本文關(guān)鍵詞：兩株林麝源銅綠假單胞菌生物學(xué)特性及胞外產(chǎn)物特性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：林麝化膿性肺炎是一種由銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染引起的以呼吸困難、鼻孔膿液流出為主要特征的慢性疾病。本試驗旨在研究從患化膿性疾病的林麝體內(nèi)分離的兩株銅綠假單胞菌(SP-N和SP-Q)的生物學(xué)特性、在單獨和1：1共同培養(yǎng)情況下的培養(yǎng)性狀以及其胞外產(chǎn)物的生物特性及理化性質(zhì),為臨床上對該疾病的診療和防疫提供理論依據(jù)。對SP-N和SP-Q進行常規(guī)細(xì)菌學(xué)鑒定和16S rRNA鑒定,發(fā)現(xiàn)2株菌均為革蘭氏陰性,其中SP-N為中長桿菌,不產(chǎn)生綠色色素；SP-Q為短桿菌,產(chǎn)生綠色色素。經(jīng)16S rRNA目標(biāo)片段測序并與NCBI比對,發(fā)現(xiàn)SP-N和SP-Q與P.Aeruginosa的的同源性在99%以上。血清型分型顯示,SP-N為銅綠假單胞菌G型,SP-Q為銅綠假單胞菌B型。SP-N、SP-Q及SP-N和SP-Q(按1：1)在37℃普通肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng),其生長曲線基本一致。單獨培養(yǎng)時,SP-N在14 h時活菌數(shù)最高,為5.6×10~10 CFU/mL; SP-Q在12 h時活菌數(shù)最高,為1.4×10~10CFU/mL;1:1比例共同培養(yǎng)時,在12h時活菌數(shù)最高,為1.0×10~10CFU/mL.用12 h的SP-N和SP-Q單獨培養(yǎng)液及按1：1共同培養(yǎng)的SP-N和SP-Q培養(yǎng)液接種小鼠,其半數(shù)致死量分別為5.05×106CFU/mL、5.22 × 108 CFU/mL和3.57×108 CFU/mL,且兩兩之間半數(shù)致死量差異顯著(P0.05),說明SP-N的培養(yǎng)液對小鼠有較強致病性,而共同培養(yǎng)并未增強致病性。經(jīng)平板玻璃紙法提取銅綠假單胞菌SP-N和SP-Q的胞外產(chǎn)物(extracellular products,ECP),測得SP-N的ECP蛋白濃度為0.8mg/mL, SP-Q的ECP蛋白濃度為0.36mg/mL.通過SDS-PAGE對ECP的蛋白進行分析,發(fā)現(xiàn)SP-N和SP-Q的ECP蛋白條帶基本一致,主要有7個蛋白條帶,其分子量分別為19kDa、23kDa、37 kDa、 42 kDa、52 kDa、 59 kDa和66 kDa。用制備的鼠抗SP-N血清對2菌株的ECP進行印跡雜交,結(jié)果顯示SP-N的ECP免疫反應(yīng)條帶主要有2條,分子量約為42 kDa和66kDa。 SP-Q的ECP免疫反應(yīng)條帶主要有1條,分子量約為42 kDa。采用杯碟法對ECP的蛋白活性進行分析,發(fā)現(xiàn)SP-N和SP-Q的ECP均具有蛋白酶、明膠酶及脲酶的活性和溶血毒性；無卵磷脂酶、脂肪酶、淀粉酶和DNA酶活性。通過固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)觀察可見,SP-N不產(chǎn)生綠膿菌素,SP-Q產(chǎn)生綠膿菌素。將SP-N和SP-Q的培養(yǎng)液經(jīng)氯仿萃取,用分光光度法測得其綠膿菌素的含量分別為0和12.9 mg/mL。ECP對小鼠的致病性試驗顯示,SP-N和SP-Q的ECP對小鼠的LDso分別為2.12 mg/kg和8.73 mg/kg。
【關(guān)鍵詞】：林麝 銅綠假單胞菌 共同培養(yǎng) 胞外產(chǎn)物
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 1 前言11-24
• 1.1 林麝研究進展11-14
• 1.1.1 分類與分布11-12
• 1.1.2 人工養(yǎng)麝的現(xiàn)狀12
