【摘要】：牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛皰疹病毒-1型(Bovine herpesvius 1,BHV-1)引起的一種牛的發(fā)熱型急性傳染病,又稱為“紅鼻病”或“壞死性鼻炎”。目前國內(nèi)對IBR的防控主要依賴于滅活疫苗,但存在著諸多弊端,如用常規(guī)滅活劑--甲醛滅活病毒過程中,病毒表面天然蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,導致免疫后效果不佳,以及免疫保護期較短等問題,均難以取得令人滿意的免疫效果。因此,尋找新型安全無刺激性的滅活劑和能夠有效延長免疫保護期的疫苗佐劑或輔助佐劑,已成為當前滅活疫苗研制中亟待解決的問題。本研究的目的就是探究一種可替代甲醛的滅活劑,并通過動物實驗評價納米微球?qū)BR滅活疫苗的免疫佐劑作用。這對IBRV新型滅活疫苗的開發(fā)與應用提供了新的研究基礎與方向。本試驗通過滅活時間和滅活濃度雙因素確定了聚維酮碘和甲醛的最優(yōu)滅活條件。以細胞盲傳三代觀察CPE、無菌檢驗和臺盼藍染色等方法,篩選聚維酮碘的最佳滅活濃度和滅活時間。結(jié)果表明8%的聚維酮碘作用48 h可徹底滅活IBRV,0.3%的甲醛作用48 h時可徹底滅活IBRV。為了確定聚維酮碘對細胞的毒性,本研究向MDBK細胞培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的聚維酮碘和甲醛,比較二者對MDBK細胞毒性作用,結(jié)果表明0.5%的甲醛即可導致絕大多數(shù)細胞死亡,而18%的聚維酮碘對細胞無任何毒性,直到20%時才對細胞產(chǎn)生毒性導致部分細胞死亡。上述結(jié)果說明,聚維酮碘可徹底滅活IBRV,與甲醛相比對細胞的毒性較小,可代替甲醛滅活劑制備滅活苗。為了探究聚苯乙烯納米微球(PS)作為輔助佐劑,承載IBRV后的免疫增強作用。本試驗以EDC活化聚苯乙烯微球通過一步法偶聯(lián)IBRV,再以滅活偶聯(lián)后的IBRV制成滅活苗免疫昆明系小白鼠。通過間接ELISA方法對血清IgG進行檢測,結(jié)果表明,PS+206佐劑組抗體水平最高,免疫持續(xù)期最長,與206佐劑組、滅活苗+PS組和PS對照組這三組相比差異極顯著(P0.01)。流式細胞技術(shù)檢測血液中CD4~+和CD8~+細胞動態(tài)變化,結(jié)果表明,注射PS+206佐劑組的小鼠血液中CD4~+和CD8~+T細胞亞群占總淋巴細胞的百分比最高,含量持續(xù)期最長,與206佐劑組相比差異極顯著(P0.01)。血清中IFN-γ、IL-4和IL-6測定結(jié)果表明,三種細胞因子的含量均是PS+206組最高,持續(xù)期最長,與206佐劑組、滅活苗+PS組和PS對照組這三組相比均差異極顯著(P0.01)。以上結(jié)果說明,PS作為輔助佐劑可提高滅活苗的免疫效果,并能延長機體免疫持續(xù)期,克服了傳統(tǒng)滅活苗免疫持續(xù)期短的難題。綜上所述,聚維酮碘可替代甲醛滅活IBRV,PS作為輔助佐劑可提高滅活疫苗的免疫效果,并延長機體免疫持續(xù)期。
【學位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.4
【圖文】：

對照組細胞（200x）

c d圖 2-2 聚維酮碘在不同滅活條件下未徹底滅活 IBRV 導致細胞病變（200x）Fig. 2-2 Partially inactivated IBRV in povidone iodine oral solution under different inactivationconditions (200x)注：a:在 2%聚維酮碘滅活 24 h 的條件下，MDBK 細胞產(chǎn)生變大變圓的 CPE；b:在 4%聚維酮碘滅活 24 h 的條件下，c:MDBK 細胞產(chǎn)生變大變圓的 CPE；在 6%聚維酮碘滅活 24 h 的

c d圖 2-3 不同滅活條件下的聚維酮碘在盲傳三代后細胞未病變（200x）Fig. 2-3 Partially inactivated IBRV in povidone iodine oral solution under different inactivationconditions (200x)注：a:在 8%聚維酮碘滅活 IBRV 48 h 條件下，盲傳三代后 MDBK 細胞未發(fā)生 CPE；b:在 8%聚維酮碘滅活IBRV72 h 的條件下，盲傳三代后 MDBK 細胞未發(fā)生 CPE；c:在 12%聚維酮碘滅活 IBRV 48 h 的條件下，

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 萬繼成;;河南省新蔡縣奶牛傳染性鼻氣管炎血清學調(diào)查[J];中國乳業(yè);2017年05期

2 周慧芳;洪敏;王夢甜;單佳雯;吳建宇;楊立偉;何徐軍;;聚維酮碘溶液對子宮內(nèi)膜細胞的滅活作用研究[J];浙江醫(yī)學;2016年24期

3 李永琴;趙世媛;牛耀祖;何小麗;李凡飛;溫萬;許立華;;寧夏地區(qū)奶牛場牛傳染性鼻氣管炎的血清學調(diào)查[J];畜牧與獸醫(yī);2016年10期

4 雷元元;何生虎;郭亞男;馬燁;曹思婷;白曉南;;甲醛滅活牛支原體的條件探究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年21期

5 ;安多福研制出創(chuàng)新型非抗生素類新獸藥——“萬金水”聚維酮碘口服液[J];廣東經(jīng)濟;2015年10期

6 梁宏儒;高佳濱;李安;陳為宏;喬波;尹輝;胡旭;趙達;姜東君;朱戰(zhàn)波;;牛傳染性鼻氣管炎的分離鑒定和滅活條件的優(yōu)化[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學學報;2013年06期

7 楊有武;;牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離鑒定及gD基因序列分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2013年06期

8 宋文超;金業(yè);吳文浩;張煒;姚火春;;傳染性牛鼻氣管炎病毒分離鑒定及特性分析[J];畜牧與獸醫(yī);2012年06期

9 唐艷濤;卞麗娜;王春;馬黎黎;;分散聚合法制備亞微米級單分散聚苯乙烯微球[J];遼寧化工;2011年04期

10 劉全離;;聚維酮碘體外抑菌效果試驗觀察[J];中國消毒學雜志;2008年01期

相關碩士學位論文 前2條

1 李河林;IBRV XA株的分離鑒定及其gD蛋白的原核表達[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年

2 葉平;奶牛關節(jié)炎透皮治療藥物的研制及藥效學評價研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2004年

本文編號：2784368