定性和定量分析磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉中的未知添加物
【圖文】：
嗪鈉可溶性粉，加入80ｍＬ50％（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇，超聲5ｍｉｎ，冷卻至室溫，置于100ｍＬ量瓶中，用50％甲醇稀釋至100ｍＬ，搖勻。精密量取5ｍＬ上述溶液置于50ｍＬ容量瓶中，用50％甲醇定容，作為ＨＰＬＣ－ＤＡＤ確證溶液。精密量取上述溶液5ｍＬ置于50ｍＬ容量瓶中，用50％甲醇定容，作為ＵＨＰＬＣ－Ｑ／ＴＯＦＭＳ篩查和確證溶液。1．3．2對照品溶液的制備分別取適量磺胺二甲嘧啶、乙酰甲喹、磺胺氯吡嗪鈉對照品，用50％甲醇溶解并稀釋成10ｍｇ／Ｌ的溶液，供ＨＰＬＣ－ＤＡＤ驗證用。用50％甲醇稀釋成圖1（ａ）某實際樣品和（ｂ）合格樣品的滴定曲線Ｆｉｇ．1Ｔｉｔｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｏｆ（ａ）ａｒｅａｌｓａｍｐｌｅａｎｄ（ｂ）ａｑｕａｌｉｆｉｅｄｓａｍｐｌｅ100μｇ／Ｌ的溶液，供ＵＨＰＬＣ－Ｑ／ＴＯＦＭＳ確證用。2結(jié)果與討論2．1未知物的發(fā)現(xiàn)和初步分析參照《中國獸藥典》［22］用電位滴定法對該批磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉樣品進(jìn)行含量檢測時，無法滴定至終點，且與合格樣品的滴定曲線差異甚大（見圖1）。進(jìn)行兩項鑒別時，芳香第一胺類試驗鑒別合格，但薄層色譜鑒別中對照品溶液與供試品溶液的斑點位置和顏色有極微小差別，鑒別不合格。推測樣品中含其他磺胺類藥物，也可能含有其他非法添加物。2．2未知物的推斷使用ＵＨＰＬＣ－Ｑ／ＴＯＦＭＳ對該批樣品進(jìn)行一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集，圖2ａ為總離子流色譜圖（ＴＩＣ），在5.366和5.668ｍｉｎ有2個明顯的峰，對峰1和峰2分別進(jìn)行質(zhì)譜提取，檢測到在ｍ／ｚ279.0907和219.0765兩處響應(yīng)明顯更強（見圖2ｂ和圖2ｃ）。因鑒別試驗中有芳香第一胺類反應(yīng)，樣品中含有磺胺類藥物的概率較大。首先在磺胺類藥物ＰＣＤＬ庫中進(jìn)行匹配；發(fā)現(xiàn)磺胺二甲嘧啶和磺?
液，供ＵＨＰＬＣ－Ｑ／ＴＯＦＭＳ確證用。2結(jié)果與討論2．1未知物的發(fā)現(xiàn)和初步分析參照《中國獸藥典》［22］用電位滴定法對該批磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉樣品進(jìn)行含量檢測時，無法滴定至終點，且與合格樣品的滴定曲線差異甚大（見圖1）。進(jìn)行兩項鑒別時，芳香第一胺類試驗鑒別合格，但薄層色譜鑒別中對照品溶液與供試品溶液的斑點位置和顏色有極微小差別，鑒別不合格。推測樣品中含其他磺胺類藥物，也可能含有其他非法添加物。2．2未知物的推斷使用ＵＨＰＬＣ－Ｑ／ＴＯＦＭＳ對該批樣品進(jìn)行一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集，圖2ａ為總離子流色譜圖（ＴＩＣ），在5.366和5.668ｍｉｎ有2個明顯的峰，對峰1和峰2分別進(jìn)行質(zhì)譜提取，檢測到在ｍ／ｚ279.0907和219.0765兩處響應(yīng)明顯更強（見圖2ｂ和圖2ｃ）。因鑒別試驗中有芳香第一胺類反應(yīng)，樣品中含有磺胺類藥物的概率較大。