發(fā)布時間：2020-07-24 00:50

【摘要】：商品蛋雞480日齡后,產(chǎn)蛋量急劇降低,縮短蛋雞的使用年限,嚴重影響蛋雞飼養(yǎng)價值。蛋雞產(chǎn)蛋量的多少主要取決于蛋雞卵巢功能高低,以及卵泡的發(fā)育狀況,而蛋雞卵泡發(fā)育過程中卵黃沉積與肝臟合成卵黃前體物的能力密切相關(guān)。大量研究表明,細胞中新陳代謝產(chǎn)生的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)積聚引起的氧化應(yīng)激是導(dǎo)致器官功能失常的主要原因。大量研究表明,抗氧化物質(zhì)的補充可緩解ROS對組織和器官的氧化損傷。本實驗以海蘭褐殼蛋雞為研究對象,一方面研究了不同產(chǎn)蛋階段蛋雞卵黃前體物生成和卵巢抗氧化能力的變化,另一方面通過建立體外誘導(dǎo)卵巢衰老模型和衰老卵巢組織體外培養(yǎng)模型研究葡萄籽原花青素提取物(Grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)和番茄紅素(Lycopene)對蛋雞衰老過程中卵巢氧化應(yīng)激的緩解作用,為延緩蛋雞卵巢衰退,延長蛋雞使用年限和提高蛋雞產(chǎn)蛋量提供理論依據(jù)。1.不同產(chǎn)蛋階段蛋雞卵黃前體物生成的變化本研究通過比較 90(D90)、150(D150)、280(D280)和 580(D580)日齡蛋雞血清雌激素的水平、肝臟雌激素受體基因和卵黃前體物生成相關(guān)基因表達量,“肝臟-血液-卵巢軸”中甘油三酯(triglyceride,TG)和總膽固醇的含量和肝臟抗氧化能力的動態(tài)變化,揭示蛋雞卵黃前體物生成隨著年齡增長的變化規(guī)律。結(jié)果顯示:蛋雞由D90生長至D150,血清雌二醇(17β-estradiol,E2)水平和肝臟組織中TG含量大幅度升高,但在D580急劇降低。與血清E2水平變化一致,D580蛋雞肝臟組織雌激素受體(Estrogen receptor α,ERα)和的表達量顯著降低,同時,D580蛋雞肝臟組織中脂肪酸合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)。此外,肝臟組織中D580蛋雞肝臟組織中抗氧化物質(zhì)含量顯著下降而丙二醛(Malonaldehyde,MDA)水平顯著高于其它階段。以上結(jié)果表明,在蛋雞衰老過程中,血清E2水平、肝臟ERα、ERβ和卵黃前體物質(zhì)合成相關(guān)基因表達量降低,肝臟抗氧化能力降低,引起肝臟合成TG的能力下降,最終導(dǎo)致卵黃前體物質(zhì)合成能力降低。2.不同產(chǎn)蛋階段蛋雞卵巢組織抗氧化能力的變化本研究通過比較不同產(chǎn)蛋階段(D90、D150、D280和D580)蛋雞卵巢組織中還原性谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量、總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)、抗氧化酶類活性、氧化產(chǎn)物的水平以及抗氧化相關(guān)信號通路Nrf2/HO-1相關(guān)蛋白和基因表達水平的變化,揭示蛋雞卵巢組織抗氧化能力隨年齡增長的變化規(guī)律。結(jié)果顯示:伴隨著蛋雞產(chǎn)蛋性能的下降,D580蛋雞卵巢組織中GSH含量、T-AOC和總超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶顯著降低,而MDA、過氧化氫和ROS水平顯著升高,同時,D580蛋雞卵巢組織抗氧化基因的表達水平顯著降低。此外,在蛋雞衰老過程中,與組織抗氧化能力密切相關(guān)的卵巢組織核轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子(Nuclear factor(erythroid-derived2)-like2,Nrf2)和血氧合酶 1(Hemooxygenase,HO-1)表達水平顯著降低,Nrf2/HO-1通路下游相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)。