發(fā)布時間：2020-07-20 12:37

【摘要】：目的:副結(jié)核病又稱約翰病,是由副結(jié)核分枝桿菌引起牛、羊、馬鹿等反芻動物的一種漸進(jìn)性消瘦和肉芽腫腸炎為主要特征的傳染病。目前,我國馬鹿的存欄約13萬頭,主要有3個品種,分布在塔里木河流域的塔河馬鹿是其中之一,養(yǎng)鹿業(yè)已成為當(dāng)?shù)匦竽翗I(yè)發(fā)展的重要組成。但由于管理環(huán)節(jié)的缺失和防疫意識的淡薄,導(dǎo)致以腹瀉、消瘦為主要特征的各種疫病高發(fā),發(fā)病原因與副結(jié)核感染有關(guān),但尚未進(jìn)行相關(guān)的深入研究。為此,本研究以塔河馬鹿為對象,進(jìn)行以下方面研究:方法:采用現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查的方法,收集塔河流域某馬鹿養(yǎng)殖場的環(huán)境、氣候、病史等現(xiàn)場資料,查找可能的傳染源及傳播途徑;采集塔河流域5個鹿場共214份公鹿血清,采用ELISA方法調(diào)查副結(jié)核病的感染現(xiàn)狀;分別無菌采集疑似副結(jié)核病感染的2頭馬鹿腸內(nèi)容物和腸系膜淋巴結(jié),去污處理后接種于卵黃培養(yǎng)基中進(jìn)行病原的分離純化;采用生理生化、培養(yǎng)特性結(jié)合16S rRNA、IS900的PCR擴(kuò)增進(jìn)行種的鑒定,同時擴(kuò)增DMC、IS1311基因進(jìn)行亞型鑒定;選擇最適的培養(yǎng)基并優(yōu)化細(xì)菌培養(yǎng)方法;以BALB/c小鼠為試驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行動物回歸試驗(yàn)。結(jié)果:試驗(yàn)一塔河馬鹿副結(jié)核病的現(xiàn)場和血清流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn),鹿場內(nèi)奶牛是可能的傳染源,糞口途徑為主要的傳播途徑;鹿場間為公鹿的引種更換;血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,5個試驗(yàn)鹿場均有副結(jié)核病的感染,其總陽性率為7.01%(15/214),最高為11.32%(6/53),最低為2.70%(1/37)。試驗(yàn)二副結(jié)核分枝桿菌的分離鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化從腸內(nèi)容物中分離到一株副結(jié)核分枝桿菌,將該菌命名為MAPxj-RD。通過細(xì)菌培養(yǎng)查明了MAPxj-RD的生物學(xué)特性,16S rRNA、IS900、DMC、IS1311與保護(hù)性抗原基因檢測均為陽性,兩種亞型鑒定方法均顯示分離株為C型副結(jié)核分枝桿菌;最適培養(yǎng)基為卵黃培養(yǎng)基;HPC去污比HPC和抗生素共同去污更容易分離到副結(jié)核分枝桿菌;初代接種物二次盲傳后具可分離到副結(jié)核分枝桿菌;當(dāng)液深4 mm時細(xì)菌生長速度更快。試驗(yàn)三副結(jié)核分枝桿菌MAPxj-RD的動物試驗(yàn)動物試驗(yàn)表明,小鼠體重在試驗(yàn)周期中呈上升趨勢,而檢測糞便后未發(fā)現(xiàn)副結(jié)核分枝桿菌;使用優(yōu)化的培養(yǎng)方法從小鼠的肝臟中成功分離到MAPxj-RD;病理切片經(jīng)抗酸染色與HE染色后均發(fā)現(xiàn)MAPxj-RD的存在,且引起了與副結(jié)核病相似的病理變化;經(jīng)PCR檢測發(fā)現(xiàn)每只小鼠臟器中均有MAPxj-RD,腸組織中檢出率最高,為100%(6/6),腎臟最低,為16.67%(1/6)。結(jié)論:綜上,副結(jié)核病在塔河流域的鹿場已普遍存在,自然環(huán)境與鹿場環(huán)境極利于副結(jié)核病的傳播,該病已成為鹿場的重要傳染病;分離到一株C型副結(jié)核分枝桿菌并命名為MAPxj-RD,查明了MAPxj-RD的生物學(xué)特性與分子特性;對細(xì)菌培養(yǎng)方法進(jìn)行了優(yōu)化,并證明該方法可提高分離成功率,縮短培養(yǎng)時間;動物試驗(yàn)證明MAPxj-RD具有較強(qiáng)的致病性,確為塔河馬鹿發(fā)病的致病菌。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S858.23
【圖文】：

MAPxj-RD單個菌落抗酸染色結(jié)果

MAPxj-RDIS900基因序列遺傳分析

MAPxj-RDIS900基因PCR電泳圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2763448