【摘要】：自冷凍配子技術(shù)發(fā)明以來(lái),大多數(shù)哺乳動(dòng)物的冷凍精液技術(shù)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展,商品化效果較好。豬由于其精子抗冷凍打擊能力差,冷凍精液的商品化效果不甚理想,目前多采用鮮精人工授精的方法。肉堿(Carnitine)自發(fā)現(xiàn)以來(lái),因其在抗氧化方面的效果甚佳,目前多用于改善精子質(zhì)量的各種藥劑中,并在臨床中取得了一定的效果。本試驗(yàn)意在探究肉堿對(duì)豬精子凍融后質(zhì)量、精卵結(jié)合能力的影響,及其對(duì)精子凋亡因子Bax、Bc1-2、Caspase-3的mRNA表達(dá)水平和抗氧化酶SOD 2、CAT、GPx1的mRNA表達(dá)水平的影響。采用向冷凍液中添加不同濃度的肉堿,對(duì)精子進(jìn)行凍融處理并檢測(cè)鮮精及凍融后精子的各項(xiàng)生物學(xué)特性與脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)濃度及總抗氧化能力,以證明凍融后豬精子的質(zhì)量大幅下降,及肉堿確實(shí)能夠影響豬精子的凍存質(zhì)量,并篩選出肉堿保護(hù)作用最強(qiáng)的添加濃度。對(duì)比鮮精組、無(wú)肉堿添加組及最佳濃度組的凋亡相關(guān)基因、抗氧化相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平。用熒光染色技術(shù)對(duì)比鮮精組、無(wú)肉堿添加組及最佳濃度組的精卵結(jié)合情況。試驗(yàn)得到以下結(jié)果:1.冷凍液中添加不同濃度的肉堿(0、0.025、0.05、0.075 mg/ml)凍融后,各組精子活動(dòng)率、質(zhì)膜完整率、頂體膜完整率均低于最佳肉堿濃度組(0.05 mg/ml),各處理組間活動(dòng)率、質(zhì)膜完整性差異性均顯著,除0.025及0.075 mg/ml處理組外各組間頂體膜完整性均差異顯著(P0.05)。各凍融組與鮮精相比,其MDA濃度均顯著增加,其中最佳濃度處理組較其他各處理組MDA濃度最低,其余各處理組間差異不顯著(P0.05)。各凍融組與鮮精相比,其總抗氧化能力均顯著降低,其中最佳濃度處理組較其他各處理組總抗氧化能力最高且與各處理組差異顯著,其余處理組間差異不顯著(P0.05)。證明豬精子在凍融處理后確實(shí)質(zhì)量下降,且肉堿對(duì)豬精子的凍存質(zhì)量存在積極影響。2.與鮮精相比,凍融后精子中促凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平顯著增加,抗凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平顯著降低,抗氧化酶相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。與無(wú)肉堿添加組相比,最佳濃度組精子中促凋亡相關(guān)基因表達(dá)水平顯著降低,抗凋亡相關(guān)基因mRNA顯著增加,抗氧化酶相關(guān)基因含量顯著增加(P0.05)。3.使用鮮精、無(wú)肉堿添加組、最佳濃度組精子進(jìn)行人工授精并使用熒光染色,結(jié)果顯示鮮精組精子黏附數(shù)最多,最佳濃度組精子黏附數(shù)較少,無(wú)肉堿添加組精子黏附最少。結(jié)果顯示,肉堿的添加可以有效降低凍融過(guò)程中精子受到的不利影響,提高精子的凍存質(zhì)量。肉堿可影響精子凍存中的凋亡相關(guān)基因表達(dá)和抗氧化酶相關(guān)基因表達(dá)。肉堿可以改善凍存精子的精卵結(jié)合能力。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S828
【圖文】：