• 1.1.3 麝香12-13
• 1.1.4 林麝的化膿性疾病13-14
• 1.2 銅綠假單胞菌研究進展14-16
• 1.2.1 生長要求及培養(yǎng)特性14
• 1.2.2 流行病學(xué)14-15
• 1.2.3 生化特性15-16
• 1.2.4 銅綠假單胞菌分型16
• 1.3 銅綠假單胞菌粘附因子研究進展16-17
• 1.3.1 Ⅳ型菌毛16-17
• 1.3.2 鞭毛17
• 1.3.3 細(xì)胞外粘多糖17
• 1.4 銅綠假單胞菌研胞外產(chǎn)物研究進展17-24
• 1.4.1 外毒素A(ETA)18-20
• 1.4.2 外酶(Exo)20-23
• 1.4.3 蛋白酶23
• 1.4.4 磷脂酶C(PLcs)23-24
• 1.4.5 綠膿素24
• 1.5 本研究的目的及意義24
• 2 試驗材料24-28
• 2.1 試驗菌株24-25
• 2.2 試驗動物25
• 2.3 主要試劑和藥品25
• 2.4 主要儀器25-26
• 2.5 主要溶液及配制26-28
• 2.5.1 培養(yǎng)基26-27
• 2.5.2 SDS-PAGE及Western-blotting涉及溶液27-28
• 3 試驗方法28-34
• 3.1 菌株特性28-29
• 3.1.1 菌株活化28
• 3.1.2 常規(guī)細(xì)菌學(xué)鑒定28
• 3.1.3 16SrRNA鑒定28-29
• 3.1.4 菌株血清型分型29
• 3.2 單獨及共同培養(yǎng)特性研究29-30
• 3.2.1 生長曲線的測定29-30
• 3.2.2 培養(yǎng)液的致病性30
• 3.3 胞外產(chǎn)物特性研究30-34
• 3.3.1 提取及含量測定30-31
• 3.3.2 SP-N鼠抗全菌血清制備31-32
• 3.3.3 間接ELISA檢測抗SP-N免疫小鼠血清效價32
• 3.3.4 SDS-PAGE和Wester-blotting分析32-33
• 3.3.5 胞外酶活性檢測33
• 3.3.6 綠膿素測定33-34
• 3.3.7 小鼠致病性試驗34
• 4 試驗結(jié)果34-44
• 4.1 菌株特性34-37
• 4.1.1 菌株的形態(tài)、染色觀察34-35
• 4.1.2 生理生化特性觀察35-36
• 4.1.3 菌株血清分型36
• 4.1.4 16SrRNA鑒定36-37
• 4.2 單獨及共同培養(yǎng)特性研究37-40
• 4.2.1 生長曲線的測定37-38
• 4.2.2 培養(yǎng)液的致病性38-40
• 4.3 胞外產(chǎn)物特性研究40-44
• 4.3.1 含量測定40
• 4.3.2 間接ELISA的方法檢測免疫后小鼠血清中抗體水平40-41
• 4.3.3 SDS-PAGE和Wester-blotting分析41-42
• 4.3.4 胞外產(chǎn)物酶活性分析42-43
• 4.3.5 綠膿素測定43-44
• 4.3.6 胞外產(chǎn)物對小鼠致病性試驗44
• 5 討論44-48
• 5.1 菌株特性44-45
• 5.2 單獨及共同培養(yǎng)特性研究45-46
• 5.3 胞外產(chǎn)物特性研究46-48
• 6 結(jié)論48-49
• 7 創(chuàng)新性49-50
• 參考文獻(xiàn)50-60
• 致謝60

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王繼東;周麗珍;宮玲玲;糜祖煌;秦玲;;銅綠假單胞菌的多重耐藥基因研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2006年03期

2 胡曉梅;胡福泉;;銅綠假單胞菌的細(xì)胞間信號聯(lián)系及其在感染中的作用[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2006年04期

3 陳軍;夏培元;肖光夏;;雙歧桿菌培養(yǎng)上清對銅綠假單胞菌黏附腸上皮細(xì)胞影響的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年16期

4 文怡;顧兵;劉根焰;黃s顂

本文編號：271498