【摘要】：近年來,寵物飼養(yǎng)數(shù)量不斷增加,寵物疾病也隨之而來,特別是犬貓細(xì)菌性、真菌性和混合性皮膚病在獸醫(yī)臨床疾病中占有較大的比例,臨床上耐多種抗生素的耐藥菌株大量產(chǎn)生�？咕脑诮陙沓蔀榭股氐奶娲幬�,具有高效的、廣譜的抗細(xì)菌、真菌、病毒和一些原蟲等活性,且氨基酸序列較短,合成簡便。臨床用藥上為優(yōu)化抗菌肽的作用,增加穩(wěn)定性與安全性,我們篩選短序列抗菌肽應(yīng)用于納米給藥系統(tǒng),增加其透皮吸收性,并對其穩(wěn)定性,安全性和體外抗菌性進(jìn)行了研究。本實(shí)驗(yàn)通過紙片擴(kuò)散法藥敏實(shí)驗(yàn)對多種化學(xué)固相合成法合成的抗菌肽進(jìn)行抑菌活性檢測,以大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為代表菌株,初步篩選出抗菌肽RR-9、RI-12具有理想的抗菌活性。進(jìn)一步通過最小抑菌濃度(MIC)檢測、殺菌濃度檢測、殺菌曲線測定、掃描電鏡和透射電鏡進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果表明:RR-9、RI-12兩種抗菌肽均能同時(shí)抑制寵物皮膚常見致病菌標(biāo)準(zhǔn)株的生長,對金黃色葡萄球菌ATCC29213的MIC值分別為16μg/mL和6.6μg/mL。RR-9對臨床耐藥金黃色葡萄球菌的MIC值為64μg/mL。當(dāng)RR-9濃度達(dá)到4倍MIC值時(shí),可在20分鐘內(nèi)完全殺死金黃色葡萄球菌。電鏡結(jié)果顯示抗菌肽RR-9可快速破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的完整結(jié)構(gòu),通過使細(xì)胞膜破碎、內(nèi)容物質(zhì)外流,從而抑制細(xì)菌生長,達(dá)到殺菌目的。本實(shí)驗(yàn)采用已報(bào)道配方:肉豆蔻酸異丙酯(IPM)作為油相,辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(EP)作為表面活性劑,聚甘油脂肪酸酯作為助表面活性劑,在此基礎(chǔ)上篩選油酸、氮酮最佳比例增加納米乳穩(wěn)定性與皮膚滲透性,以此配方制備含有RR-9的抗菌肽納米乳,并對其進(jìn)行質(zhì)量評價(jià),利用紫外分光光度計(jì)法建立納米乳中抗菌肽含量測定方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示油酸和氮酮的最佳比例為1%和2%。粒度分析儀檢測得出納米乳平均粒徑為95.3 nm,大小均一,分布均勻。建立的含量檢測方法簡便易行,準(zhǔn)確性高。本研究采用大鼠、家兔的皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)、急性毒性實(shí)驗(yàn)和HaCaT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)考察了包含RR-9的納米乳的安全性,并且對抗菌肽納米乳的體外藥效進(jìn)行了評價(jià)。結(jié)果顯示,該抗菌肽納米乳制劑經(jīng)皮膚外用未出現(xiàn)急性毒性反應(yīng)、刺激性反應(yīng)、過敏性反應(yīng),細(xì)胞增殖度RGR為61.54%,毒性為2級,無細(xì)胞毒性。體外藥效實(shí)驗(yàn)表明該抗菌肽納米乳對金黃色葡萄球菌ATCC29213及白色念珠菌ATCC10231的MIC值均為3.9μg/mL,對抗生素抑菌效果較差的耐藥金黃色葡萄球菌的MIC值為7.8μg/mL,由此可見包含RR-9的納米乳抑菌活性優(yōu)于抗菌肽水溶液。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S859.5
【圖文】：

圖 1.1 多肽對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌結(jié)果注：左上為陰性對照，右上為氨芐陽性對照Fig 1.1 Result of antibacterial to E. Coli and S.aureus of PeptidesNote: Negative control on the left, the upper right is the ampicillin positive cont1.3.2 抗菌肽對常見致病菌的最小抑菌濃度（MIC）結(jié)果結(jié)果如表 3.3 所示，RR-9 和 RI-12 對大腸桿菌的 MIC 值分別為 4.8 μg/和 8.3 μg/mL。RR-9 對綠膿桿菌的 MIC 值為 78 μg/mL，遠(yuǎn)優(yōu)于氨芐霉素與卡霉素對綠膿桿菌的抗菌效果。RR-9 和 RI-12 對金黃色葡萄球菌的 MIC 值分別16 μg/mL 和 6.6 μg/mL。RR-9 對五種測試菌株具有顯著的抗菌活性，并且其革蘭氏陰性菌的抗菌活性比對革蘭氏陽性菌的抗菌活性高。RI-12 對四種測試株具有顯著抗菌活性，抑菌廣譜性低于 RR-9。

圖 1.2 RR-9 對金黃色葡萄球菌 ATCC29213 的殺菌曲線Fig 1.2 Time-Kill curves of RR-9 against S. aureus ATCC292131.3.5 掃描電鏡結(jié)果通過大腸桿菌與金黃色葡萄球菌細(xì)胞受損部位的掃描電鏡觀測結(jié)果來初預(yù)測抗菌肽的作用方式。結(jié)果如圖 1.3（A、B）所示，陰性組 PBS 處理的大桿菌 ATCC25922（A）表面光滑，具有完整結(jié)構(gòu)。經(jīng)過 AMP RR-9 處理后（B細(xì)菌表面發(fā)生了顯著的變形、破碎等形態(tài)變化。RR-9 抗菌肽對于金黃色葡萄球菌 ATCC29213 的作用如圖 1.3（C、D）所對照組中（C），細(xì)胞表面光滑，形狀規(guī)整，呈典型的葡萄球形，而經(jīng)過抗菌處理組（D）中葡萄球菌菌體形態(tài)發(fā)生了顯著變化，可見細(xì)胞表面皺縮、破碎形狀不規(guī)則。由此可見抗菌肽對兩種細(xì)菌均表現(xiàn)了明顯的破壞作用。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

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本文編號(hào)：2725990