【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)在中藥引經(jīng)理論的指導(dǎo)下,結(jié)合課題組前期對(duì)桔梗引經(jīng)作用的研究成果,以桔梗及其單體α-菠菜甾醇為研究藥物,利用Cocktail探針?biāo)幬锓ā?shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫蛋白印跡、免疫組化等研究方法,研究了桔梗及α-菠菜甾醇不同劑量組對(duì)SD大鼠肺、肝、腎組織中藥物代謝酶5種亞型的mRNA表達(dá)量、酶蛋白表達(dá)量、酶活力以及調(diào)控代謝酶的核受體PXR、CAR、AhR mRNA表達(dá)量、蛋白表達(dá)量的影響,和對(duì)肺、肝、腎組織中外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體P-pg和攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體OAPT和PEPT2mRNA和蛋白表達(dá)量的影響,以及初步研究了桔梗及α-菠菜甾醇對(duì)大鼠肺組織MicroRNA的表達(dá)譜。通過以上研究,探索在分布、代謝和排泄環(huán)節(jié)上桔梗及α-菠菜甾醇“載藥上行”的作用機(jī)理。方法:(1)SD大鼠(180 g±20 g),雄性,隨機(jī)分為6個(gè)組。分別為空白對(duì)照組,桔梗低、中、高劑量組(2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg),α-菠菜甾醇低、高劑量組(5 mg/kg、15 mg/kg)。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,每組進(jìn)行灌胃給藥,中藥組分別給予水煎的三個(gè)劑量中藥,單體組給予兩個(gè)劑量α-菠菜甾醇,空白組給予等體積的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)期間大鼠正常飲食飲水。各組大鼠連續(xù)給藥7 d,給藥第6 d后讓大鼠正常飲水,禁食。各組大鼠末次給藥后2 h,乙醚麻醉,抽取血液,脫頸處理后,采集肝、肺、腎組織樣品用生理鹽水進(jìn)行清洗,解剖與取樣全過程用消毒手術(shù)剪工作,防止體溫對(duì)樣品成分降解,對(duì)樣品進(jìn)行標(biāo)記、保存與分裝,不需要及時(shí)處理的樣品,立即凍存于-80℃冰箱備用。采用Cocktail探針?biāo)幬锓�、�?shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫蛋白印跡、免疫組化等方法測(cè)定大鼠肺、肝、腎組織樣品中藥物代謝酶、核受體、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的變化;(2)SD大鼠(180 g±20 g),雄性,隨機(jī)分為3個(gè)組。分別為空白對(duì)照組,桔梗組(10 g/kg),α-菠菜甾醇組(15 mg/kg)。使用安諾優(yōu)達(dá)miRNA測(cè)序分析產(chǎn)品,采用Illumina高通量測(cè)序技術(shù),初步研究桔梗及α-菠菜甾醇對(duì)大鼠肺組織MicroRNA的表達(dá)譜。結(jié)果:(1)桔梗及其單體α-菠菜甾醇提高了肝、腎CYP1A2、CYP2E1、CYP2C11、CYP2D6、CYP3A1這5種藥物代謝酶亞型的mRNA表達(dá)量、蛋白含量和酶活力。(2)桔梗及其單體α-菠菜甾醇提高了RXR、CAR、AhR三種核受體mRNA表達(dá)量和蛋白含量。(3)桔梗及其單體α-菠菜甾醇抑制肺P-pg、肝OATP2、腎PEPT2的mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)量,促進(jìn)肺PEPT2、肝腎P-pg的mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)量。(4)桔梗及其單體α-菠菜甾醇作用機(jī)體后,通過對(duì)肺差異表達(dá)miRNA的分析,預(yù)測(cè)到1個(gè)靶基因:ENSRNOG00000033101。結(jié)論:(1)桔梗及α-菠菜甾醇通過對(duì)中下焦肝、腎組織藥物代謝酶5種亞型CYP1A2、CYP2E1、CYP2C11、CYP2D6和CYP3A1 mRNA、蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用和體外酶活力的上調(diào)作用,可使藥物在下焦肝、腎的藥物代謝加快,肝、腎組織藥物濃度降低,是其發(fā)揮“引經(jīng)”作用的機(jī)制之一;(2)桔梗及α-菠菜甾醇主要通過誘導(dǎo)肝、腎PXR、CAR、AhR mRNA和蛋白的表達(dá),從而引起下游CYP450s靶基因和蛋白表達(dá)的變化,上調(diào)下焦肝腎CYP450s mRNA和蛋白的表達(dá);(3)桔梗及α-菠菜甾醇下調(diào)肺組織P-pg、肝組織OATP2、腎組織PEPT2 mRNA和蛋白的表達(dá),上調(diào)肺PEPT2、肝腎組織P-gp mRNA和蛋白的表達(dá),是其發(fā)揮“引經(jīng)”作用的機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S853.7
【圖文】：

酸泰樂菌素為底藥，研究了 α-菠菜甾醇對(duì)小鼠 PEPT1 表達(dá)的影響。他們采用給小鼠灌胃給藥 處死小鼠并用免疫組化的方式測(cè)定 P-糖蛋白和甾醇具有抑制 P-g 糖蛋白的表達(dá)和增加 PEP究過從桔梗中提取的 α-菠菜甾醇與泰樂菌素合度達(dá)峰時(shí)間并提高其吸收速度[43]。

倍、5 倍等倍臨床等效劑量給予大鼠灌胃冰片，觀察其對(duì)腦組織和小腸中 P-g影響，以及對(duì)苯妥英鈉在血清和腦組織中血藥濃度的影響以。探討冰片是否能藥物穿透血腦屏障。結(jié)果顯示冰片對(duì)腦組織和小腸中 P-gp 的表達(dá)有抑制作用進(jìn)苯妥英鈉通過血腦屏障的能力從而增加藥物在血清和腦組織中的濃度[71]。6.2 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體調(diào)控藥物體內(nèi)過程的研究現(xiàn)狀P-gp 屬于 ATP 結(jié)合型的 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)子超家族成員，人類擁有兩種已知的 p因，MDR1(ABCB1)和 MDR3(ABCB4)，然而，只有 MDR1 基因?qū)Χ嗨幠退幮訮-gp 流出泵進(jìn)行編碼[72]。P-gp由1280個(gè)氨基酸組成，糖基化形態(tài)的分子量是17它由兩個(gè)對(duì)稱的部分組成，每個(gè)部分包含六個(gè)跨膜段和一個(gè) ATP 結(jié)合位點(diǎn)（所示）。P-gp 在許多腫瘤細(xì)胞中過度表達(dá)，它也在幾乎所有的身體組織(如腸道、肝臟和血腦屏障)中表達(dá)[73, 74]。

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本文編號(hào)：2731962