３．２添加肉堿對(duì)精子凍融后脂質(zhì)過(guò)氧化的影響逡逑破碎各組凍融后精子，提取離心后的上清液比較添加不同量肉堿的精液中的逡逑丙二醛濃度。所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如圖３－１所示。對(duì)照組（鮮精）與各處逡逑理組相比，經(jīng)過(guò)凍融處理的精液中丙二醛（ＭＤＡ）濃度均升高，其中０．０５邋ｍｇ／ｍｌ逡逑添加量的處理組ＭＤＡ濃度顯著低于其他各處理組（Ａ０．邋０５），其次是０．邋０２５邋ｍｇ／ｍｌ逡逑添加量的處理組，0．邋０７５邋ｍｇ／ｍｌ添加量的處理組ＭＤＡ濃度最高，除０．邋０５邋ｍｇ／ｍｌ逡逑添加量的處理組。說(shuō)明向冷凍保護(hù)劑中添加適量肉堿可以降低凍融精子中丙二醛逡逑含量。逡逑３本邐ａ邐ａ逡逑＿邐２．５邐ｐｉ邋＿邋ｂ邋＿逡逑Ｐ：ｉｊＬ邋Ｘ逡逑０ｉｉｉ邋１１邐１１邐１邐１１邋＿逡逑對(duì)照組邋０邐0？邋０２５邋０．０５邋０．０７５逡逑圖３－１．不同濃度肉堿對(duì)凍融豬精子ＭＤＡ含量影響。逡逑ｆｉｇ邋３￣１．邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｃａｒｎｉｔｉｎｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｎ邋ＭＤＡ邋Ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｏｆ逡逑ｆｒｏｚｅｎ－ｔｈａｗｅｄ邋ｂｏａｒ邋ｓｐｅｒｍ．逡逑注同一性狀不同小寫(xiě)字母肩標(biāo)的平均值間差異顯著（Ｋ0．邋０５），橫坐標(biāo)單位逡逑為ｍｇ／ｍｌ。逡逑３．３添加肉堿對(duì)精子凍融后總抗氧化能力的影響逡逑破碎各組凍融后精子，提取離心后的上清液比較添加不同量肉堿的精液的總逡逑抗氧化能力。所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如圖３－２所示。對(duì)照組（鮮精）與各處逡逑理組相比，經(jīng)過(guò)凍融處理的精液總抗氧化能力均降低，其中０．０５邋ｍｇ／ｍｌ添加量逡逑的處理組總抗氧化能力顯著高于其他各處理組

的比值作為相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析，以對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量為１進(jìn)行其余兩組數(shù)據(jù)逡逑的分析整理（表３－２），結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，凍融后精子中凋亡相關(guān)基因的逡逑ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量升高，抗凋亡基因Ｂｅｌ－２的相對(duì)表達(dá)量降低（圖３－３）。逡逑與對(duì)照組相比，添加量為０的肉堿處理組中凋亡相關(guān)基因Ｃａｓｐａｓｅ邋３與Ｂａｘ逡逑的相對(duì)表達(dá)量顯著升高（（１±０．邋０５°ｖｓ２．邋０８邋±邋０．邋１４ａ，邋１邋±邋０．邋０６°ｖｓｌ．邋７４邋士逡逑０．０８ａ，／＜０．０５），抗調(diào)亡基因Ｂｃｌ－２的相對(duì)表達(dá)量顯著降低（ｌ±0．邋０４ａｖｓ０．邋４９土逡逑０．邋０３ｅ，代０？邋０５），且Ｂｃｌ／Ｂａｘ比值為０．邋２９。與添加量為０的肉堿處理組相比，在逡逑冷凍液中添加０．邋０５邋ｍｇ／ｍｌ肉堿可以降低凋亡相關(guān)基因Ｃａｓｐａｓｅ－３與Ｂａｘ的相對(duì)逡逑表達(dá)量（２．邋０８±０．１４ａｖｓｌ．６０±０．０７ｂ，１．７４±０．邋０８ａｖｓｌ．５０±０．０６ｂ，邋Ｋ０．邋０５），顯逡逑著增加抗凋亡基因Ｂｅｌ－２的相對(duì)表達(dá)量（0？邋４９±０．邋０３°ｖｓ邋０．邋７８±０．邋０１ｂ，邋Ｋ０．邋０５），逡逑且Ｂｃｌ／Ｂａｘ比值為０？邋５２。因此推測(cè)肉堿可通過(guò)影響凋亡相關(guān)基因ｍＲＮＡ的表達(dá)抑逡逑制凍融后精子的凋亡。逡逑２６逡逑

