發(fā)布時間：2020-07-23 15:04

【摘要】：鵝肝臟具有很強(qiáng)的脂肪酸合成與儲存能力。鵝脂肪肝是一種著名的美食,具有極高的營養(yǎng)價值和特殊的保健作用,備受消費者青睞。脂質(zhì)在日糧配方及代謝中起重要作用,可以為機(jī)體提供高水平密度的能量以及必需脂肪酸,尤其是多不飽和脂肪酸(PUFAs)對健康的益處越來越受到重視。目前通過改變?nèi)占Z脂肪酸成分來改善肝臟PUFAs含量的研究較多,然而其調(diào)控作用機(jī)制十分復(fù)雜,迄今為止尚未完全闡明。此外,綜合研究產(chǎn)肝性能、腸道微生物以及脂類代謝的分子調(diào)控過程的文獻(xiàn)鮮有報道。本試驗以朗德鵝為研究對象,研究了日糧不同油源(牛油BT、魚油FO、鵝油GF和菜籽油RO)及一種抗病促生長飼料添加劑(強(qiáng)百士)對生長性能、脂肪沉積和血液脂類成分和相關(guān)酶活性的影響,并研究了其對填飼朗德鵝腸道形態(tài)及腸道微生物的影響。同時,通過數(shù)字基因表達(dá)普技術(shù)(Digital Gene Expression,DGE)、實時定量 PCR(q-RT-PCR)研究鵝肝臟脂肪酸和膽固醇代謝的調(diào)控通路,挖掘與PUFAs和膽固醇代謝相關(guān)候選基因,初步闡明了日糧PUFAs增加肥肝n-3 PUFAs的分子機(jī)制。1.油脂和強(qiáng)百士對填飼朗德鵝血液生化指標(biāo)的影響將120只70日齡體重相近(3.0±0.05 kg)、健康的齡朗德鵝,隨機(jī)分為6組(每組4個重復(fù),每個重復(fù)5只),試驗組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加2%的鵝油、牛油、魚油、菜籽油,及0.3%的強(qiáng)百士(HSCAS)進(jìn)行填飼。其中強(qiáng)百士試驗以自由采食基礎(chǔ)飼糧組為對照I組,以2%鵝油組為對照II組。預(yù)飼期7 d,填飼期20 d。結(jié)果顯示:魚油組血清甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)顯著低于鵝油組(P0.05);菜籽油組LDL顯著低于鵝油組(P0.05),總膽固醇(TC)顯著低于牛油組(P0.05);牛油組高密度脂蛋白(HDL)顯著高于鵝油組(P0.05);與鵝油組比較,牛油、魚油和菜籽油組血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平有降低趨勢。與對照I組比較,HSCAS 組 TC、TG、VLDL、膽堿酯酶、脂蛋白脂酶、AST、ALT、IgA、IgM和IgG均顯著增加(P0.05)。與對照II組相比,HACAS組IgA顯著升高(P0.05)。HSCAS處理也使膽堿酯酶、VLDL、脂肪酶、ALT比對照II組有降低趨勢(P0.05),AST水平顯著降低(P0.05)。這表明飼糧添加2%魚油或菜籽油可降低血清脂質(zhì),添加0.3%的強(qiáng)百士可以改善朗德鵝的血清參數(shù),提高填飼鵝免疫狀態(tài)。2.油脂和強(qiáng)百士對填飼朗德鵝肝臟脂肪沉積的影響本試驗研究不同油脂及強(qiáng)百士對填飼鵝肝臟脂肪沉積和屠宰性狀,及4種不同油脂對肥肝脂肪酸組成的影響。結(jié)果表明:1)菜籽油組和牛油組的肝重高于魚油組,牛油組肝體比顯著高于鵝油組(P0.05)。2)菜籽油組和鵝油組的活重、全凈膛重均顯著高于牛油和魚油組(P0.05);3)添加魚油降低了總飽和脂肪酸(SFA)含量,提高了不飽和脂肪酸(UFA)C16:1、C17:1、C18:1、C18:2、C1 8:3、C20:1、C20:4、C20:5、C22:1、C22:5、C22:6、C24:1 及總 UFA 含量(P0.05);添加菜籽油降低了 SFA含量,提高了 C16:1、C18:1、C18:2、C20:2、C22:1及UFA含量(P0.05);添加牛油提高了 C18:3,C20:1,C22:5,C22:6和總多不飽和脂肪酸(PUFA)含量(P0.05)。與對照I組比較,HSCAS組肝臟重量、肝體比、腹脂重和腸脂重均顯著增加(P0.05);與對照II組相比,HACAS組肝體比升高(P0.05)。