發(fā)布時間：2020-06-22 05:08

【摘要】：肌肉和脂肪是決定豬肉品質(zhì)的兩個主要因素,而肌內(nèi)脂肪是影響肌肉組織中脂肪含量的重要方面,因此探究肌內(nèi)脂肪沉積的調(diào)控機(jī)制對改善豬肉品質(zhì)具有重要意義。長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是機(jī)體產(chǎn)生的一類非編碼RNA,參與許多生命活動,包括細(xì)胞的增殖與分化等;目前的研究表明lncRNAs通過多種方式參與脂肪細(xì)胞的分化聚脂,但對豬肌內(nèi)脂肪沉積的研究較少。本研究從脂肪型八眉豬與瘦肉型大白豬的背最長肌中分離肌內(nèi)脂肪細(xì)胞,體外誘導(dǎo)分化0、2、4和8d后進(jìn)行測序,篩選到隨肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化程度差異表達(dá)的lncIMF4,研究了其對肌內(nèi)脂肪沉積的影響。首先,本研究對兩種不同類型豬種及不同分化時期的肌內(nèi)脂肪細(xì)胞進(jìn)行測序,篩選到部分差異表達(dá)的lncRNAs;其次,通過生物信息學(xué)分析篩選到lncIMF4作為實(shí)驗(yàn)的研究對象;然后,合成并轉(zhuǎn)染了lncIMF4 siRNA,利用EDU、CCK-8及流式細(xì)胞術(shù)等檢測了lncIMF4對豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞增殖的作用;接著利用油紅O與Bodipy染色等探究了lncIMF4對細(xì)胞分化的影響;最后,本研究構(gòu)建了豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞自噬模型,研究了lncIMF4對豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞自噬的作用,并發(fā)現(xiàn)lncIMF4通過自噬參與調(diào)控肌內(nèi)脂肪細(xì)胞脂解。得到的主要研究結(jié)果如下:1.八眉豬與大白豬的肌內(nèi)脂肪存在許多差異表達(dá)的lncRNAs;lncIMF4在肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化過程中,表達(dá)量先增加后減少,在分化第2d表達(dá)量最高;lncIMF4在豬各組織中均有一定表達(dá)量,在脂肪組織中表達(dá)量較高;lncIMF4在豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有分布,主要定位于細(xì)胞核中;2.干擾lncIMF4促進(jìn)豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞增殖期相關(guān)周期基因CyclinD與CyclinE的mRNA與蛋白的表達(dá)(P0.05),表明干擾lncIMF4促進(jìn)肌內(nèi)脂肪細(xì)胞的增殖;3.干擾lncIMF4促進(jìn)豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因PPARγ與CEBPα等的mRNA與蛋白的表達(dá)(P0.05),且油紅O染色顯示出脂滴增多,表明干擾lncIMF4促進(jìn)肌內(nèi)脂肪細(xì)胞的分化;4.干擾lncIMF4下調(diào)豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞自噬相關(guān)基因mRNA與蛋白的表達(dá)(P0.05),并發(fā)現(xiàn)干擾lncIMF4通過自噬抑制脂解。綜上,lncIMF4在豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞成脂過程中差異表達(dá),干擾lncIMF4促進(jìn)豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞增殖與分化,抑制肌內(nèi)脂肪細(xì)胞自噬。本研究篩選到lncIMF4參與調(diào)控豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞增殖、分化與自噬,研究結(jié)果為lncRNAs調(diào)控豬肌內(nèi)脂肪沉積提供了借鑒與參考。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S828
【圖文】：

的核質(zhì)分離raphPad Prism 6.0 進(jìn)行繪圖。結(jié)果以 means ±析 的篩選驗(yàn)分離取自脂肪型豬種八眉豬與瘦肉型豬種分化第 0、2、4 及 8d 收集細(xì)胞，進(jìn)行測序，期的各個階段。如圖 2-1 所示，得到 lncRNA分化階段差異表達(dá)熱圖。

第二章 lncIMRF4 的篩選與表達(dá)規(guī)律為了篩選調(diào)控豬肌內(nèi)脂肪的 lncRNAs，隨后對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，利用三步法進(jìn)行篩選，得到差異表達(dá)的 lncRNAs（圖 2-2）。結(jié)果顯示 lnc 000415 隨著豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化差異表達(dá)，且在八眉與大白豬中有相同的表達(dá)趨勢，因此本實(shí)驗(yàn)將 lncRNA000415 作為本實(shí)驗(yàn)的研究對象，并根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果命名為 lncIMF4（lncRNA intramuscular fat 4）。

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