【摘要】：利用丁二酸酐法對泰拉霉素的羥基衍生化,引入游離羧基,合成泰拉霉素半抗原。采用活潑酯法將泰拉霉素半抗原分別與牛血清白蛋白(BSA)和雞卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián),合成人工完全抗原泰拉霉素-BSA和泰拉霉素-OVA。利用LC-MS鑒定衍生化后半抗原的合成,利用熒光光譜、考馬斯亮法鑒定完全抗原的合成。用泰拉霉素-BSA免疫小鼠,采用間接ELISA法測定小鼠抗血清效價(jià)。泰拉霉素半抗原和BSA的偶聯(lián)比為17∶1。三免后小鼠抗血清效價(jià)可達(dá)1∶8 000。
【圖文】：

研究論文食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)2017年第36卷第1期朱欣鳳，等：泰拉霉素完全抗原的合成和鑒定偶聯(lián)率[12]。圖3泰拉霉素半抗原合成的質(zhì)譜分析結(jié)果Fig.3LC-MS/MSresultofTulathromycinhapten圖4BSA及泰拉霉素-BSA偶聯(lián)物的熒光光譜Fig.4FluorescencespectrometryofBSAandBSA-TulathromycinA=（εbN/M）C，其中A為吸光度值，εb為摩爾吸光系數(shù)，N為每個(gè)BSA自由氨基酸數(shù)目，C為蛋白濃度，M為BSA或BSA-泰拉霉素的相對分子質(zhì)量。得ABSA=（εbNBSA/MBSA）CBSAABSA-AT=（εbNBSA-T/MBSA-T）CBSA-TKBSA=ABSA/CBSA=εbNBSA/MBSAKBSA-T=ABSA-T/CBSA-T=εbNBSA-T/MBSA-T其中，K為直線斜率KBSAKBSA-T=NBSA/MBSA（NBSA-X）/（MBSA+XMT）根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道NBSA=60，MBSA=66430，MT=806.08，經(jīng)實(shí)驗(yàn)測得KBSA=0.0073，KBSA-T=0.0056，由此得出泰拉霉素與BSA的偶聯(lián)比約為17∶1。2.4抗體效價(jià)的測定采用間接ELISA測定小鼠血清效價(jià)。三免后以1μg／mL包被抗原包板，3號小鼠血清效價(jià)最高，達(dá)到1∶8000，測定結(jié)果見表1，1號和5號小鼠血清效價(jià)為1∶4000，2號小鼠血清效價(jià)為1∶2000。其中3號小鼠抗血清的IC50為98.5μg/L。實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分說明了人工抗原泰拉霉素-BSA和泰拉霉素-OVA的合成是成功的。表13號小鼠抗血清效價(jià)測定結(jié)果Table1Titrationofthethirdmouse’santiserum相對分子質(zhì)量低于1000的小分子物質(zhì)通常不具有免疫原性，進(jìn)入生物體內(nèi)后并不能誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生，這樣的小分子必須與載體蛋白偶聯(lián)形成完全抗原后才具有免疫原性[13-14]�？疾焯├顾亟Y(jié)構(gòu)后決定通過泰拉霉素的羥基與丁二酸酐

研究論文食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)2017年第36卷第1期朱欣鳳，等：泰拉霉素完全抗原的合成和鑒定偶聯(lián)率[12]。圖3泰拉霉素半抗原合成的質(zhì)譜分析結(jié)果Fig.3LC-MS/MSresultofTulathromycinhapten圖4BSA及泰拉霉素-BSA偶聯(lián)物的熒光光譜Fig.4FluorescencespectrometryofBSAandBSA-TulathromycinA=（εbN/M）C，其中A為吸光度值，εb為摩爾吸光系數(shù)，N為每個(gè)BSA自由氨基酸數(shù)目，C為蛋白濃度，M為BSA或BSA-泰拉霉素的相對分子質(zhì)量。得ABSA=（εbNBSA/MBSA）CBSAABSA-AT=（εbNBSA-T/MBSA-T）CBSA-TKBSA=ABSA/CBSA=εbNBSA/MBSAKBSA-T=ABSA-T/CBSA-T=εbNBSA-T/MBSA-T其中，K為直線斜率KBSAKBSA-T=NBSA/MBSA（NBSA-X）/（MBSA+XMT）根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道NBSA=60，MBSA=66430，MT=806.08，經(jīng)實(shí)驗(yàn)測得KBSA=0.0073，KBSA-T=0.0056，由此得出泰拉霉素與BSA的偶聯(lián)比約為17∶1。2.4抗體效價(jià)的測定采用間接ELISA測定小鼠血清效價(jià)。三免后以1μg／mL包被抗原包板，3號小鼠血清效價(jià)最高，達(dá)到1∶8000，測定結(jié)果見表1，1號和5號小鼠血清效價(jià)為1∶4000，2號小鼠血清效價(jià)為1∶2000。其中3號小鼠抗血清的IC50為98.5μg/L。實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分說明了人工抗原泰拉霉素-BSA和泰拉霉素-OVA的合成是成功的。表13號小鼠抗血清效價(jià)測定結(jié)果Table1Titrationofthethirdmouse’santiserum相對分子質(zhì)量低于1000的小分子物質(zhì)通常不具有免疫原性，進(jìn)入生物體內(nèi)后并不能誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生，這樣的小分子必須與載體蛋白偶聯(lián)形成完全抗原后才具有免疫原性[13-14]�？疾焯├顾亟Y(jié)構(gòu)后決定通過泰拉霉素的羥基與丁二酸酐

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