這表明飼糧添加2%的菜籽油或牛油對朗德鵝產(chǎn)肝性能較佳,添加魚油和菜籽油可增加肥肝PUFA,但對生長性能沒有明顯影響,2%的牛油增加產(chǎn)肥肝性能,但脂肪沉積和生長性能相對較低。添加HSCAS對朗德鵝脂肪沉積和提高產(chǎn)肝性能有促進(jìn)作用。3.日糧鵝油和菜籽油調(diào)控填飼朗德鵝肝脂代謝的分子機(jī)制我們進(jìn)行了添加鵝油和菜籽油填飼的鵝之間的肝臟轉(zhuǎn)錄組比較,以探討介導(dǎo)脂肪生成活性的分子和細(xì)胞事件。在營養(yǎng)添加試驗第28天采集對照組、2%鵝油組(GF)和2%菜籽油組(RO)朗德鵝肝臟組織(每欄1只,每組共3只),提取肝臟總mRNA,反轉(zhuǎn)錄,并基于轉(zhuǎn)錄組測序序列進(jìn)行DGE分析。3個組共構(gòu)建9個DGE數(shù)據(jù)庫,平均每個DGE產(chǎn)生12 M clean reads,其中50-56.7%能注釋到鵝參考基因組中。與對照組相比,分別在GF和RO組檢測到1290和1419個差異表達(dá)基因(DEGs)。與GF組相比,RO組鵝脂肪肝中有124個上調(diào)和129個下調(diào)的差異表達(dá)基因。其中涉及脂質(zhì)代謝過程的包括溶質(zhì)載體家族基因(SLC2A2,SLC2A5,SLC5A9 上調(diào),細(xì)胞色素 P450 家族(CYP450 1A4 CYP4502K1,CYP450 2C19)均下調(diào),以及ELOVL脂肪酸延長酶家族(ELOVL1,ELOVL2,ELOVL3)和ATP結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運蛋白家族(ABCA1,ABCB4,ABCC2 ABCG5,ABCG8)。一些涉及脂肪酸生物合成的DEGs如SCD1,ACACA和ACSBG2也受到調(diào)控;具有促凋亡和抗凋亡作用,包括上調(diào)的caspase-7和BCL2A1,下調(diào)的TNFRSF17和GAS2L3;與氧化應(yīng)激相關(guān)基因,如PEX11A,SOD1,DAO,CRAT和CROT,被下調(diào);此外,RO還調(diào)控了類固醇和類固醇激素生物合成有關(guān)的基因表達(dá)。這表明添加不同油脂填飼的鵝脂肪肝承擔(dān)氧化功能和激素相關(guān)代謝功能。總之,這些數(shù)據(jù)表明添加RO可以減少肝臟脂質(zhì)氧化并改善脂肪生成。這些發(fā)現(xiàn)提供了有關(guān)脂肪肝形成的分子機(jī)制的新見解,并為分析不同來源的油脂對鵝脂肪肝影響的機(jī)制提供了有價值的資源。4.油脂和強(qiáng)百士對朗德鵝肝臟和腸黏膜形態(tài)的影響試驗鵝分為對照組、油脂處理組和強(qiáng)百士組,分別飼喂基礎(chǔ)飼糧和基礎(chǔ)飼糧+2%鵝油,牛油,魚油,菜籽油或0.3%強(qiáng)百士進(jìn)行填飼,強(qiáng)百士試驗對照I為非填飼對照,以2%鵝油組為填飼對照(對照II),實驗周期為27d。以肝臟組織和3個腸道部位(十二指腸、空腸和回腸)組織為研究對象,通過組織染色檢測不同油脂及強(qiáng)百士對朗德鵝肝臟和腸道黏膜形態(tài)的影響。油脂處理組中,魚油組細(xì)胞密度顯著高于牛油和菜籽油組(P0.05);牛油和鵝油組細(xì)胞面積高于魚油和菜籽油組(P0.05)。與鵝油組相比,牛油顯著降低十二指腸、空腸和回腸VH、VH/CD(P0.05);魚油組顯著降低十二指腸VH,空腸VH、CD(P0.05);菜籽油組對各腸段腸道形態(tài)影響不顯著(P0.05)。強(qiáng)百士組肝細(xì)胞面積高于對照I組(P0.05),低于對照II組(P0.05),細(xì)胞完整性較好。與對照I組比較,HSCAS組絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度升高(P0.05)。與對照II組相比,HACAS組隱窩深度降低(P0.05)。本試驗表明,牛油組和鵝油組肝細(xì)胞較大,脂肪沉積較多�；啬c具有良好的腸道形態(tài),是鵝進(jìn)行消化吸收的主要部位。日糧添加2%牛油整體上對腸道形態(tài)造成了不利影響,魚油、菜籽油則有較好的效果。