Cd組中mTOR的表達(dá)與Cd組相比顯著升高(P0.05);3-MA+Cd組與Cd組相比LC3表達(dá)量均顯著降低(P0.05);(5)透射電鏡下可見(jiàn)Cd組CEF內(nèi)有自噬體增多、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、線粒體脊模糊,CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞活力明顯降低,而APS+Cd組的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞活力均較Cd組有明顯改善。綜上,Cd可通過(guò)ROS誘導(dǎo)CEF自噬引起細(xì)胞損傷,而APS能夠顯著減少染鎘CEF內(nèi)ROS的產(chǎn)生、降低染鎘CEF中LC3及Beclin-1蛋白的表達(dá)、提高mTOR的表達(dá)和抗氧化水平、恢復(fù)染鎘CEF的細(xì)胞活力和形態(tài)損傷,表明APS可通過(guò)減少ROS生成減輕鎘致CEF自噬誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷。本研究為進(jìn)一步探討APS干預(yù)鎘中毒導(dǎo)致機(jī)體損傷作用及機(jī)制提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S859.8

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃思茂;周越菡;;細(xì)胞自噬與癌癥關(guān)系的研究進(jìn)展[J];科技視界;2018年35期

2 劉愛(ài)玲;呂紅;錢家鳴;;細(xì)胞自噬和衰老及衰老相關(guān)疾病[J];現(xiàn)代消化及介入診療;2019年04期

3 路帆;劉萬(wàn)林;;細(xì)胞自噬在激素性股骨頭缺血性壞死的作用[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2017年92期

4 趙書(shū)毅;;細(xì)胞自噬機(jī)制,不可或缺的細(xì)胞質(zhì)量控制系統(tǒng)——2016年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解讀[J];中學(xué)生物學(xué);2016年11期

5 吳勁松;;細(xì)胞自噬摭談[J];生物學(xué)教學(xué);2017年04期

6 蘇杜林;王健;;對(duì)2016年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的解讀與討論[J];中學(xué)生物教學(xué);2017年07期

7 韓翠翠;;細(xì)胞自噬及相關(guān)試題分析[J];中學(xué)生物教學(xué);2017年09期

8 奇云;;細(xì)胞自噬機(jī)制研究緣何摘得諾獎(jiǎng)?——2016年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解讀[J];生命世界;2016年12期

9 王海杰;譚玉珍;;細(xì)胞自噬機(jī)制開(kāi)啟疾病治療新途徑[J];解剖學(xué)報(bào);2017年01期

10 林承列;李江;周宜;孫艷紅;王麗華;胡鈞;樊春海;;基于細(xì)胞自噬機(jī)制的健康科學(xué)研究進(jìn)展[J];核技術(shù);2017年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 許赤;陳文捷;楊楊;李華;易述紅;陳規(guī)劃;;老年大鼠肝臟細(xì)胞自噬及其移植后改變[A];2013中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

2 劉杰民;紀(jì)云西;蔣歷;黃貴華;鄭超偉;郭超峰;;細(xì)胞自噬是探索中醫(yī)藥微觀機(jī)制的新思路[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第二十四次全國(guó)脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2012年

3 郭一;韓海嘯;;細(xì)胞自噬在非酒精性脂肪性肝病作用機(jī)制的研究進(jìn)展[A];第三十屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2018年

4 楊鍵;鄧玉杰;張曉燕;呂鵬飛;徐俊;楊穎;寧光;;脂肪細(xì)胞自噬檢測(cè)方法的建立及意義探討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

5 趙琳娜;林德貴;;細(xì)胞自噬的分子機(jī)制[A];第六屆西部寵物醫(yī)師大會(huì)論文集[C];2017年

6 陳寧;;運(yùn)動(dòng)干預(yù)對(duì)健康促進(jìn)的分子生理機(jī)制:從細(xì)胞自噬角度的闡釋[A];2018年中國(guó)生理學(xué)會(huì)運(yùn)動(dòng)生理學(xué)專業(yè)委員會(huì)會(huì)議暨“科技創(chuàng)新與運(yùn)動(dòng)生理學(xué)”學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2018年

7 代重山;湯樹(shù)生;肖希龍;;細(xì)胞自噬調(diào)控分子機(jī)制最新研究進(jìn)展[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)獸醫(yī)毒理學(xué)委員會(huì)與中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)毒理學(xué)會(huì)獸醫(yī)毒理學(xué)委員會(huì)第5次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)會(huì)議論文集[C];2017年

