【摘要】：非酒精性脂肪肝是目前在人類和動物機(jī)體中較為高發(fā)的疾病,但是在臨床中并未找到好的治療方法,故前期的預(yù)防是防止肝臟發(fā)展為非酒精性脂肪肝的有效手段。成纖維細(xì)胞生長因子21(FGF21)是一種參與脂質(zhì)利用的新型代謝調(diào)節(jié)因子,可參與并調(diào)控脂質(zhì)的調(diào)節(jié)代謝。為明確FGF21對于非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用,本試驗(yàn)分別從體內(nèi)和體外兩方面進(jìn)行了探究。試驗(yàn)一在體內(nèi)探究外源性注射FGF21對高脂飲食飼料(HFD)誘導(dǎo)的小鼠非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用,分析FGF21對免疫應(yīng)答指標(biāo)和血液學(xué)參數(shù)的影響。在實(shí)驗(yàn)中,共選擇24只雌性小鼠,使用HFD隨機(jī)飼喂12只小鼠,其它12只小鼠飼喂正常日糧。30天后,將兩種飼喂方式的小鼠再平均分為四組:1組HFD組;2組對照組;3組HFD+FGF21組;4組對照+FGF21組。分別于注射后第三天和第六天將小鼠處死,分離肝臟并制做切片。采集血液并通過流式細(xì)胞術(shù)分析CD3和CD19的水平;分離血清,通過ELISA檢測IL-4、IL-6和TNF-α水平;通過半自動生化分析檢測TG,TC,NEFA,LDL-c和HDL-c水平。結(jié)果顯示HFD+FGF21組中CD3和CD19水平顯著降低(P0.01)。外源性FGF21注射HFD+FGF21組中IL-4,IL-6,TNF-α,TC,TG,LDL-c和NEFA水平顯著低于HFD組(P0.05)。試驗(yàn)二通過體外實(shí)驗(yàn)探究FGF21的缺乏對于非酒精性脂肪肝的影響。使用小鼠AML12細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn),并用siRNA沉默F(xiàn)GF21基因,腺病毒過表達(dá)LKB1基因,首先將細(xì)胞培養(yǎng)12 h,然后加入沉默和過表達(dá)試劑,繼續(xù)培養(yǎng)48 h,之后饑餓12 h,再加入1.2 mol/L的NEFA繼續(xù)培養(yǎng)12 h,收細(xì)胞待檢。通過激光共聚焦熒光技術(shù)評估肝細(xì)胞脂滴的變化;通過流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量;通過ELISA檢測細(xì)胞內(nèi)FGF21,sirt1,IL-4,IL-6,TNF-α;使用生化分析測定GLU,TG,PA;通過WB的檢測AMPK,p-AMPK;通過q-PCR檢測FGF21,LKB1,SREBP-1c,IL-8,TNF-α。結(jié)果顯示沉默F(xiàn)GF21可顯著降低肝細(xì)胞中LKB1對AMPK磷酸化水平的影響(P0.05)。通過誘導(dǎo)過表達(dá)LKB1和沉默F(xiàn)GF21降低了p-AMPK/AMPK的速率和下游SREBP-1c的表達(dá)(P0.05)。NEFA處理的LKB1過表達(dá)細(xì)胞的GLU水平顯著高于添加NEFA細(xì)胞(P0.05),NEFA處理的FGF21沉默細(xì)胞中的GLU水平高于NEFA處理的細(xì)胞(P0.05),但沒有顯著變化,在NEFA處理下,兩者同時處理時GLU高于NEFA處理下過表達(dá)LKB1細(xì)胞的表達(dá)量。由NEFA處理的FGF21沉默的細(xì)胞中IL-6和TNF-α水平顯著高于在NEFA細(xì)胞中的IL-6和TNF-α水平(P0.05)。當(dāng)FGF21沉默時,ROS的表達(dá)增加。沉默F(xiàn)GF21導(dǎo)致脂滴增加,LKB1過表達(dá)似乎對脂滴沒有影響。綜上所述,外源性FGF21對于輕度非酒精性脂肪肝小鼠具有保護(hù)作用,主要表現(xiàn)在對能量,免疫指標(biāo)以及對炎癥指標(biāo)的下調(diào)。又通過體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在FGF21缺乏時,游離脂肪酸升高導(dǎo)致肝細(xì)胞氧化應(yīng)激程度增加,能量、脂質(zhì)代謝異常和炎癥的增加。綜上所述,FGF21在保護(hù)非酒精性脂肪肝方面有很好的應(yīng)用前景,為以后攝入高能量狀態(tài)下FGF21防止肝臟發(fā)展為非酒精性脂肪肝提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S856.4;R575.5
【圖文】：

顯示肝臟細(xì)胞大小正常，核圓和細(xì)胞質(zhì)無異常，整齊排列并位于細(xì)胞中央（圖2-1b）。對照+FGF21 組的脂肪變性程度與對照相比沒有顯著差異�；� NAFLD 結(jié)果診斷金標(biāo)準(zhǔn)，即組織學(xué)分析，表明在 HFD 小鼠攝食能顯著的造成肝臟脂肪變性和肝臟損傷。這些發(fā)現(xiàn)表明外源性注射 FGF21 對 HFD 誘導(dǎo)的脂肪變性具有保護(hù)作用。圖 2-1 在 FGF21 注射第六天時小鼠肝臟病理學(xué)變化注：以上均是在 400×下觀察到的結(jié)果。Figure 2-1 Pathological changes of liver in mice on the sixth day of FGF21 injectionNote: All of the above are the results observed at 400×.2.2.2 細(xì)胞因子和生化指標(biāo)的變化接下來，我們研究了 FGF21 對肝臟炎癥的抑制作用。各組中 IL-4，IL-6 和 TNF-α的變化如圖 2-2 所示。在注射 FGF21 的第 3 天和第 6 天，HFD 組 IL-6、IL-4、TNF-α水平顯著高于 HFD+FGF21 組(P <0.01，圖 2-2A，B，C)。IL-4、IL-6、TNF-α在對照組與對照+FGF21組間無顯著性差異(P >0.05)。HFDHFD+FGF21FGF21

圖 2-2.在 FGF21 注射的第 3 天和第 6 天 IL-4，IL-6，TNF-α的變化L-6 在第三天和第六天的表達(dá)量；（B）IL-4 在第三天和第六天的表達(dá)量；（C）TNF-α在第六天的表達(dá)量。*”和“**”表示與 HFD 組比較差異顯著和極顯著（P <0.05，P <0.01）。Figure 2-2 Changes of IL-4,IL-6,TNF-α on the third day and sixth day day after FGF21 injectionTNTN

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本文編號：2739433