添加0.3%強(qiáng)百士改善了填飼鵝的腸道形態(tài),利于飼料消化吸收,具有較好肝臟組織形態(tài),從而促進(jìn)填飼鵝的產(chǎn)肝性能。5.油脂和強(qiáng)百士對填飼朗德鵝腸道微生物的影響以朗德鵝2個腸道部位回腸和盲腸的內(nèi)容物為研究對象,通過16S rDNA V4區(qū)測序技術(shù)檢測微生物群落的差異,研究基礎(chǔ)日糧添加2%不同油脂及強(qiáng)百士對腸道微生物群落的影響。16S rDNA V4區(qū)測序所獲得Clean Tags共分為3,891個OTUs,獲得 412 個屬�；啬c所獲 OTUs(operational taxonomic units)數(shù)目較少,而盲腸獲得更多OTUs;不同處理組中,回腸菜籽油組OTUs數(shù)量最高,魚油組最少,盲腸鵝油和牛油組OTUs數(shù)量較高,魚油組最少。α多樣性分析表明盲腸比回腸微生物豐富。菜籽油顯著提高了回腸微生物多樣性,魚油能夠提高盲腸微生物多樣性,而牛油、鵝油和菜籽油降低盲腸微生物多樣性。通過對乳桿菌屬(Lactobacillus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、埃希氏菌屬(Escherichia)、嗜膽菌屬(Bilophila wadswoorhia)、柔嫩梭菌屬(Faecalibaacterium)和巨單胞菌屬(Megamonas)的進(jìn)一步LefSe(linear discriminant analysis coupled with effect size)分析發(fā)現(xiàn),添加油脂增加了與脂肪消化吸收相關(guān)的細(xì)菌豐度,盲腸相關(guān)微生物數(shù)量最多。添加HSCAS增加了回腸乳酸桿菌(Lactobacillus)的相對豐度,并且降低了中放線桿菌(Actinobacillus)的相對豐度以及盲腸中Erysipelotrichi,擬桿菌(Bacteroides)和埃希氏菌(Escherichia)的相對豐度。添加HSCAS后,回腸和盲腸中的細(xì)菌多樣性指標(biāo)也有所增加�？傊�,日糧添加2%牛油、鵝油降低了腸道微生物多樣性,整體上對腸道微生物結(jié)構(gòu)造成了不利影響,魚油、菜籽油有利于提高有益微生物豐度,具有較好的效果。添加0.3%HSCAS對朗德鵝的腸道微生物群組成具有改善作用,增加有益菌、降低有害菌的相對豐度,從而有利于提高填飼鵝的產(chǎn)肝性能。本試驗為了解朗德鵝不同腸道部位微生物組成提供了可靠依據(jù),并為研究不同油脂及強(qiáng)百士在填飼鵝生產(chǎn)中的添加效果提供了腸道的研究基礎(chǔ)。本文較全面的研究了基礎(chǔ)日糧添加不同油源對朗德鵝消化系統(tǒng)、產(chǎn)肝性能和脂類代謝的影響,結(jié)果表明日糧添加菜籽油或牛油朗德鵝產(chǎn)肝性能較好,魚油和菜籽油能顯著增加肥肝PUFAs含量降低血清脂質(zhì);日糧添加2%鵝油和2%菜籽油在肝臟轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控有所不同,菜籽油減少肝臟脂質(zhì)氧化并增加脂肪和類固醇生成基因表達(dá);日糧添加2%魚油、菜籽油對朗德鵝腸道形態(tài)和微生物區(qū)系效果較好。添加HSCAS對填飼朗德鵝的產(chǎn)肝、腸道發(fā)育和血清指標(biāo)有益,同時改善了腸道微生物群組成,可以促進(jìn)填飼鵝的健康狀態(tài)。后期還需進(jìn)行鵝肥肝的風(fēng)味評定及細(xì)胞水平實驗來驗證不同脂肪酸的效果。不同油源在鵝養(yǎng)殖業(yè)中的效果還有待結(jié)合營養(yǎng)價值和經(jīng)濟(jì)成本等指標(biāo)進(jìn)行進(jìn)一步的評價。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S835
【圖文】：

