【摘要】：口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一種豬、牛、羊等偶蹄動(dòng)物急性、高度傳染性的疾病。鑒于口蹄疫能夠?qū)π竽翗I(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,在我國(guó)為一類動(dòng)物疫病。當(dāng)前研究已證實(shí)FMDV編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白L~(pro)、3A、3C~(pro),和結(jié)構(gòu)蛋白VP1等具有抑制宿主先天性免疫應(yīng)答的特性,但非結(jié)構(gòu)蛋白2B、3B是否在抑制宿主天然免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用尚屬未知。因此本研究主要對(duì)FMDV 2B、3B在天然免疫應(yīng)答過(guò)程中的作用開(kāi)展研究,以期闡明其在RIG-Ⅰ樣受體(RIG-Ⅰ like receptors,RLR)介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素應(yīng)答中是否具有抑制作用及其作用機(jī)制。本研究利用反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR(RT-qPCR)和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)FMDV 2B能顯著降低HEK293T細(xì)胞中IFN-β、IL-6、ISG15的mRNA水平,并且能夠顯著抑制由Poly(I:C)誘導(dǎo)或SeV觸發(fā)的IFN-β、NF-κB、ISRE啟動(dòng)子的激活,結(jié)果表明2B能抑制Ⅰ型干擾素和促炎細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄激活。為探究FMDV 2B通過(guò)何種機(jī)制抑制HEK293T細(xì)胞中RLR介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素應(yīng)答,通過(guò)磷酸化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)FMDV 2B過(guò)表達(dá)后能抑制HEK293T細(xì)胞中TBK1和IRF3的磷酸化水平;免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)和Pull-Down實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明FMDV 2B可與RIG-Ⅰ樣受體RIG-Ⅰ、MDA5相互作用;此外,在HEK293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)2B后發(fā)現(xiàn),FMDV2B能抑制RIG-Ⅰ、MDA5的轉(zhuǎn)錄水平,并能夠抑制外源性和內(nèi)源性RIG-Ⅰ、MDA5在蛋白水平表達(dá),但不抑制VISA、TBK1、IRF3的表達(dá)。本研究還發(fā)現(xiàn)在HEK293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)FMDV 3B能顯著抑制IFN-β、IL-6、ISG15的轉(zhuǎn)錄,并降低由Poly(I:C)誘導(dǎo)或SeV觸發(fā)的IFN-β、NF-κB、ISRE啟動(dòng)子的激活。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明,FMDV 3B在RIG-Ⅰ和MDA5水平調(diào)節(jié)RLR介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素應(yīng)答;RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FMDV 3B過(guò)表達(dá)能下調(diào)RIG-Ⅰ、MDA5的轉(zhuǎn)錄水平。同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)FMDV 3B1/3B2/3B3三種蛋白均能抑制HEK293T細(xì)胞中Ⅰ型干擾素相關(guān)啟動(dòng)子的活化。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)FMDV 2B能與RIG-Ⅰ和MDA5相互作用,并抑制RIG-Ⅰ和MDA5的轉(zhuǎn)錄、表達(dá);此外,FMDV 2B能抑制RLR信號(hào)通路中TBK1和IRF3的磷酸化,從而抑制Ⅰ型干擾素的表達(dá)。另外,FMDV 3B對(duì)HEK293T細(xì)胞中的Ⅰ型干擾素應(yīng)答也具有抑制作用,并且FMDV3B1/3B2/3B3三種蛋白均能夠抑制Ⅰ型干擾素相關(guān)啟動(dòng)子的活化。本研究結(jié)果可以進(jìn)一步提高我們對(duì)FMDV逃避宿主免疫系統(tǒng)機(jī)制的理解,同時(shí)也為開(kāi)發(fā)新型口蹄疫疫苗以及制定更加有效的口蹄疫防控策略提供借鑒。
【圖文】：

