【摘要】：干擾素(Interferon,IFN)作為一種具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用的糖蛋白,常用于治療和預(yù)防病毒性疾病,但干擾素的半衰期短,治療疾病過(guò)程中需反復(fù)注射并且會(huì)伴隨細(xì)胞毒性的副反應(yīng)發(fā)生,這些劣勢(shì)極大地限制了其在臨床上的應(yīng)用。因此,探索性研制低毒、長(zhǎng)效性干擾素具有重要意義。本研究中,為延長(zhǎng)牛干擾素α(Bovine Interferon-α,BoIFNα)的半衰期并降低其細(xì)胞毒性,利用免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG,IgG)具有半衰期長(zhǎng)的特性,構(gòu)建了BoIFNα與牛IgG重鏈恒定區(qū)(Bovine ImmunoglobulinγChian Costont Region,BoIgCγ)的重組融合蛋白BoIFNα-IgCγ;利用牛干擾素τ(Bovine Interferon-τ,BoIFNτ)具有細(xì)胞毒性低的特性,構(gòu)建了BoIFNα(成熟肽氨基端前163個(gè)氨基酸)和BoIFNτ(成熟肽羧基端后10個(gè)氨基酸)的重組雜合蛋白BoIFNα/τ;同時(shí),構(gòu)建了BoIFNα/τ和BoIgCγ的重組融合蛋白BoIFNα/τ-IgCγ,期望其具有長(zhǎng)效低毒的雙重作用。利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了三種干擾素融合蛋白的表達(dá),并進(jìn)行了理化性質(zhì)和生物學(xué)活性研究。分別對(duì)三種干擾素融合蛋白在MDBK細(xì)胞上進(jìn)行毒性研究,在BALB/c小鼠、SD大鼠和荷斯坦牛50%血漿中進(jìn)行體外半衰期研究,在SD大鼠體內(nèi)進(jìn)行半衰期研究。研究表明,三種干擾素融合蛋白在MDBK/BT/PK-15/F81/RK-13-VSV系統(tǒng)中均具有抗病毒活性,抗病毒活性由高至低依次為BoIFNα、BoIFNα/τ、BoIFNα-IgCγ及BoIFNα/τ-IgCγ,在BHK-21/MDCK-VSV兩種系統(tǒng)上無(wú)抗病毒活性;在MDBK細(xì)胞上也具有抗BEV、BPIV3的活性。三種干擾素融合蛋白對(duì)胰酶高度敏感,耐高溫和酸堿環(huán)境,但相對(duì)于BoIFNα,BoIFNα-IgCγ和BoIFNα/τ-IgCγ對(duì)酸性環(huán)境和高溫環(huán)境更敏感。毒性研究表明,三種干擾素融合蛋白均能抑制MDBK細(xì)胞的生長(zhǎng)并呈劑量依賴性,細(xì)胞毒性由弱至強(qiáng)為BoIFNα/τ、BoIFNα/τ-IgCγ、BoIFNα、BoIFNα-IgCγ。體外半衰期研究顯示,在BALB/c小鼠、SD大鼠和荷斯坦牛50%血漿中,BoIFNα-IgCγ半衰期(約24h)顯著長(zhǎng)于BoIFNα的半衰期(約12h)。SD大鼠體內(nèi)半衰期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,注射高低兩種劑量的BoIFNα-IgCγ在血漿中發(fā)揮抗病毒作用時(shí)間分別是BoIFNα的1.4倍和2倍,BoIFNα-IgCγ、BoIFNα/τ-IgCγ在血漿中發(fā)揮抗病毒作用時(shí)間均長(zhǎng)于BoIFNα和BoIFNα/τ�？傊�,本研究為長(zhǎng)效及低毒牛干擾素的研發(fā)及臨床應(yīng)用做出了有意義的探索。
【圖文】：

構(gòu)及分類織對(duì)免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）進(jìn)結(jié)構(gòu)與抗體相似的一類球蛋白。免疫球蛋L 鏈）和兩條重鏈（H 鏈）共同組成的“Y”在免疫球蛋白的氨基端，，約重鏈 1/4 和輕鏈生改變，故稱為可變區(qū)（V 區(qū)）[44]。輕鏈順序比較穩(wěn)定故稱為恒定區(qū)（C 區(qū)）[45]。avy Chian Costont Region，IgCH）結(jié)構(gòu)及抗 和 ε 鏈，分別對(duì)應(yīng) IgM、IgG、IgA、IgD、Y”型結(jié)構(gòu)的分子，分泌型的 IgA 以二聚體形白單體中，H 鏈與 L 鏈的恒定區(qū)（CH1和 C部分形成“Y”型結(jié)構(gòu)的主干（如圖 1）。

圖 2-1 BoIFNα-IgCγ 構(gòu)建示意圖The schematic diagram of the structure oα/τ 是由 BoIFNα 抗病毒作用的關(guān)鍵部作用關(guān)鍵部位（成熟肽羧基端后 10 個(gè)圖 2-2 BoIFNα/τ 構(gòu)建示意圖he schematic diagram of the structure o
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張弦;繆德年;張克春;;牛干擾素的研究與應(yīng)用進(jìn)展[J];畜牧與飼料科學(xué);2015年Z1期

2 彭統(tǒng)全;邵建偉;張潤(rùn)祥;曹

本文編號(hào)：2709708