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文邐第一章ＳＲＥ依賴性基因的ＰＵＦＡｓ抑制丨１２６＇｜２７】。在大鼠體內(nèi)實驗觀察到涉及ＳＰＵＦＡｓ介導(dǎo)的抑制脂肪生成基因表達(dá)。另外，實驗表明，ＰＵＦＡｓ介導(dǎo)基因的抑制發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平，可能在ｍＲＮＡ穩(wěn)定水平鑒于體察，假定ＰＵＦＡｓ通過抑制ＳＲＥＢＰ－１的表達(dá)以及其成熟來協(xié)調(diào)抑制肝（圖邋１＿１）。逡逑

ｗＬ：ｐ邋ｊｒｖ逡逑ｔ＾ｒ逡逑哪、媭，逡逑圖１．１邋ＰＵＦＡｓ和膽固醇的脂質(zhì)調(diào)節(jié)途徑。來自食物或膜磷脂（ｍＰＬ）的ＰＵＦＡｓ在轉(zhuǎn)錄逡逑后水平上獨立地抑制ＳＲＥＢＰ邋ｍＲＮＡ的表達(dá)。此外，ＰＵＦＡｓ和膽固醇通過ＳＲＥＢＰ的切逡逑割活化蛋白（ＳＣＡＰ）抑制固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（ＳＲＥＢＰ）的成熟，否則其將從內(nèi)質(zhì)逡逑網(wǎng)（ＥＲ）轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中以激活轉(zhuǎn)錄通過結(jié)合固醇調(diào)節(jié)元件（ＳＲＥ）的脂肪生成基因。逡逑圖片引自Ｎｔａｍｂｉ邋ＪＭ邋（２０００）丨７２】。逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｐａｔｈｗａｙｓ邋ｏｆ邋ｌｉｐｏｇｅｎｉｃ邋ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ邋ｂｙ邋ＰＵＦＡ邋ａｎｄ邋ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ．邋ＰＵＦＡｓ邋ｅｉｔｈｅｒ邋ｆｒｏｍ逡逑ｔｈｅ邋ｄｉｅｔ邋ｏｒ邋ｍｅｍｂｒａｎｅ邋ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ邋（ｍＰＬ）邋ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ邋ｒｅｐｒｅｓｓ邋ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ逡逑ＳＲＥＢＰ邋ｍＲＮＡ邋ａｔ邋ａ邋ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ邋ｌｅｖｅｌ．邋Ｉｎ邋ａｄｄｉｔｉｏｎ，邋ＰＵＦＡｓ邋ａｎｄ邋ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ邋ｒｅｐｒｅｓｓ邋ｔｈｅ逡逑ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｓｔｅｒｏｌ邋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ邋ｅｌｅｍｅｎｔ邋ｂｉｎｄｉｎｇ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋（ＳＲＥＢＰ），邋ｖｉａ邋ｔｈｅ邋ＳＲＥＢＰ逡逑ｃｌｅａｖａｇｅ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋（ＳＣＡＰ）

＝０．４８２邋Ｕ／Ｌ。逡逑２．２．３邋ＨＳＣＡＳ對填飼期朗德鵝血清免疫球蛋白的影響逡逑如圖２．１所示，ＨＳＣＡＳ組的免疫球蛋白ＩｇＡ，邋ＩｇＧ和ＩｇＭ水平最高，均顯逡逑著高于對照組Ｉ邋（／＾Ｏ．Ｏ〗）。ＨＳＣＡＳ組的ＩｇＡ水平顯著高于對照組ＩＩ邋（Ｐ＜０．０５），逡逑兩組間ＩｇＧ和ＩｇＭ水平無顯著差異（作０．０５）。逡逑２５－１邐３逡逑ｔ邐＿邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｉ逡逑２０－邐ａ邋Ｍｊ邐＿邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ＩＩ逡逑Ｔ邋■邐■■邋ＨＳＣＡＳ逡逑ｌ：：Ｌ＿邋＾逡逑＃邋＃邋、＃逡逑圖２．１添加ＨＳＣＡＳ對填飼朗德鵝血清免疫球蛋白的影響相同指標(biāo)的柱狀圖具逡逑有不同小寫字母上標(biāo)表示差異顯著（ｐ＜0．0５）。逡逑４４逡逑

本文編號：2767481