.1 RLRs 信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo) IFN-α/β 產(chǎn)生（引自文獻(xiàn) Courtney Wilkins et aFig 1.1 The RLR signaling pathway induce IFN-α/β production導(dǎo)基因 I鑒定為在維甲酸治療急性早幼粒細(xì)胞白血病中的誘導(dǎo)基因。隨

圖 1.2 RLRs 的結(jié)構(gòu)示意圖（引自文獻(xiàn) Yueh-Ming Loo1 et al.，，2011）Fig 1.2 Structural Representation of the RLRs蹄疫簡(jiǎn)介疫（foot-and-mouthdisease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouthdiseasevirus
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 武多嬌;Sanin DE;Everts B;卓樂(lè)盈;;Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)的內(nèi)在代謝改變是其免疫功能的關(guān)鍵[J];中國(guó)臨床醫(yī)學(xué);2016年04期

2 李正明;;新的Ⅰ型干擾素(組合干擾素)正進(jìn)行臨床驗(yàn)證[J];傳染病信息;1994年04期

3 李虎;馮玉光;張紅梅;張小茜;仲華;葛振宇;;Ⅰ型干擾素治療潰瘍性結(jié)腸炎有效性的薈萃分析[J];世界華人消化雜志;2015年06期

4 鮑素霞;鄭建銘;陳明泉;施光峰;;Ⅰ型干擾素治療病毒相關(guān)肝病的研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2015年21期

5 陳剛,鄭大海,楊仉生,程根宏,唐宏;Ⅰ型干擾素及其在抗病毒和抗細(xì)菌感染中的作用[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2005年02期

6 紀(jì)雪;趙慧;黃星耀;李曉峰;秦成峰;;寨卡病毒與Ⅰ型干擾素反應(yīng)相互作用研究進(jìn)展[J];科學(xué)通報(bào);2018年Z1期

7 ;MDA5與MAVS介導(dǎo)針對(duì)B型柯薩奇病毒的Ⅰ型干擾素反應(yīng)[J];微生物與感染;2010年01期

8 羅鵬;曾迪;溫偉紅;;特定序列的siRNA可通過(guò)TLR7引起Ⅰ型干擾素反應(yīng)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2007年12期

9 鄭青亮;;Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)沙門(mén)菌感染的巨噬細(xì)胞發(fā)生壞死性凋亡[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2012年06期

10 李軍;曾蕓;;干擾素調(diào)節(jié)因子3調(diào)控Ⅰ型干擾素機(jī)制的研究進(jìn)展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 舒紅兵;;病毒感染誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)制(英文)[A];第三屆細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的信號(hào)基礎(chǔ)研討會(huì)論文摘要[C];2010年

2 梁淑娟;魏海明;田志剛;;IFN-α通過(guò)STAT3,STAT1信號(hào)通路上調(diào)NK細(xì)胞的殺傷活性[A];第七屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

3 楊瑩韻;侯晉;周燁;白春梅;曹雪濤;;干擾素誘導(dǎo)基因IFIT家族分子促進(jìn)Ⅰ型干擾素抗腫瘤作用及其機(jī)制研究[A];第九屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2014年

4 謝麗君;邵志勇;劉歡歡;陳玲;王微娜;牛鑫;高洪;嚴(yán)玉霖;;PRRSV對(duì)PAMs產(chǎn)生Ⅰ型干擾素轉(zhuǎn)錄及TLR3表達(dá)的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2014年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2014年

5 梁淑娟;魏海明;田志剛;;IFNa通過(guò)STAT3、STAT1信號(hào)通路上調(diào)NK細(xì)胞的殺傷活性[A];山東免疫學(xué)會(huì)、山東微生物學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)2001年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2001年

6 李利云;陸源;陳偉;;人IL-29抗病毒活性研究進(jìn)展[A];第九屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2014年

7 劉媛;鄒自英;朱冰;胡宗海;曾平;吳麗娟;;LRRFIP1通過(guò)誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素抑制HCV感染[A];第六屆中國(guó)臨床微生物學(xué)大會(huì)暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2015年