以上研究結(jié)果表明在蛋雞衰老過程中,卵巢組織中抗氧化物質(zhì)含量下降、抗氧化酶類活性降低、氧化產(chǎn)物逐漸積累伴隨著關(guān)鍵抗氧化通路Nrf2/HO-1活性降低,導(dǎo)致蛋雞卵巢組織抗氧化能力下降,氧化應(yīng)激加劇。3.葡萄籽原花青素提取物通過抑制氧化應(yīng)激延緩蛋雞卵巢衰老氧化應(yīng)激是引起雌性動物卵巢功能下降的主要因素之一。本研究主要通過建立體外D-半乳糖(D-galactose,D-gal)誘導(dǎo)衰老模型探究GSPE對蛋雞卵巢衰退的緩解作用。在體外使用D-gal(2.5mg/mL)處理D90蛋雞卵巢組織,建立體外誘導(dǎo)衰老卵巢模型,同時添加GSPE處理(5μg/mL)后,檢測各組卵巢組織抗氧化能力、細胞增殖和細胞凋亡。隨后,在體外培養(yǎng)的D280和D580蛋雞卵巢組織中,單獨添加GSPE處理(5 μg/mL),檢測處理后卵巢組織抗氧化能力、細胞增殖和凋亡的變化。結(jié)果顯示:GSPE通過提高卵巢組織抗氧化酶的活性、上調(diào)抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄水平緩解D-gal誘導(dǎo)衰老和自然衰老卵巢組織的氧化應(yīng)激。同時GSPE可以促進D-gal誘導(dǎo)衰老和自然衰老卵巢組織中細胞增殖并抑制細胞凋亡,減輕卵巢組織所受的氧化損傷。此外,GSPE顯著改善D-gal誘導(dǎo)衰老卵巢組織顆粒細胞細胞核染色質(zhì)固縮現(xiàn)象。以上研究結(jié)果表明,GSPE通過緩解卵巢組織氧化應(yīng)激延緩蛋雞卵巢衰退。4.番茄紅素通過激活Nrf2/HO-1通路緩解衰老蛋雞卵巢的氧化應(yīng)激番茄紅素是具有極強抗氧化特性的類胡蘿卜素,本實驗旨在研究番茄紅素對蛋雞卵巢衰退的緩解作用,以及可能的分子機制。首先通過D-gal誘導(dǎo)衰老卵巢模型探究番茄紅素對衰老卵巢抗氧化能力、細胞增殖和凋亡的作用。然后檢測番茄紅素對D-gal誘導(dǎo)衰老卵巢組織Nrf2/HO-1信號通路相關(guān)蛋白和基因表達水平的影響,以及在加入Nrf2激活劑和阻斷劑后,番茄紅素對D-gal誘導(dǎo)衰老卵巢氧化應(yīng)激緩解作用的變化,確定番茄紅素對D-gal誘導(dǎo)衰老卵巢組織氧化應(yīng)激的緩解作用是否依賴Nrf2/HO-1信號通路。最后,通過體外培養(yǎng)D280和D580蛋雞卵巢組織中添加番茄紅素處理,驗證番茄紅素是否具有緩解自然衰老蛋雞卵巢組織氧化應(yīng)激的作用。結(jié)果顯示番茄紅素通過提高卵巢組織抗氧化酶類的活性、上調(diào)Nrf2/HO-1信號通路相關(guān)蛋白和基因的表達水平,緩解D-gal誘導(dǎo)衰老和自然衰老卵巢組織的氧化應(yīng)激。番茄紅素對D-gal誘導(dǎo)衰老卵巢組織的保護作用被Nrf2阻斷劑消除。同時番茄紅素促進衰老卵巢細胞增殖,抑制細胞凋亡。此外,番茄紅素顯著改善D-gal誘導(dǎo)衰老卵巢組織顆粒細胞線粒體損傷。以上研究表明,番茄紅素通過激活Nrf2/HO-1信號通路緩解衰老蛋雞卵巢組織的氧化應(yīng)激。綜上所述,本研究的結(jié)果表明,在蛋雞衰老過程中雌激素作用衰退以及肝臟抗氧化能力降低致使肝臟中卵黃前體物合成下降;同時,卵巢組織中抗氧化能力降低,卵巢氧化應(yīng)激加劇,最終導(dǎo)致卵巢衰退;通過體外添加D-gal培養(yǎng)蛋雞卵巢組織,建立體外誘導(dǎo)衰老卵巢模型,在此基礎(chǔ)上探索GSPE和番茄紅素延緩卵巢衰退的作用。這些結(jié)果為延緩蛋雞卵巢衰退,提高蛋雞產(chǎn)蛋量提供理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S831
【圖文】：

