【摘要】：牛乳頭瘤病是由牛乳頭瘤病毒(Bovine papillomavirus,BPV)引起的一種腫瘤性疾病�；寂Ｖ饕憩F(xiàn)為患病處有突出體表外的贅生瘤體,且極易通過畜群間的接觸引發(fā)交叉感染。已知的牛乳頭瘤病毒Ⅰ型和Ⅱ型可以通過畜群混飼造成跨種間傳播,主要表現(xiàn)為馬屬動物感染牛乳頭狀瘤病毒。因乳頭瘤病毒的宿主特異性、組織局限性,以及細胞培養(yǎng)增殖病毒困難,目前傾向于分子水平的研究。本研究基于新疆南疆一例疑似感染牛乳頭狀瘤病例的樣本基因分型鑒定,對牛乳頭狀瘤病毒1型SY-12株全長基因組序列測序及結構特征分析,并構建SY-12株L1基因的原核表達系統(tǒng)和E6真核表達系統(tǒng),為進一步研究牛乳頭瘤的基因分型、疫源追溯、病毒分子遺傳演化規(guī)律、疫苗研究等提供理論依據(jù)。1.在臨床診斷、病理組織學檢查基礎上,采用乳頭瘤病毒通用引物MY11/MY09成功擴增出L1基因部分片段并測序,核苷酸同源性比較分析確定該患病動物為BPV-1型牛乳頭瘤病毒感染。2.設計特異性擴增引物、測序引物,完成牛乳頭瘤病毒1型SY-12全基因組序列測定。確定SY-12基因序列全長7946 bp,具有BPV的功能基因結構,包括早期編碼區(qū)基因E6、E7、E1、E2、E4、E5和晚期編碼區(qū)基因L1和L2,為Delta屬牛乳頭瘤病毒。3.以L1基因的特異性引物擴增出1488 bp目的片段,并構建BPV-1 L1基因的原核表達系統(tǒng)pET32a-L1,經(jīng)誘導條件優(yōu)化后獲得分子量大小為75 KD的目的融合蛋白,與預期蛋白大小相符。4.以E6基因特異性引物,成功克隆BPV-1 E6基因,目的基因大小為414 bp,構建E6真核表達系統(tǒng)pEGFP-N1-E6并轉染至BHK-21細胞內,倒置熒光顯微鏡下可見明顯綠色熒光。
【學位授予單位】：塔里木大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65

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