【摘要】：旨在建立簡(jiǎn)單、快速的檢測(cè)體外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法。本研究以含有T7啟動(dòng)子、VC2GEMM-1核糖開(kāi)關(guān)序列或其突變序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的雙鏈DNA為模板,利用T7RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄體系制備VC2、VC2/g20aRNA適配體。通過(guò)檢測(cè)綠色熒光強(qiáng)度分析RNA適配體對(duì)c-di-GMP和cGAMP的結(jié)合能力。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)錄得到的RNA經(jīng)過(guò)加熱變性、緩慢退火后得到VC2RNA適配體和VC2/g20a RNA適配體,在125mmol·L~(-1 )KCl和30mmol·L~(-1 )MgCl_2溶液中孵育180min的優(yōu)化結(jié)合條件下,VC2適配體與c-di-GMP特異性結(jié)合,VC2/g20a適配體與cGAMP特異性結(jié)合;c-di-GMP對(duì)VC2適配體的半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50)為(89±1.7)nmol·L~(-1),cGAMP對(duì)VC2/g20a適配體的半數(shù)效應(yīng)濃度為(309±4.5)nmol·L~(-1);VC2和VC2/g20a能夠分別檢測(cè)低至5nmol·L~(-1)和20nmol·L~(-1)的c-di-GMP和cGAMP;并且發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄的RNA混合物在未純化的情況下同樣能夠檢測(cè)VC0179體外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP。這種方法可以簡(jiǎn)單快速的檢測(cè)VC0179體外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP,并且為研究其他c-di-GMP和cGAMP合成酶活性提供潛在可能。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱彥策;孔江南;陳慧心;鐘凱;張超;;基于RNA適配體檢測(cè)體外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2018年10期

2 李敏思;宋戰(zhàn)昀;馮新;楊倩;鄭言;魏春艷;王偉利;王振國(guó);付小平;;新城疫病毒血凝素蛋白R(shí)NA適配體的篩選及活性研究[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年03期

3 ;中科大篩選出特異針對(duì)點(diǎn)突變蛋白的適配體[J];中國(guó)科學(xué)院院刊;2015年05期

4 許濤;彭智輝;王澤峰;周佳琪;鄧樂(lè);;核酸適配體篩選技術(shù)研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2018年01期

5 李亞楠;趙潔;張傲哲;譚琰;華茜;張子劍;;核酸適配體的體外篩選方法的最新研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2017年04期

6 胡濤;楊帆;楊秀榮;;雙偏振極化干涉技術(shù)實(shí)時(shí)研究三磷酸腺苷與其適配體相互作用[J];分析化學(xué);2017年07期

7 劉洪美;欒云霞;陸安祥;陳佳yN;李成;王紀(jì)華;;核酸適配體在小分子目標(biāo)物快速檢測(cè)中的應(yīng)用[J];食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào);2017年08期

8 陳爾凝;趙新穎;屈鋒;;細(xì)菌的核酸適配體篩選的研究進(jìn)展[J];色譜;2016年04期

9 ;生物分析中的核酸適配體[J];分析化學(xué);2012年05期

10 申睿;唐吉軍;張朝陽(yáng);郭磊;謝劍煒;;基于磁珠分離的酶聯(lián)適配體檢測(cè)痕量蛋白質(zhì)的新型比色分析方法[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張雋佶;田禾;龍億濤;;運(yùn)用單分子納米孔檢測(cè)螺吡喃光調(diào)控RNA適配體行為[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第30屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集-第二十一分會(huì)：π-共軛材料[C];2016年

2 屈鋒;楊歌;魏強(qiáng);胡猷浩;;核酸適配體三維度篩選策略初探[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)生物醫(yī)藥色譜及相關(guān)技術(shù)學(xué)術(shù)交流會(huì)（材料分析與其它分會(huì)）論文摘要集[C];2016年

3 王開(kāi)宇;林建敏;蘭小鵬;;基于適配體莖環(huán)開(kāi)關(guān)和鏈置換放大技術(shù)的鉛離子熒光適配體傳感器[A];第六屆中國(guó)臨床微生物學(xué)大會(huì)暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2015年

4 林雪霞;林金明;;可控核酸適配體-芯片毛細(xì)管電泳用于細(xì)胞代謝物的研究[A];第二十屆全國(guó)色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)及儀器展覽會(huì)論文集（第二分冊(cè)）[C];2015年

5 上官棣華;邴濤;劉祥軍;乞萃;梅宏成;張楠;常天俊;楊曉娟;;用于高選擇性分離分析的核酸適配體研究[A];中國(guó)分析測(cè)試協(xié)會(huì)科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)發(fā)展回顧[C];2015年

