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遼寧絨山羊TMSβ10和RPL36基因的克隆及表達(dá)研究

發(fā)布時(shí)間:2020-06-14 21:06
【摘要】:遼寧絨山羊以產(chǎn)絨量高、絨長(zhǎng)而著稱,是我國(guó)重要的遺傳資源,但其絨細(xì)度的高低影響其經(jīng)濟(jì)性能。本研究在測(cè)定絨山羊細(xì)度基礎(chǔ)上,對(duì)利用測(cè)序技術(shù)獲得的候選基因TMSβ10、RPL36進(jìn)行了編碼區(qū)克隆和生物信息學(xué)分析,對(duì)它們?cè)诓煌M織、不同細(xì)度絨山羊皮膚、毛囊和毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè),為進(jìn)一步深入研究羊絨細(xì)度性狀的遺傳機(jī)理奠定基礎(chǔ)。結(jié)果如下:1.所測(cè)定的絨山羊群體羊絨直徑在17.70±1.59μm之間,符合遼寧絨山羊品種標(biāo)準(zhǔn)。2.TMSβ10編碼區(qū)長(zhǎng)度為129 bp,序列分析顯示:該序列與人、豬、牛、山羊預(yù)測(cè)序列的同源性分別為86.8%、96%、99%、100%;基因編碼蛋白由42個(gè)氨基酸組成,其相對(duì)分子質(zhì)量為4.67 kDa,理論等電點(diǎn)(PI)為6.5,疏水性較強(qiáng),不存在信號(hào)肽位點(diǎn)和跨膜區(qū);編碼蛋白主要由α螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲組成;在心、肝、脾、肺、腎、皮膚組織中均有表達(dá),其中肺中表達(dá)最高;在高細(xì)度的個(gè)體皮膚和毛囊中表達(dá)水平顯著低于低細(xì)度個(gè)體,但在體外分離的毛乳頭細(xì)胞中結(jié)果相反。3.RPL36編碼區(qū)長(zhǎng)度為318 bp,生物學(xué)分析顯示:編碼區(qū)與人、豬、牛、山羊預(yù)測(cè)序列同源性分別為91%、92%、99%、100%;基因編碼蛋白由105個(gè)氨基酸組成,其相對(duì)分子質(zhì)量為12.22 kDa,理論等電點(diǎn)(PI)為11.59,疏水性較強(qiáng),不存在信號(hào)肽位點(diǎn)和跨膜區(qū);編碼蛋白主要由α螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲組成;在心、肝、脾、肺、腎、皮膚組織中均有表達(dá),其中肺和皮膚組織中表達(dá)較高;在高細(xì)度的個(gè)體皮膚和毛囊中表達(dá)水平顯著低于低細(xì)度個(gè)體,但在體外分離的毛乳頭細(xì)胞中結(jié)果相反。
【學(xué)位授予單位】:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號(hào)】:S827
【圖文】:

退行期,毛囊結(jié)構(gòu),休止期,蘇木精-伊紅染色


一般 5-10 月為生長(zhǎng)期,毛囊仍具有較高的活性,絨毛仍在毛乳頭,開(kāi)始生絨,6 月已觀察不胞向下生長(zhǎng), 作為錨定物進(jìn)入真皮成內(nèi)根鞘和發(fā)軸,隨后是外根鞘和發(fā)泡萎縮, 毛乳頭與其他結(jié)構(gòu)分離階段(圖 2)。

餅圖,退行期,羅馬數(shù)字,時(shí)間比例


圖 1-2 毛囊的發(fā)育和周期(引自文獻(xiàn) Paus R., & Cotsarelis G. N Engl J Med. 1999; 341. )注:羅馬數(shù)字表明生長(zhǎng)期和退行期亞階段,餅圖顯示各個(gè)階段的時(shí)間比例毛囊的周期性變化是一個(gè)復(fù)雜和高度協(xié)調(diào)的系統(tǒng)地發(fā)生在上皮和真皮層之間的相用[12], 包含多個(gè)分子在皮膚中的相互作用和抑制,生化過(guò)程涉及的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平相應(yīng)的變化,毛囊生長(zhǎng)主要由真皮細(xì)胞發(fā)出的信號(hào)引起, 從而形成毛芽,發(fā)芽進(jìn)而釋放一些因子, 誘導(dǎo)真皮成纖維細(xì)胞形成真皮乳突,再釋放第二個(gè)信號(hào), 以刺激增殖和上皮細(xì)胞形成完整的毛囊結(jié)構(gòu)[13]。研究表明, 波形蛋白的表達(dá)水平隨著胎鼠皮膚的生長(zhǎng)而逐漸下降[14],而在另一項(xiàng)中顯示小鼠皮膚毛囊生長(zhǎng)周期的生長(zhǎng)期階段波形蛋白表達(dá)最高[15]。在內(nèi)蒙古絨山羊皮囊發(fā)育周期中在生長(zhǎng)期表達(dá)水平顯著提高[16],而在休止期表達(dá)最低,其表達(dá)定位于外17],因此可以推斷波形蛋白在皮膚毛囊發(fā)育周期中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。也有研究叉頭盒 (Fox) 蛋白質(zhì)家族成員 FoxN1 缺失可造成無(wú)法形成胸腺和毛發(fā),皮膚發(fā)育缺9]。在皮膚中 FoxN1 主要表達(dá)在毛囊上皮和毛囊[20]。FoxI3 缺失可阻礙毛囊的向下和頭發(fā)周期,在絨山羊胎兒和成年動(dòng)物皮膚中可檢測(cè) FoxN1、FoxE1 和 FoxI3 的相對(duì)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):2713361

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