【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的母豬流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎等繁殖障礙和仔豬呼吸障礙癥狀的疾病。PRRSV可分為2個(gè)基因型,分別是以歐洲Lelystad virus毒株為代表的歐洲型(基因1型)和以美洲VR-2332為代表的美洲型(基因2型)。目前,國內(nèi)有關(guān)歐洲型PRRSV流行病學(xué)研究較少,為了了解歐洲型PRRSV在中國的流行情況,加強(qiáng)對歐洲型PRRSV的監(jiān)測十分重要。2016~2018年,本研究從全國350份疑似PRRSV感染的病料中檢測到5株歐洲型PRRSV,并命名為ZD1株、WK14株、WK141株、WG9株和HN7株。對這5株病毒進(jìn)行了全基因組序列分析及遺傳演化分析。核苷酸比對結(jié)果顯示,與美洲型參考株VR2332的全基因組核苷酸同源性為60.0%~60.4%,與歐洲型參考株Lelystad virus毒株核苷酸同源性為88.3%~88.9%。ZD1、WG9、HN7株與LNEU12株的核苷酸同源性最高分別為93.5%、93.3%、93.2%,WK14株與BJEU06-1核苷酸同源性最高為89.7%,WK141與NVDC-NM3核苷酸同源性最高為93.5%。Nsp2、ORF3和ORF4推導(dǎo)aa序列比對結(jié)果表明,本研究中ZD1株的ORF3提前26個(gè)aa終止,另外WK14、WK141、WG9和HN7株在ORF3的246位存在1個(gè)aa的缺失;WK14、WK141、WG9、HN7和ZD1株P(guān)RRSV在ORF4的66位皆存在1個(gè)aa的缺失;此外,這5株歐洲型PRRSV在Nsp2的357~360和411位分別存在4+1個(gè)aa的缺失。這種缺失或提前終止增加了歐洲型PRRSV的變異程度,然而這種變化對PRRSV生物學(xué)特性的影響尚不清楚。重組是造成PRRSV變異的主要原因之一,關(guān)于美洲型PRRSV發(fā)生重組的報(bào)道屢見不鮮,但目前為止關(guān)于歐洲型PRRSV重組現(xiàn)象的報(bào)道較少。重組分析表明,本研究分離的5株歐洲型PRRSV中,WK14是BJEU06-1和NVDC-FJ的重組病毒,重組區(qū)域位于第951~3251位堿基處;WK141是NVDCNM1-2011和HENZMD-10的重組病毒,重組區(qū)域位于7131~9111位堿基處。這種重組現(xiàn)象在歐洲型PRRSV中出現(xiàn)較少的原因比較復(fù)雜,推測可能與這類病毒株的特性有關(guān)。目前國內(nèi)針對PRRSV抗體檢測方法大多是針對N蛋白,但是歐洲型和美洲型PRRSV N蛋白血清抗體有交叉反應(yīng),無法通過檢測抗體來判斷歐洲型PRRSV在中國的流行情況,因此建立針對歐洲型PRRSV特異性抗體檢測方法有十分重要的意義。本研究以超離純化的PRRSV ZD1全病毒作為免疫原免疫小鼠,成功制備2株雜交瘤細(xì)胞株2C5和2C6。亞型鑒定表明,雜交瘤細(xì)胞2C5和2C6分泌的單克隆抗體重鏈均屬于IgG2a亞類,輕鏈為kappa鏈。雜交瘤細(xì)胞2C5和2C6培養(yǎng)上清和制備的腹水中抗體的IFA效價(jià)分別為1:320,1:16000和1:320,1:8000。IFA試驗(yàn)表明2C5和2C6能區(qū)分歐洲型和美洲型PRRSV,說明2C5和2C6具有較好的特異性。用純化的DV全病毒作為包被抗原,單克隆抗體2C5和2C6與病毒的結(jié)合可以被豬歐洲型PRRSV陽性血清阻斷。本研究制備的2C5和2C6單克隆抗體為建立特異性檢測歐洲型PRRSV抗體方法提供了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S858.28
【圖文】：

16圖 2.2 5 株歐洲型 PRRSV 與參考毒株的遺傳進(jìn)化樹(A) 基于 ORF7 基因的進(jìn)化樹 (B)基于 ORF5 基因的進(jìn)化樹(C) 基于全基因組序列的進(jìn)化樹 (D)基于 Nsp2 基因的進(jìn)化樹Fig. 2.1 Phylogenetic trees of 5 PRRSV isolates in this study and reference strains of genotype 1(A) The phylogenetic tree based on the complete genome. (B) The phylogenetic tree based on ORF5 gene.(C) The phylogenetic tree based on ORF7 gene. (D) The phylogenetic tree based on Nsp2 gene.注： 5 株歐洲型 PRRSV 分離株以藍(lán)色和 標(biāo)注，中國大陸提交的其他歐洲型 PRRSV 序列用紅色標(biāo)注，Note: Five EU-type PRRSV isolates were labeled by blue color and , while other reference European PRRSVsequences submitted by mainland China were labeled by red color.

