本文關(guān)鍵詞：水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒的研制及水貂阿留申病血清學(xué)調(diào)查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,MAD)是慢性、消耗性傳染病。是由水貂阿留申病毒[1](Aleutian mink disease parvovirus,AMDV)引起,該病毒具有自主復(fù)制能力,能使水貂的免疫細(xì)胞遭到侵害從而導(dǎo)致全身免疫系統(tǒng)功能紊亂。該病幾乎遍布于世界各養(yǎng)貂國家,在我國某些貂群中血清陽性率可達(dá)50%~90%,各個(gè)年齡段水貂都易感,該病已成為水貂的重要傳染病之一。目前我國使用的水貂阿留申病鑒定方法主是CIEP(Convection immunoelectrophoresis:對流免疫電泳),該方法檢測成本較高,每次檢測樣品的數(shù)量也比較少,不方便進(jìn)行大批量檢測,并且多用于實(shí)驗(yàn)室檢測。因此研發(fā)更高效、低廉的檢測試劑盒,對貂場的凈化以及該病的防控具有重要意義。本研究將反應(yīng)原性和特異性鑒定良好的人工設(shè)計(jì)抗原肽段(命名為sd)在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)Niz+親和層析柱純化后再超濾濃縮,得到高純度、反應(yīng)原性好的sd重組蛋白,濃度為12 mg/ml。按照實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立的水貂阿留申病ELISA抗體檢測方法,將此sd重組蛋白為包被抗原,組裝了水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒,并進(jìn)行了試劑盒保存期、可重復(fù)性、特異性以及敏感性的評價(jià)。結(jié)果表明:試劑盒在-20℃條件下保存期為6個(gè)月,4℃條件下保存期為1個(gè)月。試劑盒能特異性的檢測水貂阿留申病陽性標(biāo)準(zhǔn)血清,與犬瘟熱病毒、水貂腸炎病毒、犬細(xì)小病毒、偽狂犬病毒等陽性標(biāo)準(zhǔn)血清均無交叉反應(yīng);用該試劑盒對水貂阿留申病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行檢測并于CIEP法作比較,結(jié)果表明靈敏度高于CIEP方法;重復(fù)性試驗(yàn)表明,試劑盒批內(nèi)差異系數(shù)為0.667%~5.811%,批間差異為0.882%~6.046%,小于10%,說明試劑盒批間、批內(nèi)可重復(fù)性好。用研制的ELISA試劑盒與CIEP檢測方法同時(shí)檢測實(shí)驗(yàn)室所保存的379份水貂血清。結(jié)果顯示sd-ELISA試劑盒檢測方法檢出陽性率是:82.3%,而CIEP陽性檢出率為是:74.6%。用該方法對我國山東、大連、吉林、黑龍江、河南等主要養(yǎng)貂區(qū)域的2190份血清進(jìn)行阿留申病血清學(xué)調(diào)查,各地感染率存在明顯差異,分別為:96.3%、82.1%、71.2%、64.2%、69.8%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明sd-ELISA試劑盒具有可重復(fù)性好,特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn),其檢測效果與CIEP相比,價(jià)格低廉,可批量操作,能夠滿足我國水貂場、散養(yǎng)戶以及進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫的實(shí)際需要。
【關(guān)鍵詞】：水貂阿留申病病毒 ELISA試劑盒 抗體檢測 血清學(xué)調(diào)查
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.92
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述13-27
• 第一章 水貂阿留申病的研究進(jìn)展13-22
• 1.1 MAD的流行歷史及流行態(tài)勢14-16
• 1.2 MAD的流行病學(xué)16-19
• 1.3 MADV的概述19-22
• 第二章 水貂阿留申病的診斷方法22-27
• 2.1 對流免疫電泳（CIEP）22-23
• 2.2 血清電泳23
• 2.3 碘凝集試驗(yàn)（IAT）23-24
• 2.4 淋巴細(xì)胞酯酶標(biāo)記24
• 2.5 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IIF）24
• 2.6 PPA-ELISA24
• 2.7 抗原檢測法24-25
• 2.8 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CF）25
• 2.9 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）25-26
• 2.10 酶標(biāo)斑點(diǎn)紙條26
• 2.11 火箭電泳26
• 2.12 免疫復(fù)合物（CIC）檢測26-27
• 第二篇 研究內(nèi)容27-65
• 第一章 水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒的研制27-55
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料28-33
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備33
• 1.3 方法33-42
• 1.4 結(jié)果42-52
• 1.5 討論52-54
• 1.6 小結(jié)54-55
• 第二章 水貂阿留申病血清學(xué)調(diào)查55-65
• 2.1 材料56
• 2.2 方法56-58
• 2.3 結(jié)果與分析58-62
• 2.4 討論62-64
• 2.5 小結(jié)64-65
• 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-73
• 導(dǎo)師簡介73-74
• 作者簡介74-75
• 致謝75

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒的研制及水貂阿留申病血清學(xué)調(diào)查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：272601