首先在磺胺類藥物ＰＣＤＬ庫中進(jìn)行匹配；發(fā)現(xiàn)磺胺二甲嘧啶和磺胺二甲異嘧啶的［Ｍ＋Ｈ］＋與ｍ／ｚ279.0907匹配，兩者的分子式均為Ｃ12Ｈ14Ｎ4Ｏ2Ｓ，但磺胺二甲異嘧啶的出峰時間為4.771ｍｉｎ，與供試品不匹配，而磺胺二甲嘧啶出峰時間為5.334ｍｉｎ，與供試品匹配，推測該化合物為磺胺二甲嘧啶。另一個離子在已經(jīng)建立的一級數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行匹配，發(fā)現(xiàn)乙酰甲喹的［Ｍ＋Ｈ］＋與ｍ／ｚ219.0765匹配，且保留時間一致，匹配分?jǐn)?shù)為98.26，推測該化合物為乙酰甲喹。圖2（ａ）樣品總離子流色譜圖及（ｂ）峰1和（ｃ）峰2的質(zhì)譜提取圖Ｆｉｇ．2（ａ）Ｔｏｔａｌｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆｔｈｅｓａｍｐｌｅａｎｄｍａｓｓｓｐｅｃｔｒａｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍ（ｂ）ｐｅａｋ1ａｎｄ（ｃ）ｐｅａｋ22．3未知物的確證2．3．1ＵＨＰＬＣ
第5期包愛情，等：定性和定量分析磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉中的未知添加物圖3磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉中疑似化合物的二級質(zhì)譜圖Ｆｉｇ．3ＭＳ／ＭＳｓｐｅｃｔｒａｏｆｔｈｅｓｕｓｐｅｃｔｅｄｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｓｕｌｆａｃｈｌｏｒｐｙｒａｚｉｎｅｓｏｄｉｕｍｓｏｌｕｂｌｅｐｏｗｄｅｒ甲喹的精確［Ｍ＋Ｈ］＋）為母離子進(jìn)行二級質(zhì)譜采集的譜圖。另取磺胺二甲嘧啶和乙酰甲喹對照品溶液（100μｇ／Ｌ）在相同的條件下采集二級質(zhì)譜。對照品圖譜與供試品圖譜幾乎完全一致，匹配值高達(dá)99.26和99.58，表明非法添加的化合物為磺胺二甲嘧啶和乙酰甲喹。2．3．2ＨＰＬＣ－ＤＡＤ確證在液相保留時間和紫外光譜兩方面將樣品與對照品進(jìn)行比對。通過不同濃度本底添加峰純度檢查和光譜相似度檢查對樣品中的未知物進(jìn)行確證。樣品在該試驗條件下檢出2個較大的未知色譜峰，與該條件下乙酰甲喹和磺胺二甲嘧啶對照品的保留時間一致，紫外光譜相似；同時發(fā)現(xiàn)該批樣品中未檢出標(biāo)示的磺胺氯吡嗪鈉（見圖4）。不同濃度（取與供試品溶液峰面積相當(dāng)?shù)膶φ掌啡芤号c之混合，對照品溶液與供試品溶液按體積比1∶4、1∶1和4∶1混合）的本底添加試驗峰純度檢查結(jié)果顯示：添加前后，樣品色譜圖相應(yīng)位置上的色譜峰純度值大于純度閾值，為單一物質(zhì)峰。光譜相似度檢查結(jié)果顯示：添加前后，樣品色譜圖相應(yīng)位置上色譜峰的光譜匹配度高于匹配閾值，與對照品的光譜相似。驗證結(jié)果及峰純度檢查、光譜相似度檢查結(jié)果見表1。2．4含量測定經(jīng)上述ＵＨＰＬＣ－Ｑ／ＴＯＦＭＳ和ＨＰＬＣ－ＤＡＤ雙重驗證，確證供試品中含有乙酰甲喹和磺胺二甲嘧啶，這兩種非法添加物在農(nóng)業(yè)部2448號公告［23］中均已涉及。公告中氟喹諾酮類制劑中非法添加乙酰圖4（ａ）混合對照?
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