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 歐洲型 PRRSV 的流行病學(xué)調(diào)查株 WK141 存在明顯的重組，WG9、ZD1、HN7 株歐洲型 PRRSV 均不存在重組。通過重組分析可以看出： WK14 為重組毒株，BJEU06-1 和 NVDC-FJ 提供來了重組片段，Simplot 顯示重組斷點(diǎn)位于 951 位和 3251 位堿基；WK141 重組毒株，NVDC-NM1-2011 和 HENZMD-10 為親本毒株，且重組斷點(diǎn)位于：7131 和 9111 位堿基處。

第的篩選疫的小鼠的脾細(xì)胞與 SP2/0 細(xì)眼觀察到明顯的細(xì)胞團(tuán)塊（如亞克隆，每次克隆的雜交瘤的亞克隆，直至所有亞克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系，最終隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，命名為2C6 能識別歐洲型 PRRSV D 等美洲型 PRRSV（如圖 3.4

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1 王躍生;關(guān)于歐洲型經(jīng)濟(jì)體制及問題的思考——試論“歐洲病”[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(哲學(xué)社會科學(xué)版);1996年06期

2 但忠;木萬福;龍洪進(jìn);蘇銀玲;楊長楷;楊龍;麻繼仙;李易蓉;;不同歐洲型黃瓜苗期耐熱性綜合評價(jià)[J];熱帶作物學(xué)報(bào);2016年12期

3 魯韋韋;唐泰山;姜平;張常印;王凱民;;歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法的建立[J];畜牧與獸醫(yī);2008年07期

4 沈倍崢,曹寶弟,胡繼軍;歐洲型黃瓜——碧玉的選育[J];長江蔬菜;2004年10期

5 左志梅;木萬福;但忠;楊龍;楊長楷;;20份歐洲型黃瓜種質(zhì)資源的半致死溫度與耐熱性研究[J];長江蔬菜;2016年22期

6 但忠;蘇銀玲;木萬福;袁建民;楊龍;李易蓉;;歐洲型黃瓜耐熱性綜合評價(jià)及耐熱種質(zhì)的篩選[J];北方園藝;2013年22期

7 莊金山;袁世山;張建武;;歐洲型PRRSV弱毒株全長基因組cDNA克隆的構(gòu)建與分析[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2008年08期

8 于古月;Mariela Scorttil;Cinta Prieto;Francisco J.Martínez-Lobo;Isabel Simarro;José M.Castro;;兩個(gè)商品PRRSV歐洲型改良式活疫苗在妊娠母豬上的使用效果[J];國外畜牧學(xué)(豬與禽);2007年02期

9 王曉豐;李玉峰;王先煒;王海燕;姜平;;1株抗歐洲型和美洲型PRRSV核衣殼蛋白單克隆抗體的制備與鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2010年12期

10 ;我國歐洲型藍(lán)耳病毒株感染趨增[J];畜禽業(yè);2012年07期

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5 許汪;杜壽文;鄭威;孫文超;魯會軍;李昌;金寧一;;歐洲型PRRSV VLP的構(gòu)建與制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第九次全國會員代表大會暨第十七次全國學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2017年

6 孫文超;任靜強(qiáng);溫樹波;趙權(quán);閻富龍;劉昊;陸飛;靖杰;魯會軍;金寧一;;歐洲型PRRSV ORF5蛋白的克隆及原核表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

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8 黃梅清;鄭敏;陳仕龍;車勇良;江斌;王隆柏;魏宏;周倫江;莊向生;陳少鶯;;歐洲株和美洲株P(guān)RRSV的理化特性和致病性比較[A];2012年福建省畜牧獸醫(yī)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

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1 本報(bào)記者 李紹元 李成生;武定興建“歐洲型”牧場[N];云南日報(bào);2000年

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1 任靜強(qiáng);美洲型、歐洲型PRRSV及PCV2基因工程疫苗構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2014年

2 張榮;基于反向遺傳平臺的套式病毒蛋白結(jié)構(gòu)與功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

3 李冰;遼寧地區(qū)歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法建立與流行情況調(diào)查[D];吉林大學(xué);2015年

4 張碩;豬繁殖與呼吸綜合征病毒分離株遺傳進(jìn)化分析及通用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測方法的建立和應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

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1 張文立;我國歐洲型PRRSV的流行病學(xué)調(diào)查與單克隆抗體的制備[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

2 莊金山;歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染性cDNA克隆的構(gòu)建[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

3 王曉豐;歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的原核表達(dá)與單克隆抗體的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 孫文超;歐洲型PRRSV基因工程疫苗的構(gòu)建及其實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 張戰(zhàn)峰;華東地區(qū)部分豬場豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[D];浙江大學(xué);2007年

6 解長占;歐洲型PRRSV重組腺病毒疫苗生產(chǎn)工藝及動物模型替代方法建立[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

7 趙日浪;同時(shí)檢測美洲型及歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒多重RT-PCR方法的建立與應(yīng)用[D];廣西大學(xué);2012年

8 馬偉;PRRSV-XJPRRSV1/03株結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆與序列分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

9 曹亮;歐洲型PRRSV重組腺病毒疫苗構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 韓繼成;歐洲型PRRSV、PCV2重組痘苗病毒候選疫苗規(guī)�；苽浼捌涿庖哐芯縖D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

本文編號：2756962