發(fā)布時間：2020-06-16 22:42

【摘要】：面對耐藥甚至多重耐藥細菌種類增加所造成的人類衛(wèi)生健康和食品安全雙重壓力,尋找新型臨床治療替代藥物已經成為當務之急。抗菌肽作為生物界普遍存在的先天免疫防御系統(tǒng)一部分,以廣泛的來源,豐富的序列結構以及其表現(xiàn)出的抗細菌、抗病毒、抗寄生蟲、抗腫瘤和免疫調節(jié)等多樣藥用生物活性成為備受關注的焦點。本實驗室前期研究工作中,在牛脾臟內分離到一個新抗菌肽BSN-37,內含37個氨基酸殘基,富含脯氨酸和精氨酸,并經初步測定對大腸桿菌具有較低的MICs。本研究在前期試驗的基礎上通過BSN-37體外的生物活性試驗、對沙門氏菌的作用機制和對沙門氏菌胞內增殖的影響能力,闡述抗菌肽BSN-37的生物活性,殺菌機制,并為開發(fā)抗菌肽BSN-37成為治療沙門氏菌感染藥物奠定理論基礎。體外生物活性研究包括對系列模式菌株和臨床分離耐藥沙門氏菌MICs檢測、鹽離子抗性、殺菌動力學、溶血性和細胞毒性。結果發(fā)現(xiàn),抗菌肽BSN-37對革蘭氏陰性菌有良好的抑菌效果,對耐藥菌也表現(xiàn)出與相應模式菌株相似MICs;除Ca~(2+)外主要生理濃度鹽離子不影響B(tài)SN-37對沙門氏菌的抑菌活性;抗菌肽BSN-37作用呈現(xiàn)濃度時間依賴性;抗菌肽BSN-37表現(xiàn)出極低的溶血性,且對VERO、CEF、RAW264.7和IPEC-J2未表現(xiàn)細胞毒性�？傊�,抗菌肽BSN-37體外對沙門氏菌抑菌活性穩(wěn)定,其活性受鹽離子生理濃度濃度影響較小,體細胞無細胞毒性。其次,研究BSN-37對鼠傷寒沙門氏菌CVCC541菌膜通透性、細胞膜去極化并掃描電鏡和透射電鏡成像。在膜損傷顯著的陽性對照抗菌肽Pexiganan對比下,試驗發(fā)現(xiàn),抗菌肽BSN-37對細菌菌膜的通透性影響和去極化能力均較弱,通過掃描電鏡和透射電鏡圖像發(fā)現(xiàn)只有在高濃度或較長時間條件下抗菌肽BSN-37可以造成沙門氏菌菌膜損傷,同殺菌曲線結果保持一致,結果表明,抗菌肽BSN-37通過非膜損傷機制作用沙門氏菌。最后,研究BSN-37對MDCK胞內沙門氏菌增殖數(shù)量影響。結果表明,在沙門氏菌共侵入的16 h內,試驗組在侵入2 h加入抗菌肽BSN-37后,未處理組的MDCK胞內鼠傷寒沙門氏菌CVCC541菌數(shù)量為處理組的1.99倍,臨床分離耐藥鼠傷寒沙門氏菌SB217表現(xiàn)為2.39倍。分析表明,抗菌肽BSN-37能夠顯著減少沙門氏菌在MDCK細胞內的增殖量。綜上所述,抗菌肽BSN-37對革蘭氏陰性菌有良好抑菌活性,無細胞毒性;對沙門氏菌除Ca~(2+)外其活性不受生理鹽離子濃度影響,呈濃度時間依賴性,通過非模損傷機制作用沙門氏菌,并對細胞內沙門氏菌增殖產生影響。
【學位授予單位】：河南科技學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.61
【圖文】：

圖 1-1 抗菌肽四個經典二級結構模式[42]A：α-螺旋；B：β-折疊；C：無規(guī)則延伸；D：環(huán)狀。Fig 1-1 Protein models representing the structural differences of the four classeantimicrobial peptides.5 抗菌肽的作用機制5.1 菌膜損傷機制研究者普遍認為抗菌肽的殺菌機制主要通過膜損傷表現(xiàn)�？咕牡慕Y構特點同，如肽鏈的長短、二級結構、疏水位點及能力、兩親性、所帶電荷數(shù)量和氨基酸此外，各種屬間細菌菌膜結構、組成以及流動性各有差異，因此，膜損傷的機制不相同，在大量的科研探索中逐漸形成以下幾種菌膜損傷模式假說。

第一章 文獻綜述類機制，。如 MccJ25 除作用核酸外，還能抑制琥珀脫氫酶和 NADH 脫細胞能量代謝[54]。部分富含脯氨酸抗菌肽與大腸桿菌的熱休克蛋白DnaK組 DnaK 的 ATP 酶活性，抑制伴侶輔助蛋白折疊生成功能構象，而同樣菌肽的 drosocin 卻使 DnaK 失活[56]，在作用同一功能蛋白是表現(xiàn)出兩種肽PR-39降解復制DNA相關蛋白影響DNA合成[57]。人源富含組氨酸的的在細菌線粒體內聚集，破壞 ATP 酶活性，誘導白色念珠菌氧化應激礙[58]。

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本文編號：2716698