【摘要】：益生菌發(fā)酵飼料是飼料原料接種益生菌菌種進行發(fā)酵后獲得包含飼料原料、菌體及其代謝產(chǎn)物的混合物。本試驗選取48頭體重為55.31±1.98kg的杜×長×大閹割公豬,隨機分為2組,每組24頭,每組6個重復,每個重復4頭豬,分欄飼養(yǎng),分別飼喂基礎普通日糧(對照組)與EM復合益生菌全價發(fā)酵飼料(試驗組),體重達到110kg左右出欄體重時從每個重復中挑選一頭豬進行屠宰取樣。采用全自動血細胞分析儀分析育肥豬血液常規(guī)生理指標的變化,采用ELISA檢測育肥豬血清中免疫球蛋白含量和炎癥因子水平,使用RT-PCR檢測育肥豬血液和腸道免疫相關(guān)基因的表達,采用Hiseq高通量測序方法檢測育肥豬十二指腸和結(jié)腸內(nèi)容物及其黏膜樣本中細菌菌群組成,采用基于LC-MS的非靶向代謝組學檢測結(jié)腸內(nèi)容物中代謝產(chǎn)物的組成。獲得以下結(jié)果:1.試驗組和對照組在白細胞數(shù),淋巴細胞絕對值,中間細胞絕對值,粒細胞絕對值,紅細胞數(shù)和血小板數(shù)等方面無顯著差異(P0.05)。益生菌發(fā)酵飼料組血清中免疫球蛋白IgG和IgM含量顯著高于對照組(P0.05),此外,血清中IgA和炎癥因子(IL-10和TNF-α)的水平?jīng)]有顯著影響(P0.05)。試驗組血液中免疫相關(guān)基因TLR3、TLR4、TLR6和TLR8的表達顯著高于對照組(P0.05)。2.試驗組十二指腸的TLR5、TLR1、TLR2、TLR4、TLR9、PBD-1和PR-39的表達水平顯著高于對照組(P0.05),在結(jié)腸部位具有統(tǒng)計學意義的有TLR1、TLR2 TLR4、TLR5、TLR7和PBD-1的表達水平顯著高于對照組(P0.05)。3.益生菌發(fā)酵飼料能夠顯著提高十二指腸絨毛高度(P0.05),對十二指腸和結(jié)腸內(nèi)容物及其黏膜微生物菌群的多樣性沒有顯著性影響,顯著降低十二指腸內(nèi)容物中的擬桿菌門和疣微桿菌門的比例(P0.05),顯著降低結(jié)腸內(nèi)容物中擬桿菌門、變形菌門和疣微桿菌門的比例(P0.05)同時顯著提高厚壁菌門和放線菌門的比例(P0.05)。十二指腸黏膜菌群中柔膜菌門比例顯著低于對照組(P0.05),結(jié)腸黏膜菌群中試驗組變形桿菌門極顯著高于對照組(21.45%vs 1.03%)(P=0.007),試驗組柔膜菌門顯著低于對照組(P0.05)。4.非靶向代謝組學的結(jié)果發(fā)現(xiàn),在正負離子模式下共鑒定到1351種代謝物在益生菌發(fā)酵飼料組和對照組之間顯著不同,其中上調(diào)的代謝物有293種,下調(diào)的代謝物有1058種。共影響14條代謝通路,其中C5-支鏈二元酸代謝和嘌呤代謝兩個通路具有顯著性差異(P0.05)。綜上所述,將益生菌發(fā)酵飼料進入育肥豬腸道能夠刺激全身免疫系統(tǒng)改善免疫指標;優(yōu)化腸道微生物群落;同時其在腸道發(fā)酵產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物作用于動物機體產(chǎn)生積極影響,該研究為益生菌發(fā)酵飼料在規(guī)�；i場作為抗生素的替代品開展無抗養(yǎng)殖提供潛在解決方案。
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S828.5
【圖文】：

在反芻動物和水產(chǎn)養(yǎng)殖動物領(lǐng)域中；（5）其他發(fā)酵產(chǎn)品還包括發(fā)酵菜籽餅（粕）和發(fā)酵棉籽餅（粕）等，目前還處于研究推廣階段，應用較少。圖1-1 發(fā)酵飼料的分類Figure 1-1 Analytical classification of fermented feed

1.5.116S rRNA 基因擴增子測序技術(shù)微生物的研究比較復雜，因為在環(huán)境樣品中高達80％的微生物是不可培養(yǎng)的或不易培養(yǎng)的。20世紀80年代后期，Sanger等（1977）使用Sanger方法發(fā)明了DNA測序后，微生物生態(tài)學的研究開始發(fā)生巨大變革(Sanger et al., 1977)。Lane等（1985）首次使用該方法對16SrRNA基因的完整序列進行系統(tǒng)發(fā)育研究(Laneetal.,1985)，之后使用聚合酶鏈反應技術(shù)（PCR）的發(fā)展改進了這種由微生物群落的系統(tǒng)發(fā)育研究組成的新方法(Mullis and Faloona, 1987)。目前，16S rRNA基因擴增子技術(shù)已被成熟的應用于分析環(huán)境樣本中的微生物群落組成，其被廣泛認可的主要優(yōu)點有：（1）其基因序列幾乎存在于所有細菌中，而且通常作為多基因家族或者操縱子存在；（2）16SrRNA基因隨時間的變化其功能沒有改變，這表明隨機序列變化能進行更準確的進化測量；（3）16SrRNA基因片段足夠大（1500 bp），可用于信息學目的(Janda and Abbott, 2007)。近年來國內(nèi)外學者采用不同的分子生物學方法對細菌的16S rRNA進行研究，得到了廣泛的細菌16SrRNA序列庫。使用16SrRNA基因擴增子技術(shù)可以檢測腸道中常規(guī)方法不能培養(yǎng)或生長緩慢的細菌。目前市面上常用的用于研究環(huán)境微生物的高通量測序平臺有Illumina MiSeq、IlluminaHiSeq和Ion Torrent PGM。

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本文編號：2725298