２００３）。大量在嚙齒動物和人上的研究表明，卵巢組織中ＲＯＳ水平過量導(dǎo)致竇狀逡逑卵泡閉鎖、顆粒細胞調(diào)亡和繁殖能力降低（Ｇｕｐｔａ邋ｅｔ邋ａｌ．，２００６；邋Ａｇａｒｗａｌ邋ｅｔ邋ａｌ＿，邋２０１２；逡逑Ｃａｂｒｙｅｔａｌ．，邋２０１４）（圖１－２）。上述研究表明，卵巢組織年齡相關(guān)的氧化應(yīng)激加劇逡逑同時伴隨著抗氧化能力降低最終導(dǎo)致卵巢衰退。逡逑Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ邋Ｓｔｒｅｓｓ逡逑Ｒｅａｃｔｉｖｅ邋Ｏｘｙｇｅｎ邋Ｓｐｅｃｉｅｓ逡逑Ｏｂｅｓｉｔｙ邋１邐０？？邐Ｈ．＞0邋．0Ｈ邐０Ｎ００邐ＰＣＯＳ邋｜逡逑Ｕｎｄｅｒ邋ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ邋［邐Ｅｎｄｏｍｅｔｎｏｓｉｓ邋［逡逑Ｒｅｃｒｅａｔｉｏｎａｌ邋Ｄｍｇｓ邋ｊ邐Ｐｒｅｅｄａｍｐｓｉａ邋Ｉ逡逑Ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ邋Ｉ邐，邋Ａ邐＾邋．ＴＳｙｒ邋１邋Ａｇｅ－ｒｅｌａｌｅｄ邋Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ逡逑Ｔ邐＼邐Ｄｅｃｌｉｎｅ邋＆邋Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ逡逑Ａｌｃｏｈｏｌ邋｜邐＼邐）／邋９邐■＊逡逑Ｉ邋？邋｜ｙＱＲ邐Ｕｎｅｘｐｌａｉｎｅｃ逡逑Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ邋Ｅｘｐｏｓｕｒｅｓ邋｜邐１邐Ｉｎｌｅｒｔｉｌｉｌｙ逡逑／邋ｆ邐Ｐｒｅｔｅｒｍ逡逑Ｉ邋ＶｉＸ邐Ｌａｂｏｒ逡逑Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ邋ｊ逡逑ｊ邐Ａｂｏｒｔｉｏｎ逡逑Ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ逡逑圖１－２氧化應(yīng)激對女性生殖的影響（Ａｇａｒｗａｌｅｔａｌ．，２０１２）逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ｏｘｉｄａｔｉｖｅ邋ｓｔｒｅｓｓ邋ｏｎ邋ｆｅｍａｌｅ邋ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．邋（Ａｇａｎｖａｌ邋ｅｔ邋ａｌ．

Ｔ－ＣＨＯ水平無顯著差異；Ｄ２８０和Ｄ５８０蛋雞血清Ｔ－ＣＨＯ水平顯著高于Ｄ９０和逡逑Ｄ１５０蛋雞；Ｄ２８０蛋雞卵巢Ｔ－ＣＨＯ水平顯著高于其它三組，其它姐之間無顯著逡逑差異（圖２－１）。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑０＾５－，邐０－０３－ｊ邋ａ邐ａ邐ｇ逡逑ｌｉｌｉｉｉ邋ｉ：ＩＵｉ逡逑，Ｗ邋／邐，Ｖ逡逑Ｃ邐Ｄ逡逑４１邐Ｂｂ逡逑ｒ邐—邐＾邐ＡＢａｂ逡逑ｙ邋八，／邐ｙ，ｙ邐ｙ逡逑＃邋＃邐，邋，邐＃邋，＃邋＃逡逑Ｅ邐Ｆ逡逑０．０８－１邐Ｂｂ邐０．０８－１逡逑１０邋０６－邐Ｂｂ邐■■■邋Ｂｂ邐１０．０６－逡逑ｉ：Ｌ４Ｕ邋ｓｍＩａ逡逑圖２－１不同產(chǎn)蛋階段蛋雞肝臟、血清和卵巢組織ＴＧ和Ｔ－ＣＨＯ水平變化各組數(shù)據(jù)均為平逡逑均值土標準誤各組數(shù)據(jù)均為平均值±標準誤（ｎ＝１０），大寫字母不同表示差異極顯著（Ｐ＜逡逑０．０１），小寫字母不同表示差異顯著Ｃ尸＜０．０５）。逡逑Ｆｉｇ．邋２－１邋Ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ＴＧ邋ａｎｄ邋Ｔ－ＣＨＯ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｉｎ邋ｌｉｖｅｒ，邋ｓｅｒｕｍ邋ａｎｄ邋ｏｖａｒｙ邋ｉｎ邋ｈｅｎｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ａｇｅｓ．逡逑Ｄａｔａ邋ｗｅｒｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ邋ａｓ邋ｔｈｅ邋ｍｅａｎ士ｓ．ｅ．邋（ｎ＝１０）．邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃａｐｉｔａｌ邋ａｎｄ邋ｌｏｗｅｒｃａｓｅ邋ｌｅｔｔｅｒｓ邋ｉｎｄｉｃａｔｅ邋ａ逡逑ｖｅｒｙ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋（尸邋＜邋０．０１）邋ａｎｄ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋（尸邋＜邋０．０５）

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本文編號：2768066