【摘要】：抗生素對畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重大作用,但動物機(jī)體只能吸收少量抗生素,大部分隨機(jī)體代謝排出體外。隨著抗生素的大量應(yīng)用,動物體內(nèi)誘導(dǎo)出大量耐藥菌和耐藥基因(Antibiotic resistance genes,ARGs),這些耐藥菌和耐藥基因隨糞便排出機(jī)體進(jìn)入環(huán)境。環(huán)境中的土著菌在抗生素的選擇壓力及耐藥基因橫向轉(zhuǎn)移機(jī)制(Horizontal gene transfer,HGT)作用下獲得耐藥性,極大的增加了周邊環(huán)境的ARGs豐度及土著耐藥菌的產(chǎn)生。ARGs在環(huán)境中的傳播有可能對食品、水源和公共健康造成威脅。本文選取新疆和青海不同氣候條件下奶牛養(yǎng)殖運(yùn)動場、厭氧發(fā)酵、堆肥處理過程和有機(jī)肥加工過程作為研究對象,較全面的檢測分析了奶牛養(yǎng)殖環(huán)境和糞肥處理過程中ARGs和耐藥菌的分布情況。本研究主要結(jié)果如下:1、奶牛養(yǎng)殖運(yùn)動場內(nèi)耐藥菌群主要集中在埃希氏菌屬、假單胞菌屬、腸球菌屬、鏈球菌屬、變形桿菌屬、葡萄球菌屬、不動桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、芽孢桿菌屬等。經(jīng)復(fù)方新諾明、萬古霉素、苯唑西林和紅霉素等藥物篩選后樣品耐藥率高達(dá)90%以上,經(jīng)卡那霉素、四環(huán)素和氟苯尼考藥物篩選后樣品耐藥率介于60-70%之間,環(huán)丙沙星篩選后樣品耐藥率為35%�？敲顾�、紅霉素、四環(huán)素、氟苯尼考和復(fù)方新諾明等藥物基因型與耐藥表型基本一致,均具有較高的樣品耐藥率和基因檢出率;環(huán)丙沙星樣品耐藥率最低,但實(shí)驗(yàn)中檢測的6種基因,5種基因檢出率低或未檢出,aac(6)-Ib-cr基因檢出率高達(dá)95%;苯唑西林和萬古霉素藥物篩選后的樣品具有很高的耐藥率,但所檢測耐藥基因均未檢出。2、厭氧發(fā)酵過程中的糞渣沉淀階段對耐藥菌數(shù)量有明顯影響,其他階段影響不大。堆肥過程對耐藥菌無明顯消除作用。厭氧發(fā)酵和堆肥兩種處理方式對于floR、aac(6)-Ib-cr、ermB、sul1、sul2和aac(6)/aph(2″)基因無消除效果。堆肥處理對于fexA、gyrB和ermF基因具有一定的消除作用。厭氧發(fā)酵處理對于fexA、grlB和ermC基因具有一定的消除作用;無法以去除效果判定兩種糞便處理方式優(yōu)劣。3、糞肥處理過程改變了耐藥菌群結(jié)構(gòu),降低了耐藥菌種類和數(shù)目,耐藥菌數(shù)量降低了40%。糞肥處理過程對fexA、cfrB、ermC、tetB和tetC基因具有去除作用,對floR、ermB、ermF、tetM、sul1、sul2和aac(6)/aph(2″)無去除作用。
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.6;S141.4
【圖文】：

圖 2.1 部分菌株 16S rRNA 基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳Fig. 2.1 PCR amplification of 16s rRNA gene of strainsM: DL-2000 marker; 1-15: Bacteria Samples表 2.8 耐藥菌株分離情況Table 2.8 Isolation of drug-resistant strains菌株名稱 株數(shù)（%）Enterococcus faecium 8（53.3）Enterococcus aquimarinus 4（26.7）Escherichia fergusonii 1（6.7）Paenibacillus borealis 1（6.7）Sphingobacterium composti 1（6.7）B: 四環(huán)素耐藥菌鑒定結(jié)果將四環(huán)素含量為 16μg/mL 藥物培養(yǎng)基中篩選分離純化得到的 13 株細(xì)菌，分別進(jìn)行 16S rRNA 目的基因片段擴(kuò)增，將預(yù)定基因進(jìn)行測序并用 NCBI Blast 在線軟件進(jìn)行比對分析，結(jié)合 VITEK-2-COMPACT15 全自動微生物鑒定系統(tǒng)對所

為主要分離菌，具體情況見下表。表 2.15 耐藥菌株分離情況Table 2.15 Isolation of drug-resistant strains菌株名稱 株數(shù)（%） 菌株名稱 株數(shù)（%）Escherichia fergusonii 8（30.8） Pseudomonas stutzeri 1（3.8）Alcaligenes faecalis 3（11.5） Escherichia marmotae 1（3.8）Pseudomonas songnenensis 2（7.7） Bordetella sputigena 1（3.8）Comamonas jiangduensis 1（3.8） Acinetobacter baumannii 1（3.8）Proteus vulgaris 1（3.8） Enterobacter bugandensis 1（3.8）Achromobacter kerstersii 1（3.8） Pseudomonas alcaliphila 1（3.8）Kluyvera intermedia 1（3.8） Bacillus paralicheniformis 1（3.8）Proteus mirabilis 1（3.8） Shewanella putrefaciens 1（3.8）實(shí)驗(yàn)采用八類抗生素對奶牛養(yǎng)殖運(yùn)動場樣品進(jìn)行耐藥菌篩選，其中耐苯唑西林、紅霉素、萬古霉素和復(fù)方新諾明等藥物得樣品數(shù)高達(dá) 90%以上，且其對應(yīng)的耐藥菌株數(shù)較高；環(huán)丙沙星耐藥樣品數(shù)和耐藥菌株數(shù)最低。具體情況見下圖。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2723455