【摘要】：意義:我國(guó)是動(dòng)物性食品生產(chǎn)和消費(fèi)的大國(guó),無(wú)論是產(chǎn)量還是消費(fèi)水平,自2011年起就一直居于世界前茅,自我國(guó)加入WT0以來(lái),獸藥殘留問題日益嚴(yán)重影向我國(guó)的進(jìn)出口和國(guó)家的經(jīng)濟(jì)利益,動(dòng)物源食品中的獸藥殘留已逐漸成為我國(guó)及全世界均關(guān)注的一個(gè)焦點(diǎn);監(jiān)測(cè)與控制動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留,保證食品安全,建立靈敏、準(zhǔn)確、可靠的抗生素殘留檢測(cè)方法成為研究的重點(diǎn),其中四環(huán)素類藥物殘留的研究就是其中的一個(gè)重點(diǎn)方面。我國(guó)已建立四環(huán)素類藥物的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法,但目前隨著國(guó)際社會(huì)對(duì)食品安全的關(guān)注,對(duì)檢測(cè)方法靈敏度的要求也越來(lái)越高。近年來(lái),液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用取得了很大進(jìn)展,在各領(lǐng)域應(yīng)用越來(lái)越廣泛,尤其在食品分析領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用,其分離能力、選擇性、靈敏度都具有極高的效能,不但能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量,還能提供結(jié)構(gòu)信息。本次試驗(yàn)就是以GB/T21317-2007為基礎(chǔ),采用液相色譜作為分離系統(tǒng),質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)的方法優(yōu)化試驗(yàn)。目的:在GB/T 21317-2007的基礎(chǔ)上建立高效、可行的動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類抗生素LC-MS/MS同步檢測(cè)方法體系,優(yōu)化其提取條件、色譜條件、質(zhì)譜條件,以達(dá)到高效提取,操作簡(jiǎn)單、提取結(jié)果精確可信的目的。方法:搜索一些現(xiàn)階段獸藥殘留現(xiàn)狀的分析報(bào)告、相關(guān)著作、文獻(xiàn)及研究結(jié)果,初步了解了獸藥殘留現(xiàn)階段的研究動(dòng)態(tài)、前沿進(jìn)展;分析目標(biāo)物質(zhì)提取的影響因素,采用比較研究法及實(shí)證分析法,對(duì)同一個(gè)因素進(jìn)行多水平或多選擇試驗(yàn),得到的結(jié)果進(jìn)行平均值計(jì)算,再制作坐標(biāo)圖,以取得最優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)化后的條件:樣品經(jīng)20mL EDTA-Mcllvaine緩沖液與5mL甲醇兩次提取,超聲20min,5℃、10000 r/min離心15min,濾紙過(guò)濾得到上清液,經(jīng)HLB固相萃取柱凈化,通過(guò)5%甲醇水溶液淋洗雜質(zhì)后,再用甲醇溶液洗脫,1mL甲醇-0.1%甲酸水(20:80)復(fù)溶,以乙腈:0.1%甲酸水為流動(dòng)相,LC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:該次實(shí)驗(yàn)四種四環(huán)素類抗生素具有良好的線性關(guān)系,色譜峰型尖峭,無(wú)雜峰,r均≥0.995;其中土霉素、四環(huán)素、金霉素和強(qiáng)力霉素的檢出限為0.1μg/kg;畜肉及禽肉的目標(biāo)四環(huán)素加標(biāo)回收率均處于80%-110%;儀器重現(xiàn)性RSD1%。結(jié)論:經(jīng)優(yōu)化過(guò)后的液質(zhì)檢測(cè)方法與GB/T 21317-2007相比,具有較高的選擇性和靈敏度,回收率和重現(xiàn)性良好,外加分析條件要求低、實(shí)用性強(qiáng),故此次優(yōu)化較為成功,具有較好的推廣價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S859.84
【圖文】：

圖 3-1 影響因素魚骨圖Fig. 3-1 Fish bone map of influencing factors3.1.1 提取液對(duì)四環(huán)素類藥物回收率的影響提取液體積過(guò)少，會(huì)造成目標(biāo)物質(zhì)提取不完全；提取液體積過(guò)多，則會(huì)造成溶劑的浪費(fèi)，進(jìn)而導(dǎo)致檢測(cè)經(jīng)費(fèi)的不必要輸出�？紤]到在提取過(guò)程中，提取液的總體積與前后兩次加入的體積對(duì)目標(biāo)物回收均有極大的影響，于是設(shè)計(jì)了 3.1.1.1 及 3.1.1.2 的兩個(gè)試驗(yàn)；經(jīng)查證，土霉素易溶于甲醇、丙酮，微溶于乙醇；金霉素微溶于甲醇、水、乙醇；四環(huán)素微溶于水，略溶于乙醇；強(qiáng)力霉素易溶于甲醇、水，微溶于乙醇、丙酮。考慮到丙酮有毒性及綜合方面的原因，決定選甲醇同樣作為提取液加入樣品中，設(shè)計(jì)了 3.1.1.3 的試驗(yàn)。3.1.1.1 EDTA-Mcllvaine 緩沖溶液的體積變化對(duì)回收率的影響畜肉：以豬肉的陰性樣品作為本底，稱取質(zhì)量為 5g 的樣品作為平行樣，分別加入 100μL1.00 μg/mL 四種抗生素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，即加入四種抗生素混標(biāo)的絕對(duì)量為 100ng，靜置 30min確保標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與肉樣充分混合，即得到已知濃度的陽(yáng)性樣品；取 7 份陽(yáng)性樣品，分別向其中加入 5mL、10mL、15mL、20mL、25mL、30m、35mL EDTA-Mcllvaine 緩沖提取液，重復(fù) 5次，發(fā)現(xiàn)樣品中加入 20mL 提取液后目標(biāo)物質(zhì)的回收率達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，所以最終加入 20mL

20圖 4-1 離子通道圖Fig. 4-1 Ion Channel Diagram準(zhǔn)曲線肉、雞肉的陰性樣品為基質(zhì)，制作基質(zhì)標(biāo)曲線。過(guò)程是稱取六份陰性樣品量為 1-100ng 的混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，隨同樣品測(cè)定過(guò)程一起進(jìn)行前處理，并以同樣做一套基質(zhì)標(biāo)，結(jié)果顯示其標(biāo)準(zhǔn)曲線的 r 均高于 0.995，反映出其標(biāo)準(zhǔn)好；通過(guò)不同基質(zhì)的結(jié)果顯示，不同基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線不同，故后期的樣本相對(duì)應(yīng)的基質(zhì)標(biāo)處理的結(jié)果所得。）以超純水為基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為 0~100ng/mL，其方程及線性如表 4--2：

【參考文獻(xiàn)】

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