【摘要】：癢螨病是我國養(yǎng)兔業(yè)中的常見外寄生蟲病,其感染率約11.11%~70.00%。該病是由綿羊癢螨(兔亞種)(Psoroptes ovis var.cuniculi)寄生于兔的外耳道皮膚表面,以形成卷紙樣痂皮為主要臨床特征,可導(dǎo)致患兔消瘦,降低肉品質(zhì),甚至引起死亡,嚴(yán)重影響了養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展。隨著殺螨化學(xué)藥物耐藥性的不斷出現(xiàn)和人們對綠色食品需求的增加,需要尋求新的、綠色有效的癢螨病防控方法。金龜子綠僵菌(Metarhizium anislpliae)是一種廣泛用于防治農(nóng)林害蟲的生物殺蟲劑,已有研究證實(shí)其對癢螨具有離體致病能力,但是否對癢螨病具有臨床治療效果,及其對癢螨的致病機(jī)理尚不明確。因此本研究從離體和在體試驗(yàn)評價(jià)了金龜子綠僵菌對綿羊癢螨(兔亞種)的致病力,同時(shí)進(jìn)一步探討其致病機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1金龜子綠僵菌對綿羊癢螨(兔亞種)的致病力研究為研究金龜子綠僵菌對癢螨是否具有致病能力。采用4種不同濃度(6.14×107、6.14×108、6.14×109、6.14×1010個(gè)孢子/m L)的金龜子綠僵菌懸浮液對活性較好的綿羊癢螨(兔亞種)進(jìn)行離體殺螨觀察;以離體試驗(yàn)中篩選出的最佳殺螨濃度(109個(gè)孢子/m L)噴涂癢螨病患兔,同時(shí)以伊維菌素皮下注射組和無菌水噴涂組分別為陽性和陰性對照,治療后定期記錄各組的治療效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),金龜子綠僵菌對綿羊癢螨(兔亞種)有較高的離體殺蟲活性,且離體殺蟲效率與真菌懸浮液的濃度和作用時(shí)間成正相關(guān)性;在金龜子綠僵菌作用的第9d,109、1010個(gè)孢子/m L濃度組的螨蟲致死率分別是93.33%和100.00%。臨床治療試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),金龜子綠僵菌對兔癢螨病具有良好的臨床治療效果,治療后21d所有患兔全部治愈,治療效果與伊維菌素組相當(dāng)。結(jié)果表明,金龜子綠僵菌對綿羊癢螨兔亞種具有較高的致病力。2金龜子綠僵菌對綿羊癢螨(兔亞種)殺蟲機(jī)理的初步探究為了探究金龜子綠僵菌對綿羊癢螨(兔亞種)的殺蟲機(jī)理,本試驗(yàn)測定了經(jīng)金龜子綠僵菌(109個(gè)孢子/m L)處理1~7d的綿羊癢螨(兔亞種)谷光氨肽-s-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)、超氧化物歧化酶(SOD)氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)的m RNA轉(zhuǎn)錄水平及酶活性的變化。結(jié)果表明,金龜子綠僵菌組的GSTs、SOD、CAT m RNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的總體呈現(xiàn)先上升后降低的變化趨勢,而POD總體變化與對照組差異不大。綜合4種酶m RNA轉(zhuǎn)錄水平和酶活性的變化過程,說明金龜子綠僵菌的侵染對綿羊癢螨(兔亞種)產(chǎn)生毒害作用,且隨著金龜子綠僵菌侵染時(shí)間的增長,酶的合成逐漸受到抑制,蟲體趨向死亡。且金龜子綠僵菌對GSTs和SOD影響較大,GSTs和SOD在對抗金龜子綠僵菌時(shí)所起作用更為重要;其對POD和CAT影響較小,POD和CAT在對抗金龜子綠僵菌侵染時(shí)起到的作用較小。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S858.26
【圖文】：

6.14×1010個(gè)孢子/mL 濃度組，半數(shù)致死時(shí)間（LT50）為 4.26d～6.39d，且與無菌水白對照組相比，均具有極顯著差異性(P<0.01)（圖 2）。伊維菌素陽性對照組顯示出好的離體殺蟲活性，在作用的 12h 內(nèi)螨蟲死亡率即可將達(dá)到 100％。經(jīng)金龜子綠僵菌侵染的綿羊癢螨（兔亞種）均活動(dòng)能力變?nèi)�，螯肢成舒展�(fàn)睿榇顟B(tài)，蟲體在顯微鏡下觀察內(nèi)部成溶解透明狀態(tài)，最終走向死亡。伊維菌素作于綿羊癢螨（兔亞種）后，蟲體螯肢成卷曲狀，發(fā)生抽搐，最終趨向死亡。

圖 2 不同濃度金龜子綠僵菌孢子懸浮液對綿羊癢螨（兔亞種）的半數(shù)致死時(shí)間（平均值±）Fig. 2 LT50 of Metarhizium anisopliae spore suspensions (sporemL) against Psoroptesovis var. cuniculi (mean ± SE)注：*表示極顯著，P< 0.01。Note: * : P< 0.01.5.2 金龜子綠僵菌對癢螨病患兔具有較好的臨床治療效果臨床治療結(jié)果表明，金龜子綠僵菌對兔癢螨病具有較好的治療效果，用藥后 21d供試癢螨病患兔治愈率為100%，且在60d內(nèi)不復(fù)發(fā)。金龜子綠僵菌組在治療的第3d，兔耳道內(nèi)雖然仍有少量痂皮，但是已檢測不到螨蟲和蟲卵，治療效果達(dá)到 100％(圖 3A3; 表 4)；且在治療的第 21d，所有試驗(yàn)兔均被治愈，在治療期間未觀察到試驗(yàn)兔有炎癥反應(yīng)（圖 3 A5; 表 3）。伊維菌素組在治療的第 7d，試驗(yàn)兔的臨床癥狀有明顯的改善(圖 3 B3; 表 3)；且在治療的第 14d，兔耳道內(nèi)雖然仍有少量痂皮，但是已檢測不到螨蟲和蟲卵，治療效果達(dá)到 100％；在治療的第 21d，所有的試驗(yàn)兔均被治愈；在

試驗(yàn)兔耳道內(nèi)的痂皮有復(fù)發(fā)的趨勢，第 30d 的治療效果是-1.87％。無菌水空白對照組，在第 3d，試驗(yàn)兔的左耳、右耳臨床癥狀與恢復(fù)評分分別為 1.63±0.24 和 3.13±0.13；在第 7d，左耳、右耳的臨床癥狀與恢復(fù)評分分別為 1.13±0.13 和 3.38±0.24(圖 3 C3 和C4；表 3)；第 21d 時(shí)左耳、右耳的臨床癥狀與恢復(fù)評分分別為 3.25±0.14 和 4.50±0.20，第 30d 的左耳、右耳的臨床癥狀與恢復(fù)評分分別為 3.88±0.14 和 4.63±0.24(圖 3 C5；C6)。在試驗(yàn)期間，供試患兔無任何不良反應(yīng)。

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