【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗稱“豬藍耳病”、“神秘病(MSD)”,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一種能夠在豬群間迅速傳播的烈性傳染病,該病自首次出現(xiàn),短短幾年遍及全球,是我國規(guī)�；B(yǎng)豬場防控的主要傳染病。該病常與豬瘟(Classical swine fever,CSF)等其它傳染病同時或相繼感染于豬群,產生復雜的臨床癥狀和病理變化,患病豬死亡率升高,使該病的防治更加困難。在PRRS的發(fā)病過程中,IL-12主要參與機體早期的抗病毒適應性免疫和驅動細胞免疫發(fā)展,TGF-β1和IL-10則影響機體的免疫抑制過程。本試驗按照4周齡免疫CSF疫苗,6周齡免疫PRRS疫苗的免疫程序進行免疫接種,建立CSF、PRRS雙免實驗豬模型,用自主設計并由商業(yè)合成的四種PRRSV特異性肽(G1aa100-108、G2 aa96-104、N1 aa106-114、N2 aa49-57)刺激CSF、PRRS雙免實驗豬骨髓、胸腺、肺門淋巴結以及脾臟分離培養(yǎng)的淋巴細胞,應用Porcine ELISA檢測試劑盒檢測肽刺激24h和48h后培養(yǎng)上清中TGF-β1、IL-10、IL-12的分泌含量的變化,探討三種細胞因子的分泌特點,反映動物機體免疫應答的本質,為豬養(yǎng)殖產業(yè)PRRS的防治提供實驗數(shù)據(jù)。24h肽刺激組檢測結果顯示,骨髓中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-10的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-12的分泌量與空白對照組相比降低,尤其在PRRSV特異性N肽刺激下差異顯著(P0.05)。胸腺中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-10的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-12的分泌量較空白對照組降低,差異不顯著。肺門淋巴結中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-10的分泌量較空白對照組降低,差異不顯著,IL-12分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05)。脾臟中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異不顯著;IL-10的分泌量在PRRSV特異性G肽刺激后,與空白對照組相比降低,差異顯著(P0.05);IL-12的分泌量在PRRSV特異性N肽刺激后,與空白對照組相比升高,尤其在PRRSV特異性N2肽刺激下差異顯著(P0.05)48h肽刺激組檢測結果顯示,骨髓中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-10的分泌量與空白對照組相比降低,尤其在PRRSV特異性N肽刺激后差異顯著(P0.05);IL-12的分泌量在PRRSV特異性G2、N1、N2肽刺激后,與空白對照組相比降低,差異不顯著。胸腺中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-10的分泌量與空白對照組相比降低,尤其在PRRSV特異性N肽刺激下差異顯著(P0.05),IL-12的分泌量與空白對照組相比降低,差異不顯著。肺門淋巴結中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-10的分泌量較空白對照組降低,差異顯著(P0.05),IL-12的分泌量與空白對照組相比降低,尤其在PRRSV特異性N1肽刺激下差異顯著(P0.05)。脾臟中分離出的T淋巴細胞經過PRRSV特異性G肽刺激后,TGF-β1的分泌量較空白對照組降低,差異不顯著;IL-10的分泌量在PRRSV特異性G肽刺激后,與空白對照組相比降低,差異不顯著;IL-12的分泌量在PRRSV特異性G肽和N肽刺激后,與空白對照組相比升高,尤其在PRRSV特異性N2肽刺激下差異顯著(P0.05)。結果表明,實驗豬在CSF、PRRS疫苗免疫成功的情況下,機體免疫系統(tǒng)處于相對敏感的免疫應答狀態(tài),能夠對四種PRRSV特異性肽的刺激產生較強的反應。當CSF、PRRS免疫狀態(tài)良好時,四種PRRSV特異性肽能夠對骨髓、胸腺和肺門淋巴結中TGF-β1、IL-10的分泌產生抑制作用,弱化對機體的免疫抑制作用。在對IL-12的影響上,G1、G2肽刺激后,有明顯的促進其分泌的趨勢,但仍需要進一步的試驗驗證。此外,從數(shù)據(jù)上可以看出,N1、N2肽對組織器官中細胞因子分泌的影響比G1、G2肽更顯著,具有更強的作用效果。本試驗結合課題組前期的試驗結果,為PRRSV合成肽疫苗的研制提供理論和數(shù)據(jù)支持。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S858.28
【圖文】：

用 ELISA 抗體檢測試劑盒，對 3 頭實驗豬的血清樣本進行檢測，，CSFV 抗體阻斷率均大于 40%，IPRC 值均大于 20，PCV2 樣本499，PRV 樣本的 S/N 大于 0.70。表 1. 5 實驗豬抗體的檢測結果Table 1.5 Detection results of antibodies of experimental pigsCSFV 抗體阻斷 ELISA 檢測方法（抗體阻斷率/%）PRRSV 抗體間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（IPRC 值）結50.68% 24.29 72.28% 26.31 61.59% 24.53 胞鑒定結果過流式細胞術，檢測骨髓、胸腺、肺門淋巴結以及脾臟中分離出的果顯示，被檢測的樣本中含有 CD3、CD4 以及 CD8 抗原（見圖

圖 2.1 24h 肽刺激組 TGF-β1 的分泌量。與空白對照組相比 P<0.05 為顯著性變化，用*表示。.1 The secretion levels of TGF-β1 secreted by T-lymphocytes24 hours. Compared with the blank control group, signigicantly changed,which was expressed by *.10 分泌量的變化織器官中的 T 淋巴細胞經 PRRSV 特異性 G 肽的刺激后，量的變化如圖 2.2，骨髓、胸腺和脾臟中的 T 淋巴細胞，經激后，IL-10 的分泌量與空白對照組相比降低，差異顯著（中的 T 淋巴細胞分泌的 IL-10，與空白對照組相比降低，差

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本文編號：2725509