發(fā)布時(shí)間：2020-06-19 01:41

【摘要】：大腸桿菌類(lèi)屬于埃希菌屬,又稱(chēng)大腸埃希菌,是溫血?jiǎng)游锖腿梭w腸道正常菌群的組成部分。大腸桿菌在動(dòng)物糞便中含量豐富,通常通過(guò)直接或間接接觸傳播。生產(chǎn)中大腸桿菌病危害嚴(yán)重,臨床癥狀復(fù)雜,病例特點(diǎn)多樣。近年來(lái),隨著集約化奶牛場(chǎng)主要疾病的綜合防治,大腸桿菌病呈上升趨勢(shì)。奶制品和肉制品作為人們生活中的必需品,動(dòng)物大腸桿菌病的感染可能通過(guò)食物鏈傳遞給人類(lèi),影響人類(lèi)健康,危害公共衛(wèi)生安全。抗生素在治療大腸桿菌病方面仍然有效,但藥物的不合理使用不僅會(huì)導(dǎo)致乳制品中抗生素殘留,還會(huì)導(dǎo)致奶牛大腸桿菌耐藥率高、耐藥譜廣、多藥耐藥株比例高,對(duì)養(yǎng)殖業(yè)和人類(lèi)健康構(gòu)成巨大威脅。本實(shí)驗(yàn)為調(diào)查了解泰安地區(qū)幾個(gè)大型規(guī)�；膛�(chǎng)的大腸桿菌病的流行病學(xué)情況,從泰安地區(qū)的4個(gè)規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)共采集新鮮糞便樣品194份,通過(guò)增菌、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)、16SrRNA鑒定等方法,對(duì)糞便中的大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定。使用血清診斷試劑盒進(jìn)行平板凝集實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)所分離的菌株中腸致病性大腸桿(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)、腸侵襲性大腸桿菌(Enteric invasive Escherichia coli,EIEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(Enterotoxic Escherichia coli,ETEC)和腸出血性大腸桿菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)的攜帶情況;通過(guò)K-B法進(jìn)行9類(lèi)14種常用藥物的藥物敏感實(shí)驗(yàn),來(lái)檢測(cè)分離菌株對(duì)不同抗生素的耐藥性;提取菌株基因組DNA檢測(cè)6類(lèi)24種耐藥基因和Ⅰ類(lèi)整合子,以了解菌株中不同耐藥基因以及耐藥基因盒的攜帶情況;使用多位點(diǎn)序列分型技術(shù)對(duì)大腸桿菌分離株進(jìn)行溯源分析,從而闡明大腸桿菌在該區(qū)域的流行傳播情況;對(duì)分離菌株進(jìn)行綿羊血平板培養(yǎng),檢測(cè)菌株中攜帶產(chǎn)溶血環(huán)菌株的比例,選擇其中最大直徑溶血環(huán)的3株菌進(jìn)行人工接種實(shí)驗(yàn)探究奶牛源大腸桿菌對(duì)8日齡SPF雞和斷奶30天的家兔的致病性。分離鑒定結(jié)果顯示,從泰安4個(gè)規(guī)�；】的膛�(chǎng)采集194份糞便檢測(cè)到171株大腸桿菌,分離率為88.14%;凝集試驗(yàn)結(jié)果顯示79株大腸桿菌為致病性血清型,包含13種不同的血清型,其中O128和O143的檢出率最多,占比為7.0%(12/171),最常見(jiàn)的血清型為EPEC(19.9%)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,分離株對(duì)氨芐西林耐藥率最高為33.9%,其次為四環(huán)素,耐藥率為24.0%,分離株對(duì)頭孢菌素類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、氯霉素類(lèi)抗生素均表現(xiàn)較為敏感,敏感率為90%以上,另外,多重耐藥菌株的比率占22.2%;耐藥基因檢測(cè)結(jié)果顯示,β內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因blaTEM、blaCTX-M-15、blaOXA-1和blaCMY-2檢出率分別為59.1%、4.7%、1.8%、0.6%;喹諾酮類(lèi)耐藥基因aac(6’)-Ib-cr、qnrS、oqxa和qnrD檢出率分別為4.1%、1.8%、1.2%、0.6%;氨基糖苷類(lèi)耐藥基因ant(2’)和aac(3)-Ⅱ檢出率分別為40.9%、2.3%;磺胺類(lèi)耐藥基因sul2、sul3和sul1檢出率分別為16.4%、10.5%、3.5%;氯霉素耐藥基因cmlA檢出率為0.6%;未檢測(cè)到四環(huán)素耐藥基因,未檢測(cè)到blaPSE、blaSHV、qnrA、qnrB、qnrC、aac(3)-I、aac(3)-III、aac(3)-IV、tetA、tetB耐藥基因。整合子檢測(cè)結(jié)果顯示,7株菌株攜帶4種耐藥基因盒,檢出率為4.1%(7/171),其中最常見(jiàn)的耐藥基因盒為dfrA12-aadA2-sul1(4/7),整合子-基因盒分子特征以介導(dǎo)磺胺-甲氧芐啶類(lèi)和氨基糖苷類(lèi)耐藥的dfrA和aadA基因類(lèi)型為主,耐藥菌株中僅少數(shù)攜帶Ⅰ類(lèi)整合子。通過(guò)MLST分析,檢測(cè)出8種ST型分別為ST58、ST5、ST23、ST1146、ST172、ST155、ST661和ST3096,其中ST58占比最高為26.3%,不同奶牛場(chǎng)所分的菌株存在ST型相同的情況,其中ST8與ST155為一個(gè)克隆復(fù)合物,說(shuō)明不同奶牛場(chǎng)所分的菌株存在親緣關(guān)系較近的可能,大腸桿菌在不同奶牛場(chǎng)交叉?zhèn)鞑ァ?dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,所選的奶牛源大腸桿菌菌株,對(duì)實(shí)驗(yàn)30 d家兔的死亡率為A菌株(5/5),B菌株(1/5),C菌株(1/5);對(duì)實(shí)驗(yàn)8 d SPF雞的死亡率為A菌株(1/5),B菌株(0/5),C菌株(0/5)。說(shuō)明所篩選的大腸桿菌菌株對(duì)SPF雞和家兔具有致病性,并且對(duì)不同物種的致病性有差異。本研究從多個(gè)層面分析了2017年泰安地區(qū)部分規(guī)模化奶牛場(chǎng)奶牛源大腸桿菌流行情況,對(duì)其有了初步認(rèn)識(shí),該研究對(duì)奶牛場(chǎng)大腸桿菌的防控具有參考意義,并揭示了對(duì)公共衛(wèi)生安全的潛在危害。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S858.23
【圖文】：

