【摘要】：流行性感冒是由流感病毒感染引起的一種人畜共患急性呼吸道傳染病。流感病毒表面的血凝素蛋白(HA)能夠特異性識別并結(jié)合宿主細胞表面的糖鏈受體,這是流感病毒粘附并進入宿主進行復制和傳播的前提條件。對多種宿主而言,某些流感病毒株(如甲型H7N9和H5N1病毒)具有高致病性和高死亡率,嚴重威脅著動物和人類的健康。流感病毒的檢測是流感防控過程中必不可少的環(huán)節(jié),傳統(tǒng)的檢測技術(shù)主要依賴于免疫學和分子生物學方法,該類方法往往操作繁瑣耗時并且對儀器和生物樣品依賴性較高,因而其應用受到一定限制。本研究發(fā)展了一種基于納米生物技術(shù)的流感病毒檢測新方法,該方法無需使用抗體和核酸等不穩(wěn)定的生物制品,并且具有操作簡單、快速、可實時進行的特點。本研究建立的檢測方法運用了量子點(供體)和金納米粒子(受體)之間的熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理。筆者通過簡潔高效的合成路線,分別合成了糖基化修飾的量子點和糖基化修飾的金納米粒子,并對其化學結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)進行了表征。這兩種納米材料均具有良好的水溶性和光譜學特性,可以在水溶液中同時與HA蛋白結(jié)合,從而觸發(fā)可被靈敏檢測的FRET�；诖�,筆者進一步摸索建立了檢測流感病毒的FRET體系,使用這一體系,只需將糖基化量子點和金納米粒子以及流感病毒在緩沖液中混合,即可誘發(fā)FRET,達到檢測流感病毒的目的。筆者分別以甲型H1N1和H5N1病毒株作為檢測模型驗證了該系統(tǒng)的可靠性,對這兩株病毒的檢測極限分別為0.17和0.008 HA Titer,檢測時間為10 min。本論文運用納米生物技術(shù)研究和發(fā)展了分析和檢測流感病毒的方法。該方法的優(yōu)點在于使用糖基化的納米粒子,借助唾液酸寡糖對病毒表面蛋白HA進行特異性識別,進而通過量子點與金納米粒子間的能量共振轉(zhuǎn)移實現(xiàn)信號的轉(zhuǎn)化和放大。本論文研究表明,利用糖基化納米生物學技術(shù)檢測流感病毒的診斷技術(shù)避免生物制品的使用,實現(xiàn)對流感病毒的快速分析檢測。
【圖文】：

圖 1.1 A 型流感病毒的結(jié)構(gòu)組成 (Taisuke et al., 2005)Figure1.1 The structure of influenza virus A由雙層類脂膜和膜蛋白質(zhì)纖突構(gòu)成，在囊膜上共有三種的流感病毒和禽流感病毒結(jié)合受體的特異性在一定程度上成為單一多肽鏈（HA0），其隨后被宿主細胞蛋白酶切割A2 亞基組成，通過單個二硫鍵交聯(lián)。HA 三聚體可以分體結(jié)合位點（RBS）和融合機制 (Murti et al., 1986)。因為酸酶 NA 蛋白是同源四聚體跨膜糖蛋白，呈蘑菇狀，可。它可催化水解宿主細胞膜表面唾液酸受體糖鏈末端的類流感病毒中占主導地位的 NA 序列屬于兩個不同的群點具有 94%的氨基酸序列同一性，總體上具有 45%的同一98)。此外，也降低了病毒通過粘液的能力，這限制了到的復制周期

圖 1.3A 流感病毒受體結(jié)合特異性 (Imai et al., 2012)Figure1.3 The receptor specificity of influenza viruses：在包裝信號的調(diào)控下，8 個新合成的 vRNA 片段與 PA、PB1、PB2 和 N形成 vRNPs (Yasuda et al., 1993; Hatice et al., 2014)；并將 M1、NS2 和 vR合物，通過核孔輸出核外到達細胞質(zhì)，，之后運送到細胞膜上的組裝位點 mitt et al., 2005)。HA、NA 以及 M2 蛋白經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高爾基體途徑最終定位在病毒組裝的過程中起到將病毒其他成分招募到組裝位點的重要作用。流 8 個片段（C 型流感病毒 7 個片段）才能擁有完全的感染性。早前認為 R的，所有的 vRNP 有一個普遍存在的結(jié)構(gòu)特征，以保證他們隨機地進入后含有完整基因組片段的毒粒才具有感染性 (Enami et al., 1991)。有時候會出 病毒粒子的現(xiàn)象以保證病毒粒子有完全的基因組。新的研究結(jié)果提出一種這個模式認為每個單獨的 vRNA 節(jié)段都有獨特的包裝信號，使每個節(jié)段能保證大部分病毒粒子都含有完全的 vRNA 節(jié)段 (Bancroft et al., 2002)。出芽和釋放：流感病毒的出芽過程需要多種病毒蛋白的緊密協(xié)作。首先，
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.65

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