8 劉星光;姚鳴;李楠;王春梅;鄭媛媛;曹雪濤;;鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ通過(guò)結(jié)合并活化TAK1和IRF3加強(qiáng)巨噬細(xì)胞中TLR配體誘導(dǎo)的炎癥因子和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

9 邰正福;林源;何玉嬌;黃君梅;李晟;張國(guó)林;王飛;;增強(qiáng)Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的JAK/STAT通路信號(hào)傳導(dǎo)天然產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)及其作用機(jī)制研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)天然有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集——第三分會(huì)場(chǎng)：天然產(chǎn)物合成生物學(xué)、化學(xué)生物學(xué)及新技術(shù)[C];2014年

10 徐紅梅;安華章;侯晉;韓超峰;王品;于益芝;曹雪濤;;磷脂酶PTP1B抑制MyD88和TRIF依賴的巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 高飛;HIV感染機(jī)理研究獲新進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

2 錢錚;日美:發(fā)現(xiàn)可防止肌體干擾素過(guò)剩的酶[N];中國(guó)勞動(dòng)保障報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李明;口蹄疫病毒2B、3B蛋白對(duì)RLRs介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素抑制作用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

2 童園園;Ⅰ型干擾素調(diào)控單核細(xì)胞分化的機(jī)制及其在雙鏈RNA介導(dǎo)的腫瘤免瘡治療中的關(guān)聯(lián)[D];南京大學(xué);2018年

3 姜麗群;IFITM3調(diào)控病毒誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)制[D];武漢大學(xué);2017年

4 傅煜軒;外泌體介導(dǎo)的miR-146a通過(guò)抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生進(jìn)而促進(jìn)腸道病毒71型復(fù)制[D];南京大學(xué);2018年

5 陳萌萌;豬圓環(huán)病毒Ⅱ型誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的信號(hào)途徑[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 劉苗苗;發(fā)熱伴病毒調(diào)控細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)及Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的研究[D];山東大學(xué);2017年

7 陳捷亮;乙型肝炎病毒多聚酶蛋白拮抗Ⅰ型干擾素通路的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 李玲;Ⅰ型干擾素系統(tǒng)的內(nèi)源性激活在皮肌炎免疫病理機(jī)制中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

9 胡偉平;Ⅰ型干擾素對(duì)MRL/lpr小鼠系膜細(xì)胞致炎損傷作用及機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2017年

10 宋寅敬;E3泛素連接酶FBXW7調(diào)節(jié)病毒誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素表達(dá)及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王俐丹;沙門(mén)菌質(zhì)粒毒力基因spv通過(guò)自噬影響巨噬細(xì)胞Ⅰ型干擾素反應(yīng)和中性粒細(xì)胞趨化的研究[D];蘇州大學(xué);2018年

2 張泉;豬腦心肌炎HB10株的3C蛋白酶對(duì)Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響[D];長(zhǎng)江大學(xué);2015年

3 蔚超亮;PRRSV nsp11抑制Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

4 韓麗;系統(tǒng)性紅斑狼瘡EB病毒潛伏期基因與Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)基因的相關(guān)關(guān)系研究[D];青島大學(xué);2016年

5 牟宏芳;口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP0抑制Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的研究[D];蘭州大學(xué);2017年

6 朱惠惠;天然小分子Kae抗VSV病毒感染及LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2017年

7 陳倩;大鯢Ⅰ型干擾素基因的克隆、表達(dá)與抗病毒活性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 武劍琴;人類細(xì)小病毒B19基因組NS1、VP1和VP2基因克隆及對(duì)宿主Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

9 鐘會(huì)娟;泛素特異性蛋白酶25調(diào)節(jié)Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的分子機(jī)制[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 周華;IFN-DC分化相關(guān)信號(hào)通路初探[D];蘇州大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2707068