【摘要】：為了確定犢牛猝死病原菌制備相應(yīng)的二聯(lián)滅活疫苗從具有典型癥狀的猝死犢牛肝臟組織中分離出了產(chǎn)氣莢膜梭菌和大腸桿菌。PCR鑒定該產(chǎn)氣莢膜梭菌為A型,大腸桿菌含有irp2,fyua致病因子。小鼠致病性實(shí)驗(yàn)表明:分離的兩個(gè)菌株均很強(qiáng)的致病性。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明:產(chǎn)氣莢膜梭菌對(duì)紅霉素、氯霉素、先鋒Ⅴ號(hào)敏感,大腸桿菌對(duì)恩諾沙星、頭孢唑啉、氯霉素敏感。確診該起犢牛猝死是由產(chǎn)氣莢膜梭菌和大腸桿菌混合感染造成的,敏感藥物治療后,效果明顯。常規(guī)方法分別制備產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素和大腸桿菌二聯(lián)不含佐劑的以及鋁膠佐劑和油佐劑滅活疫苗。多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,二聯(lián)滅活疫苗穩(wěn)定性好,使用安全。篩選出產(chǎn)氣莢膜梭菌和大腸桿菌最佳的培養(yǎng)時(shí)間為7 h和20 h、最佳脫毒條件為0.4%的甲醛120 r/min 37℃6 d和0.4%甲醛120 r/min 37℃88 h。用上述3種二聯(lián)疫苗分別通過皮下和肌肉途徑以0.1 mL、0.2 mL和0.4 mL免疫小鼠,分別應(yīng)用間接血凝和試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)血清中產(chǎn)氣莢膜梭菌和大腸桿菌抗體效價(jià)。佐劑組小鼠特異性血清抗體水平均高于無(wú)佐劑組,鋁膠佐劑組高于白油佐劑組;相同免疫途徑,相同佐劑組,隨著免疫劑量增加,特異性抗體水平顯著上升。用5LD50的產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素溶液及大腸桿菌菌液分別對(duì)鋁膠佐劑組免疫后7 d、14 d和21d的小鼠攻毒。數(shù)據(jù)顯示,不同免疫劑量小鼠均可獲得不同程度的保護(hù);而肌肉注射0.4 mL鋁膠佐劑疫苗小鼠,在1免后14天,即可獲得100%保護(hù)。結(jié)果表明,肌肉注射0.4 mL鋁膠佐劑疫苗,效果最好。應(yīng)用產(chǎn)氣莢膜梭菌和大腸桿菌二聯(lián)鋁膠佐劑滅活疫苗,對(duì)妊娠母牛產(chǎn)前3次和2次肌肉免疫,檢測(cè)妊娠母牛及犢牛的血清抗體效價(jià)并觀察免疫的臨床效果。結(jié)果表明,妊娠母牛免疫3次效果好于2次。制備的二聯(lián)鋁膠佐劑滅活疫苗免疫能很好地控制該牛場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌病和大腸桿菌病的流行。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.23
【圖文】：

細(xì)菌的分離鑒定板經(jīng) 37℃厭氧培養(yǎng) 24 h 后，有圓形、邊緣整同時(shí)出現(xiàn)裂葉狀邊緣的粗糙菌落及絲狀邊緣的得到的溶血細(xì)菌純化，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢菌。根據(jù)革蘭氏染色和病原菌的形態(tài)特征及得到的非溶血菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，觀察桿的革蘭氏陰性菌，成對(duì)或散在排列，在麥康明，邊緣整齊的菌落，可判定非溶血細(xì)菌為大

離得到的非溶血菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，觀短桿的革蘭氏陰性菌，成對(duì)或散在排列，在麥康透明，邊緣整齊的菌落，可判定非溶血細(xì)菌為圖 2-1 溶血菌落革蘭氏染色鏡檢結(jié)果（10×100 2-1 Hemolysis colonies gram staining microscopy results (

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