【摘要】：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一種人畜共患病原菌,該菌引起的兔壞死性肺炎,常常導(dǎo)致兔急性呼吸窘迫,伴胸腔積液、咯血并快速致死,給兔養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。盡管一些抗生素對(duì)兔壞死性肺炎具有一定的治療效果,但是金黃色葡萄球菌耐藥菌株的出現(xiàn)以及抗生素藥物殘留問(wèn)題,使得抗生素療法受到了限制。因此,急需尋找一種既能夠有效防治金黃色葡萄球菌感染引起的兔壞死性肺炎,又能在生產(chǎn)過(guò)程中提供無(wú)藥殘和安全健康的肉質(zhì)品的生物治療藥物。噬菌體是一類能夠感染細(xì)菌的病毒,它能夠侵入細(xì)菌細(xì)胞內(nèi),特異性殺死細(xì)菌,為防控金黃色葡萄球菌感染引起的疾病提供了一種有前景的替代療法。多項(xiàng)研究表明,噬菌體針對(duì)一些細(xì)菌感染具有很好的治療效果,反映了噬菌體用于治療的潛力。然而,目前噬菌體尚未用于預(yù)防和治療由金黃色葡萄球菌引起的兔壞死性肺炎感染。為了研究噬菌體是否對(duì)金黃色葡萄球菌引起的兔壞死性肺炎具有治療作用,本文進(jìn)行了一系列的研究。首先,從臨床獲得的患有壞死性肺炎的兔肺中分離鑒定了多株金黃色葡萄球菌。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明這些菌株具有多重耐藥性,主要對(duì)青霉素,紅霉素,氯霉素和氟喹諾酮類等抗生素具有抗性,但所有這些菌株對(duì)抗生素利奈唑胺敏感。隨后,利用其中一株金黃色葡萄球菌分離株S6作為宿主菌,從污水樣品中分離篩選出一株新的金黃色葡萄球菌噬菌體并將其命名為VB-Sav M-JYL01,并進(jìn)一步研究了噬菌體VB-Sav M-JYL01的主要生物學(xué)特性。噬菌體VB-Sav M-JYL01在TSB固體平板上形成圓形透明噬斑,直徑約為1-2 mm。透射電鏡下觀察噬菌體VB-Sav M-JYL01的形態(tài),結(jié)果顯示該噬菌體具有正二十面體的頭部和可伸縮的尾部,表明該噬菌體屬于肌尾噬菌體科。當(dāng)感染復(fù)數(shù)為0.01時(shí),噬菌體的效價(jià)達(dá)到最大值,約為9.8×109 PFU/m L。一步生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果顯示,噬菌體VB-Sav M-JYL01的潛伏期約為20 min,爆發(fā)量約為100 PFU/cell,表明該噬菌體具有高效的裂解活性。此外,噬菌體宿主譜測(cè)定結(jié)果顯示,該噬菌體有較寬的宿主譜,裂解率為75.7%(50/66)。噬菌體VB-Sav M-JYL01全基因組學(xué)研究表明,該噬菌體基因組全長(zhǎng)141,384 bp,含有219個(gè)開(kāi)放閱讀框,其中未發(fā)現(xiàn)與細(xì)菌毒力、抗生素抗性以及溶原生成相關(guān)基因,這為該噬菌體用于治療性研究奠定了基礎(chǔ)。本文進(jìn)一步評(píng)估了噬菌體VB-Sav M-JYL01對(duì)兔壞死性肺炎模型的治療效果。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,單次鼻內(nèi)給予3×109 PFU的噬菌體VB-Sav M-JYL01可在48 h有效提高兔存活率至90%(9/10),而通過(guò)PBS或利奈唑胺治療后的保護(hù)率分別為10%(1/10)和80%(8/10)。兔肺部菌落計(jì)數(shù)結(jié)果表明,噬菌體VB-Sav M-JYL01治療組在感染24 h后肺部菌載量為4.18×104 CFU/g,與PBS治療組(7.38×107 CFU/g)以及利奈唑胺治療組(3.12×105 CFU/g)相比顯著降低。此外,與PBS治療組相比,噬菌體VB-Sav M-JYL01能夠顯著改善肺組織損傷程度。同時(shí),噬菌體VB-Sav M-JYL01治療后的兔血液及肺泡灌洗液中的總蛋白、殺白細(xì)胞素(PVL)、α-毒素(Hla)以及相關(guān)細(xì)胞因子的含量顯著低于PBS處理組。以上研究結(jié)果表明,金黃色葡萄球菌噬菌體VB-Sav M-JYL01具有高裂解活性和寬宿主譜,且在體外和體內(nèi)均能有效的殺死金黃色葡萄球菌,該噬菌體在治療金黃色葡萄球菌感染以及作為防治金黃色葡萄球菌引起的兔壞死性肺炎方面具有很大的潛力。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.291
【圖文】：

定和藥敏試驗(yàn)分析系統(tǒng)色葡萄球的分離與鑒定劃線對(duì)菌株進(jìn)行了分呈金黃色。革蘭氏染色后藍(lán)紫色，形態(tài)呈葡萄串核糖核酸凝膠電泳結(jié)果 bp 位置處出現(xiàn)一條目的萄球菌，并依次將其命1，S12，S13，S14，S1，表明這 16 株分離的金

圖 1.2 顯微鏡下分離菌的顏色與形態(tài)r and morphology of the isolated bacteria u圖 1.3 分離菌 Gap 基因的 PCR 鑒定ig 1.3 PCR identification of isolate Gap g

第二篇 研究?jī)?nèi)容 第一章 兔壞死性肺炎金黃色葡萄球菌的分離、鑒定及 物敏感性測(cè)圖 1.2 顯微鏡下分離菌的顏色與形態(tài) 1.2 The color and morphology of the isolated bacteria under the micros

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