比值作為相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析，以對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量為１進(jìn)行其余兩組數(shù)據(jù)的逡逑分析整理（表３－３），結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，凍融后精子中抗氧化相關(guān)基因逡逑Ｓ０Ｄ邋２、ＣＡＴ與ＧＰｘ的相對(duì)表達(dá)量降低（圖３－４）。逡逑與對(duì)照組相比，添加量為０的肉堿處理組中抗氧化相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量顯逡逑著降低（１邋±邋０．邋０６ａｖｓ０．邋６１邋±邋０．邋０４ｃ，１邋±邋０．邋０５ａｖｓ０．邋６０邋土邋０．邋０３°，１邋±邋０．邋０７ａｖｓ０．邋３４邋士逡逑０．０２ｅ，Ｋ０．邋０５），與添加量為０的肉堿處理組相比，在冷凍液中添加０．０５邋ｍｇ／ｍｌ逡逑肉堿可以增加抗氧化酶相關(guān)基因ｍＲＮＡ的相對(duì)表達(dá)量（０．邋６１±０．邋０４ａｖｓ０．邋７９土０．邋０５ｂ，逡逑０．邋６０±０．邋０３ｅｖｓ０．邋７９±０．邋０５ｂ，邐０．邋３４±０．邋０２ｅｖｓ０．邋５６±０．邋０３ｂ，Ｋ０．邋０５）。逡逑２７逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 趙紅衛(wèi);;紅景天粗多糖中基分對(duì)豬精子凍后生化指標(biāo)及活力的影響[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2014年05期

2 沈留紅;楊慶穩(wěn);鄧華學(xué);張傳師;雍康;崔亞飛;;不同家禽卵黃對(duì)德國(guó)牧羊犬精液冷凍的影響[J];畜牧與獸醫(yī);2013年01期

3 梁鴻斌;姚學(xué)軍;李維華;邵慧;朱金清;鄔純鴻;倪和民;劉云海;郭勇;;冷凍速率和解凍溫度對(duì)豬精液冷凍效果的影響[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2012年11期

4 侯麗鵬;石芳萍;卜書(shū)海;李青旺;胡建宏;;鴕鳥(niǎo)卵黃低密度脂蛋白對(duì)豬精子凍后品質(zhì)的影響[J];中國(guó)畜牧雜志;2012年13期

5 郭堂玉;凌澤繼;韋明宇;盧晟盛;盧克煥;;不同冷凍保護(hù)液和解凍溫度對(duì)豬精液冷凍效果的影響[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2010年07期

6 鄭云勝;宏偉;倪利平;田東海;蘆永躍;鄧常勝;李金泉;;卵黃和低密度脂蛋白對(duì)冷凍保存綿羊精子膽固醇、磷脂含量的影響[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2008年06期

7 胡建宏;李青旺;江中良;卜書(shū)海;楊海;李剛;;海藻糖對(duì)豬精液冷凍保存效果的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2006年12期

8 張樹(shù)山;李青旺;李剛;陳曉宇;胡建宏;韓增勝;王立強(qiáng);;海藻糖、蔗糖和乳糖對(duì)豬精液冷凍保護(hù)效果的影響[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李軍偉;淫羊藿多糖對(duì)豬精液冷凍保存的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2750779