表 6 大腸桿菌分離結(jié)果Table 6 Separation of Escherichia coli奶牛場(chǎng) 1 奶牛場(chǎng) 2 奶牛場(chǎng) 3 奶牛場(chǎng) 4樣品數(shù)量 45 30 50 69菌株 43 27 46 55率 95.6% 90.0% 92.0% 80.9%腸桿菌在選擇培養(yǎng)基上的形態(tài)腸桿菌在麥康凱瓊脂上進(jìn)行培養(yǎng)，37°C 培養(yǎng) 24h，形成紅色、光滑濕潤(rùn)、緣整齊直徑為 1.5-2.5mm 的小菌落。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，之后形成了的黑色小菌落（圖 1）因?yàn)槭沁x擇培養(yǎng)基，即初步判斷為大腸桿菌。

表 6 大腸桿菌分離結(jié)果Table 6 Separation of Escherichia coli奶牛場(chǎng) 1 奶牛場(chǎng) 2 奶牛場(chǎng) 3 奶牛場(chǎng) 4樣品數(shù)量 45 30 50 69菌株 43 27 46 55率 95.6% 90.0% 92.0% 80.9%腸桿菌在選擇培養(yǎng)基上的形態(tài)腸桿菌在麥康凱瓊脂上進(jìn)行培養(yǎng)，37°C 培養(yǎng) 24h，形成紅色、光滑濕潤(rùn)、緣整齊直徑為 1.5-2.5mm 的小菌落。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，之后形成了的黑色小菌落（圖 1）因?yàn)槭沁x擇培養(yǎng)基，即初步判斷為大腸桿菌。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2720128