【摘要】：牛乳頭瘤病是由牛乳頭瘤病毒(Bovine papillomavirus,BPV)引起的一種腫瘤性疾病�；寂Ｖ饕憩F(xiàn)為患病處有突出體表外的贅生瘤體,且極易通過(guò)畜群間的接觸引發(fā)交叉感染。已知的牛乳頭瘤病毒Ⅰ型和Ⅱ型可以通過(guò)畜群混飼造成跨種間傳播,主要表現(xiàn)為馬屬動(dòng)物感染牛乳頭狀瘤病毒。因乳頭瘤病毒的宿主特異性、組織局限性,以及細(xì)胞培養(yǎng)增殖病毒困難,目前傾向于分子水平的研究。本研究基于新疆南疆一例疑似感染牛乳頭狀瘤病例的樣本基因分型鑒定,對(duì)牛乳頭狀瘤病毒1型SY-12株全長(zhǎng)基因組序列測(cè)序及結(jié)構(gòu)特征分析,并構(gòu)建SY-12株L1基因的原核表達(dá)系統(tǒng)和E6真核表達(dá)系統(tǒng),為進(jìn)一步研究牛乳頭瘤的基因分型、疫源追溯、病毒分子遺傳演化規(guī)律、疫苗研究等提供理論依據(jù)。1.在臨床診斷、病理組織學(xué)檢查基礎(chǔ)上,采用乳頭瘤病毒通用引物MY11/MY09成功擴(kuò)增出L1基因部分片段并測(cè)序,核苷酸同源性比較分析確定該患病動(dòng)物為BPV-1型牛乳頭瘤病毒感染。2.設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增引物、測(cè)序引物,完成牛乳頭瘤病毒1型SY-12全基因組序列測(cè)定。確定SY-12基因序列全長(zhǎng)7946 bp,具有BPV的功能基因結(jié)構(gòu),包括早期編碼區(qū)基因E6、E7、E1、E2、E4、E5和晚期編碼區(qū)基因L1和L2,為Delta屬牛乳頭瘤病毒。3.以L1基因的特異性引物擴(kuò)增出1488 bp目的片段,并構(gòu)建BPV-1 L1基因的原核表達(dá)系統(tǒng)pET32a-L1,經(jīng)誘導(dǎo)條件優(yōu)化后獲得分子量大小為75 KD的目的融合蛋白,與預(yù)期蛋白大小相符。4.以E6基因特異性引物,成功克隆BPV-1 E6基因,目的基因大小為414 bp,構(gòu)建E6真核表達(dá)系統(tǒng)pEGFP-N1-E6并轉(zhuǎn)染至BHK-21細(xì)胞內(nèi),倒置熒光顯微鏡下可見(jiàn)明顯綠色熒光。
【學(xué)位授予單位】：塔里木大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊海寧,于修平,Jason J.Chen,卞繼峰;牛乳頭瘤病毒E6蛋白與p73蛋白作用的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年04期

2 ;激素和活性多肽[J];生物技術(shù)通報(bào);1987年01期

3 史巧蕓;龐峰;杜麗;王鳳陽(yáng);;牛乳頭瘤病毒的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2015年06期

4 賀志昊;孟慶玲;喬軍;劉昱成;楊海波;王國(guó)超;才學(xué)鵬;陳創(chuàng)夫;;牛乳頭瘤病毒基因2型流行株全基因組的克隆及序列分析[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2013年11期

5 賀志昊;劉昱成;楊海波;王國(guó)超;孟慶玲;喬軍;才學(xué)鵬;陳創(chuàng)夫;;牛乳頭瘤病毒2型L1基因的克隆及原核表達(dá)[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年01期

6 賀志昊;喬軍;孟慶玲;楊海波;劉昱成;王國(guó)超;才學(xué)鵬;陳創(chuàng)夫;都曼·努爾坎杰;;牛乳頭瘤病毒2型L1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及真核表達(dá)[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2014年10期

7 張婉琪;胡建軍;閆石磊;黃耀杰;徐建平;黃忠武;鄭毛亮;孟子嫣;李元元;王娜;王青青;;牛乳頭瘤病毒基因2型新疆南疆Aks-01流行株全基因組序列測(cè)定及其特征分析[J];病毒學(xué)報(bào);2015年04期

8 易馳U

本文編號(hào)：2785990