8 夏福燦;郭振紅;姜巖巖;鄧常文;屈玉蘭;鄧捷文;蔡志堅(jiān);曹雪濤;王建莉;;B細(xì)胞自噬在過(guò)敏性哮喘發(fā)生發(fā)展中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制研究[A];第十一屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要匯編[C];2016年

9 殷帆;陸利民;;細(xì)胞自噬在腎小管損傷機(jī)制中的研究進(jìn)展[A];慶祝中國(guó)生理學(xué)會(huì)《生理學(xué)報(bào)》創(chuàng)刊90周年專輯[C];2017年

10 李康生;代劍平;;病毒感染與細(xì)胞自噬[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 孟婧;細(xì)胞自噬研究目前仍處于初級(jí)階段[N];江蘇科技報(bào);2019年

2 記者 張夢(mèng)然;細(xì)胞自噬關(guān)鍵蛋白突變可延壽[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

3 記者 劉海英;美找到刺激細(xì)胞自噬新策略[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

4 記者 嚴(yán)粒粒;細(xì)胞自噬與多種疾病密切相關(guān)[N];浙江日?qǐng)?bào);2016年

5 記者白毅;介入細(xì)胞自噬過(guò)程可減輕缺血性腦損傷[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

6 記者 張建琛 通訊員 李靜;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬密碼[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

7 ;細(xì)胞自噬的奧秘被發(fā)現(xiàn)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

8 小亦;日發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬奧秘[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

9 常麗君;英發(fā)現(xiàn)控制細(xì)胞自噬過(guò)程分子開(kāi)關(guān)[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

10 記者 錢錚;細(xì)胞自噬作用有“油門”“剎車”[N];新華每日電訊;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 丁銳;凋亡抑制蛋白拮抗劑對(duì)腫瘤細(xì)胞自噬的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D];軍事科學(xué)院;2019年

2 康成容;PI3K/Akt/mTOR介導(dǎo)的細(xì)胞自噬在鉭顆粒促成骨細(xì)胞增殖中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

3 馬梅生;人源PI3KC3復(fù)合物結(jié)構(gòu)及其膜結(jié)合特征的研究[D];清華大學(xué);2017年

4 苗超峰;Foxd3在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究[D];鄭州大學(xué);2017年

5 王荔娜;HBO1乙�；笍�(fù)合體參與調(diào)控線粒體功能以及細(xì)胞自噬的分子機(jī)制的研究[D];華東師范大學(xué);2016年

6 朱峗;MSCs調(diào)控STAT3影響肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞自噬通量治療原發(fā)性膽汁性肝硬化的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

7 段秀英;細(xì)胞自噬調(diào)控細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白穩(wěn)態(tài)和脂質(zhì)代謝[D];浙江大學(xué);2019年

8 張梅;miR-337及細(xì)胞自噬相關(guān)基因LC3B、p62、p53在人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中的功能和意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

9 王志勇;扶正祛邪方對(duì)APP/PS1 HEK293細(xì)胞自噬功能調(diào)節(jié)作用的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

10 馮艷玲;細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Atg7抑制PKM2磷酸化參與Warburg效應(yīng)調(diào)節(jié)影響細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李楓;國(guó)內(nèi)外細(xì)胞自噬領(lǐng)域研究的主題分析[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

2 朱桓毅;Sb、As、Cd脅迫下蜈蚣草體內(nèi)重金屬形態(tài)、酶活性與細(xì)胞自噬的關(guān)系[D];貴州大學(xué);2019年

3 鄧才幸;5種氧化異阿樸菲生物堿Pt（Ⅱ）配合物的抗腫瘤機(jī)制研究[D];廣西師范大學(xué);2019年

4 劉靜;黑根霉胞外多糖促進(jìn)U87MG細(xì)胞自噬及其分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

5 闞科佳;接頭蛋白GAB1調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞自噬參與動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)研究[D];上海交通大學(xué);2017年

6 段瑞雪;Vaspin對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞自噬水平的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

7 曹麗;腸道病毒71型誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬通過(guò)NLRP3炎性小體調(diào)控細(xì)胞凋亡和焦亡[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

8 陳瑋;ACBD3調(diào)控細(xì)胞自噬的分子機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

9 劉海鑫;誘導(dǎo)IPEC-J2細(xì)胞自噬的豬流行性腹瀉病毒非結(jié)構(gòu)蛋白篩選[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

10 唐澤群;APS通過(guò)ROS減輕細(xì)胞自噬對(duì)染鎘雞胚成纖維細(xì)胞損傷作用的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2786041