6 王梁華;胡波;鄭欣;高順祥;劉德婧;孫銘娟;焦炳華;;建立海洋生物毒素適配體篩選與優(yōu)化技術(shù)平臺(tái)[A];全國(guó)第九屆海洋生物技術(shù)與創(chuàng)新藥物學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2014年

7 陳巍;趙新穎;屈鋒;;毛細(xì)管電泳法篩選蛋白質(zhì)的核酸適配體的初步研究[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

8 馬文韜;古力;屈鋒;;毛細(xì)管電泳篩選大腸桿菌適配體的初步研究[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

9 楊曉娟;邴濤;梅宏成;上官棣華;;核酸適配體用于手性拆分L型和D型色氨酸[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

10 蔡圣;劉彩云;盧建忠;;基于核酸適配體和酶循環(huán)放大的腺苷化學(xué)發(fā)光檢測(cè)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)發(fā)光分析學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 耿挺;RNA剪接基因編輯新方法[N];上�？萍紙�(bào);2018年

2 記者 聶翠蓉;基因檢測(cè)“神探夏洛克”問(wèn)世[N];科技日?qǐng)?bào);2017年

3 本報(bào)記者 聶翠蓉;讓RNA處理器在活細(xì)胞中“奔騰”[N];科技日?qǐng)?bào);2017年

4 記者 張小軍;RNA：被忽視的“遺傳信使”[N];新華每日電訊;2002年

5 記者 聶翠蓉;細(xì)胞“垃圾”也能變廢為寶[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

6 馮衛(wèi)東　王小龍;英在地球早期環(huán)境模擬條件下合成類RNA[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

7 張巍巍;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)首個(gè)細(xì)菌中的RNA修復(fù)系統(tǒng)[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

8 記者 吳苡婷;揭示DNAzyme剪切RNA的分子機(jī)制[N];上�？萍紙�(bào);2017年

9 記者 葉青 通訊員 黃博純;分離RNA結(jié)合蛋白有了新技術(shù)[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

10 記者 劉海英;借助RNA，海兔之間記憶成功轉(zhuǎn)移[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姜紅巖;自組裝RNA適配體納米傳感器[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

2 陳秋霞;大腸桿菌高表達(dá)攜帶功能性小RNA的重組RNA方法的建立[D];浙江大學(xué);2015年

3 付萍;牛支原體單克隆抗體、核酸適配體的篩選及應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 安紅柳;禽傳染性支氣管炎病毒非編碼RNA的形成機(jī)制及其生物學(xué)功能[D];長(zhǎng)江大學(xué);2018年

5 謝睦南;小RNA在水稻適應(yīng)環(huán)境脅迫及馴化過(guò)程中對(duì)靶基因表達(dá)的調(diào)控[D];中山大學(xué);2015年

6 侯毅楓;RNA結(jié)合蛋白HLP1與HLP2調(diào)控?cái)M南芥開(kāi)花時(shí)間的分子機(jī)理研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 黃捷;RNA結(jié)合蛋白在基因轉(zhuǎn)錄、剪接及miRNA反饋回路中調(diào)控的信息學(xué)研究[D];武漢大學(xué);2014年

8 王德亞;煙草叢頂病毒不依賴帽子翻譯機(jī)制的RNA結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)與分子進(jìn)化[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

9 黨穎;小干涉RNA遞送方法的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

10 曹國(guó)軍;1、重組人TNF-α具有體外RNA伴侶分子活性研究　2、Argonaute蛋白參與miRNA作用過(guò)程的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李敏思;新城疫病毒RNA適配體的篩選及活性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 謝青云;基于RNA的第二信使電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建與運(yùn)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 王雨晴;Endoglin適配體篩選鑒定與體內(nèi)成像研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王宇田;腸出血性大腸桿菌O157:H7適配體篩選與應(yīng)用研究[D];軍事科學(xué)院;2018年

5 馬芹;水貂阿留申病毒VP2蛋白適配體的篩選與初步應(yīng)用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

6 趙海杰;胰蛋白酶核酸適配體篩選及胰蛋白酶固定化新方法研究[D];青島科技大學(xué);2017年

7 蔡淑賢;基于核酸適配體的熒光和電化學(xué)方法用于小分子和細(xì)胞的檢測(cè)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2016年

8 高婕;基于適配體的酶分子檢測(cè)新方法[D];山西大學(xué);2014年

9 焦美會(huì);兔出血癥病毒特異性核酸適配體的篩選[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2017年

10 李亞軍;胃泌素釋放肽前體31-98片段核酸適配體的研究及其傳感器的構(gòu)建[D];鄭州大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2767395