【摘要】：金黃色葡萄球菌作為一種常見(jiàn)細(xì)菌廣泛分布于自然界中,隨著耐甲氧西林金黃色葡萄球菌等耐藥菌株的出現(xiàn),及其臨床感染人的情況不斷被報(bào)道,使得對(duì)金黃色葡萄球菌的研究成為近年來(lái)的熱點(diǎn)。金黃色葡萄球菌能夠感染人和動(dòng)物并造成嚴(yán)重危害,因此對(duì)家畜家禽中攜帶的金黃色葡萄球菌的研究具有重要的公共衛(wèi)生意義。自2016年以來(lái),本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到山東省多地規(guī)�；喤叻趸瘓�(chǎng)的鴨胚死亡率和弱雛率顯著升高,而細(xì)菌感染是鴨胚在孵化過(guò)程中死亡的主要原因;本研究通過(guò)對(duì)從死亡鴨胚中分離的金黃色葡萄球菌的耐藥基因檢測(cè)和藥敏試驗(yàn),初步掌握山東地區(qū)鴨胚源金黃色葡萄球菌的耐藥特點(diǎn),為生產(chǎn)養(yǎng)殖中種鴨的合理用藥提供理論依據(jù);通過(guò)對(duì)鴨源金黃色葡萄球菌攜帶的毒力基因的檢測(cè)分析,以推測(cè)鴨胚源金黃色葡萄球菌的致病性,初步了解種鴨源金黃色葡萄球菌的毒力特點(diǎn)。本研究對(duì)2016年-2017年來(lái)自山東省臨沂、泰安、菏澤三地市的鴨胚孵化場(chǎng)的無(wú)破損死亡鴨胚10個(gè)批次共計(jì)302枚進(jìn)行了細(xì)菌的分離培養(yǎng)、革蘭氏染色鏡檢、16Sr DNA和金黃色葡萄球菌nuc基因的PCR鑒定,共從224枚死鴨胚中分得細(xì)菌263株,分屬20個(gè)種,死鴨胚細(xì)菌感染率74.2%。在分離所得的細(xì)菌中,大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的分離率列前三位,分別占29.66%(78/263),28.14%(74/263)和12.17%(32/263)。對(duì)分離獲得的32株鴨胚源金黃色葡萄球菌采用K-B法進(jìn)行了16種常見(jiàn)抗生素的耐藥性檢測(cè)。結(jié)果顯示,32株金黃色葡萄球菌對(duì)16種常見(jiàn)抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥:對(duì)四環(huán)素和克林霉素耐藥率最高為78.13%,對(duì)環(huán)丙沙星、磺胺類、克拉霉素的耐藥性都在60%以上;對(duì)頭孢噻吩、氨芐西林、多粘菌素B和萬(wàn)古霉素敏感(62.5%-100%)。統(tǒng)計(jì)表明本試驗(yàn)分離的鴨胚源金黃色葡萄球菌都呈現(xiàn)多重耐藥的特點(diǎn)。通過(guò)此項(xiàng)研究調(diào)查,我們?cè)谥委熀皖A(yù)防山東地區(qū)種鴨場(chǎng)金黃色葡萄球菌感染時(shí)可以優(yōu)先考慮頭孢類、氨芐西林等抗菌藥物,同時(shí)建議臨床治療時(shí)交替使用抗菌藥物或通過(guò)藥敏試驗(yàn)制定用藥方案,科學(xué)、合理地使用抗菌藥物。對(duì)分離獲得的32株金黃色葡萄球菌進(jìn)行大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因的PCR檢測(cè),結(jié)果表明msr A和erm C耐藥基因在本試驗(yàn)的鴨胚源金黃色葡萄球菌中攜帶率較為普遍。其中msr A的檢出率為40.62%,erm C的檢出率為53.13%,這兩種耐藥基因的二重?cái)y帶率為25%。對(duì)分離獲得的32株金黃色葡萄球菌進(jìn)行4種毒力基因的PCR檢測(cè)。結(jié)果表明,hla、hlb、clfa和pvl的檢出率分別是81.25%、71.88%、78.13%和6.25%。其中27株菌株(84.38%)同時(shí)攜帶2種及以上毒力基因:僅攜帶二種毒力基因的細(xì)菌檢出率為21.9%,攜帶三種毒力基因的菌株檢出率為59.4%,有1株金黃色葡萄球菌被檢測(cè)為攜帶四種毒力基因。這表明山東地區(qū)的鴨胚中金黃色葡萄球菌分離株大部分?jǐn)y帶有多種毒力基因,可能會(huì)導(dǎo)致金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)毒力,使其具有較高的致病性。通過(guò)以上四部分的研究,可以認(rèn)為所收集的鴨胚死亡的原因之一是細(xì)菌感染,其中所分離得到的金黃色葡萄球菌具有較高的耐藥性,并攜帶有大量耐藥基因和毒力基因,可能會(huì)導(dǎo)致其具有較高的致病性,給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)潛在風(fēng)險(xiǎn)。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.611
【圖文】：

3 結(jié) 果3.1 死亡鴨胚中細(xì)菌的分離鑒定結(jié)果3.1.1 金黃色葡萄球菌培養(yǎng)特性及革蘭氏染色結(jié)果在普通 LB 瓊脂培養(yǎng)基上形成光滑、濕潤(rùn)、隆起的邊緣整齊、不透明、直徑 1～2 mm略有黃色色素的圓形菌落；在血平板形成圓形凸起、有光澤、金黃色，菌落周圍出現(xiàn)全透明溶血圈的菌落（圖 1）；在 10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯內(nèi)混濁生長(zhǎng)。初步認(rèn)定金黃色葡萄球菌的菌落特征。將普通瓊脂培養(yǎng)基 37 ℃培養(yǎng) 12 h 后將培養(yǎng)基上分離到隆起的圓形的單個(gè)菌落，接種到 LB 培養(yǎng)基中搖菌培養(yǎng) 8 h 后，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡觀察。金黃色葡萄球菌革蘭氏染色呈陽(yáng)性，普通光學(xué)顯微鏡下用油鏡觀察呈典型球菌狀聚集在一起如葡萄狀（圖 2）。

圖 2 金黃色葡萄球菌革蘭氏染色形態(tài)（1000×）Fig. 2 Morphology of Staphylococcus aureus（1000×）萄球菌 BP 培養(yǎng)基培養(yǎng)特性arker 培養(yǎng)基上形成圓形、光滑、凸起、濕潤(rùn)、直徑為 2緣為淡色，周圍為一混濁帶并在其外層有一透明帶的菌

圖 2 金黃色葡萄球菌革蘭氏染色形態(tài)（1000×）ig. 2 Morphology of Staphylococcus aureus（1000×菌 BP 培養(yǎng)基培養(yǎng)特性r 培養(yǎng)基上形成圓形、光滑、凸起、濕潤(rùn)、直徑為為淡色，周圍為一混濁帶并在其外層有一透明帶的

【參考文獻(xiàn)】

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5 孫淵;g氨

本文編號(hào)：2747712