【摘要】：內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(Endogenous retrovirus,ERVs)的基因已經(jīng)普遍的存在于脊椎動物的基因組中。一些內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒與其宿主胎盤的發(fā)育關(guān)系密切。迄今為止已經(jīng)在綿羊基因組中發(fā)現(xiàn)至少27個拷貝數(shù)與外源性綿羊肺腺瘤逆轉(zhuǎn)錄病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)相關(guān)的內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒,這些內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒與其對應(yīng)的外源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(Exdogenous retrovirus)高度相關(guān),故稱其為內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒(Endogenous jaagsiekte sheep retrovirus,enJSRVs)。enJSRV在綿羊胎盤形成過程中有重要的作用,并且enJSRV囊膜蛋白(Env)能夠在綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞融合過程中起促進(jìn)作用,但是enJSRV囊膜蛋白的作用機(jī)制尚不明確。因此,本試驗針對enJSRV囊膜蛋白促進(jìn)綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞融合的機(jī)制展開研究。本試驗利用免疫組織化學(xué)染色法檢測enJSRV囊膜蛋白在綿羊胎盤中的主要表達(dá)區(qū)域;繼而培養(yǎng)綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞并瞬時轉(zhuǎn)染重組表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1/enJSRV-env到細(xì)胞中,同時添加Erk、p38及JNK這3種蛋白激酶的抑制因子,利用Western Blot法檢測enJSRV囊膜蛋白對Erk]/2、p38及JNK磷酸化水平的影響,分析enJSRV囊膜蛋白能否激活綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞中MAPK信號通路;利用激光共聚焦顯微鏡觀察添加3種抑制因子后與未添加抑制因子的細(xì)胞之間細(xì)胞融合數(shù)量的變化;瞬時轉(zhuǎn)染重組表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1/enJSRV-env到293T細(xì)胞中,并檢測Erk1/2、p38及JNK磷酸化水平的變化,再經(jīng)過與綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞的結(jié)果比照,初步分析enJSRV囊膜蛋白在不同細(xì)胞內(nèi)作用機(jī)制的差別。結(jié)果顯示,enJSRV囊膜蛋白主要在綿羊胎盤組織的絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞中表達(dá);通過Western Blot檢測到轉(zhuǎn)染重組表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1/enJSRV-env的綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞中,Erk1/2、p38和JNK磷酸化水平均顯著高于對照組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pEGFP-C1組及添加抑制因子組(P0.05),添加3種抑制因子后,與其相應(yīng)蛋白激酶的磷酸化明顯被抑制;通過激光共聚焦顯微鏡觀察到轉(zhuǎn)染重組表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1/enJSRV-env組平均每個視野有1.6個綿羊雙核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞,而添加Erk、p38和JNK抑制因子后,平均每個視野下分別可觀察到0.6個、0.8個和0.8個綿羊雙核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞;通過Western Blot法檢測到,轉(zhuǎn)染重組表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-Cl/enJSRV-env的293T細(xì)胞中,p38磷酸化水平顯著高于對照組和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pEGFP-C1組(P0.05),]NK磷酸化水平極顯著高于對照組及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pEGFP-C1 組(P0.01)。本研究結(jié)果表明,enJSRV囊膜蛋白能夠激活綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞中MAPK信號通路,并且可能通過激活MAPK信號通路調(diào)節(jié)綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞融合過程。通過比較兩種細(xì)胞中Erk1/2、p38及JNK磷酸化水平的變化發(fā)現(xiàn),enJSRV囊膜蛋白在不同種類細(xì)胞中的作用機(jī)制可能存在一定的差異。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 徐萌杰;陳大勇;劉淑英;;妊娠綿羊子宮內(nèi)膜組織內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒及其受體HYAL2基因表達(dá)水平的檢測[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2011年03期

2 徐萌杰;劉淑英;;enJSRV及其受體HYAL2在妊娠蒙古綿羊胎盤組織中的表達(dá)[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2011年12期

3 吳曉莉;齊景偉;劉淑英;徐萌杰;;Real-Time PCR和組織原位雜交法檢測enJSRV在綿羊胎兒免疫器官及肺臟中的表達(dá)[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2010年08期

4 張宇飛;劉月;張亞坤;劉淑英;;靶向enJSRV env基因shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其干擾效率的測定[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2013年01期

5 張宇飛;石晶;劉淑英;;enJSRV囊膜蛋白及其受體的瞬時表達(dá)與綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞融合的誘導(dǎo)研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2015年11期

6 孫曉林;杜方原;劉淑英;;外源性綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信號通路的分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2016年08期

本文編號：2771415