【摘要】：高酮血癥(Hyperketonemia,HYK)是奶牛產后常見的一種臨床病理學表現(xiàn),它與泌乳早期的生產性能下降和很多疾病相關,評價和研究其診斷方法非常必要。本研究試圖建立血漿β-羥丁酸(BHBA)酶循環(huán)微量檢測法,并同時評價該方法與傳統(tǒng)的水楊醛比色法的檢出率和可靠性。此外,利用上述兩方法中的較為可靠和實用的方法作為HYK檢測方法調查南寧市某奶牛場的HYK發(fā)病率,分析HYK病因以及HYK是否與泌乳早期疾病和產奶量下降有關。實驗一:血漿BHBA酶循環(huán)微量檢測法的建立,我們在BHBA酶循環(huán)微量檢測法文獻及專利基礎上,摸索奶牛血漿BHBA酶循環(huán)微量檢測法,并評價該方法的精密度(CV%)、準確度(偏差、干擾)和線性范圍(檢測范圍)。通過重復測定高低兩組不同濃度血漿BHBA,結果低濃度組(均值為0.7941 mmol/L)總CV%和批間CV%分別為5.53%和5.03%,高濃度組(均值為2.0524 mmol/L)總CV%和批間CV%分別為5.81%和4.94%。使用南京建成BHBA試劑盒作為對比方法同時檢測143份不同濃度BHBA奶牛血漿(其中39份BHBA ≥ 1.2mmol/L),兩方法檢測結果極顯著相關(R2=0.9967,P0.01),兩方法偏差為0.149(95%CI=-0.296～0.594)。使用HYK閾值(BHBA≥ 1.2 mmol/L)時本法敏感性和特異性分別為97.06%和95.41%。干擾試驗中分別加入5個干擾物甘油三脂、膽紅素、葡萄糖、尿酸、血紅蛋白,結果發(fā)現(xiàn)干擾最大的物質為濃度1200 mg/dL的甘油三酯,干擾率為5.33%其他干擾物的干擾率均小于5%,對BHBA酶循環(huán)微量檢測法干擾較小。線性試驗測定從0～5 mmol/L的5個不同濃度樣本每個濃度平行測定4次,線性相關系數(shù)(R2)為0.9987。空白檢測限試驗用蒸餾水作為樣本檢測20次換算為濃度,得出空白檢測限為0.1199 mmol/L。實驗二:水楊醛比色法的方法評價:取低、中、高3個不同濃度梯度的血漿混合物(酮體≤0.34mmol/L,0.34mmol/L酮體0.50 mmol/L中濃度組,酮體≥0.70mmol/L),進行精密度評價,每天測定兩次,每次樣本都平行測定2次,結果發(fā)現(xiàn)高、中濃度組CV%均小于5%,低濃度組CV%在10%以內。回收試驗時在相同血漿樣本加入不同濃度丙酮,結果血漿酮體在0.52～2.58 mmol/L范圍內時,酮體的回收率在97.33%～102.49%之間。線性試驗得出水楊醛法在0～2.75 mmol/L時R2 = 0.9934。使用南京建成BHBA試劑盒作為標準比對方法,試劑盒檢測結果BHBA≥1.2 mmol/L時,ROC曲線得出水楊醛比色法酮病診斷的最佳閾值為酮體≥0.5 mmol/L,此時水楊醛法的敏感性為95.45%,特異性為95.47%;兩方法同時檢測614份血漿,檢測結果極顯著相關(r=0.714,P0.001)。實驗三:2017年9月到2018年12月期間在南寧市某奶牛場進行流行病學調查,對386頭產后1-6周內奶牛進行HYK檢測。從牛場獲取胎次、胎衣不下、產奶量、子宮炎、真胃左移等數(shù)據(jù),記錄產犢當日BCS(體況評分),每周一次采集產后1-6周試驗牛血漿,使用BHBA酶循環(huán)微量檢測法檢測BHBA濃度,BHBA ≥ 1.2 mmol/L為HYK 陽性,BHBA1.2 mmol/L為陰性結果,試驗期間發(fā)現(xiàn)有65頭奶牛至少出現(xiàn)一次HYK陽性結果,該牛場HYK發(fā)病率為16.8%。使用巢氏病例對照研究胎衣不下、胎次和BCS是否與造成HYK發(fā)病有關,研究HYK發(fā)生真胃左移、子宮炎和產奶量下降是否有關。結果發(fā)現(xiàn)胎衣不下、胎次≥ 3、BCS ≥ 3.5或BCS≤2.5的奶牛HYK發(fā)病風險的奶牛高于未暴露在這些風險因素下的奶牛;HYK發(fā)生真胃左移風險是NHYK奶牛的1.65倍(χ2 = 1.1,P0.05),產奶量下降風險是NHYK牛的1.656倍(χ2=29.27,P0.001),HYK牛發(fā)生子宮炎與NHYK差異不顯著(P=0.072)。結論:1.BHBA酶循環(huán)微量檢測法準確度精密度極好與商用BI-HBA試劑盒對比檢測結果偏差小;2.水楊醛比色法精密度準確度良好,與商用BHBA試劑盒對比檢測結果相關性強;3.選擇BHBA酶循環(huán)微量檢測法作為流行病學調查方法,該牛場HYK一年的發(fā)病率為16.8%,產后胎衣不下、BCS不均衡、胎次增加均為奶牛HYK風險因素,奶牛HYK可誘發(fā)真胃左移、產奶量下降,與子宮炎關系不顯著。
【圖文】：

２．４試驗結果逡逑２．４．１邋線性試驗結果逡逑如圖２－１所示，使用酶標儀在５０５邋ｎｍ波長測定樣本，結果顯示ＢＨＢＡ濃度在０？５逡逑ｍｍｏｌ／Ｌ時，ＢＨＢＡ酶循環(huán)微量檢測法檢測ＯＤ值與樣本濃度線性相關系數(shù)為０．９９８７。逡逑２．０－１逡逑ｙ邋＝邋０．３２１９ｘ邋＋０．０５９９逡逑Ｒ２邋＝邋０．９９８７逡逑１．５－邋ｎ＝４逡逑ｌ，0－邐Ｚ逡逑Ｏ邐Ｚ逡逑０．５－逡逑0．0■邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｒ逡逑０邐１邐２邐３邐４邐５邐６逡逑ＢＨＢＡ（邋ｍｍｏｌ／Ｌ）逡逑圖２－１邋ＢＨＢＡ酶循環(huán)微量檢測法線性試驗結果圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋ＢＨＢＡ邋ｌｉｎｅａｒ邋ｔｅｓｔ邋ｒｅｓｕｌｔｓ逡逑２０逡逑

２．４．７邐對比試驗結果逡逑使用南京建成ＢＨＢＡ試劑盒作為比對方法與ＢＨＢＡ酶循環(huán)微量檢測法同時檢測１４３逡逑份不同濃度ＢＨＢＡ血漿樣本，兩方法檢測結果極顯著相關（Ｒ２＝０．９９６７，邋Ｐ＜０．０１）如圖２－逡逑２所示。兩種方法檢測結果偏差為０．１４９邋（９５％邋ＣＩ邋＝－０．２９６？０．５９４），如圖２－３。逡逑４，，０＂｜邋Ｙ邋＝邋０．９８２２＊Ｘ邋－邋０．００４７５９邐，’逡逑一邋３．５－邐ｎ＝１４３逡逑Ｉ２－５－逡逑Ｉ２０－逡逑＜邋１＿５＿逡逑ｘ邋１．０－邋Ｊｒ逡逑ＣＱ逡逑0－５－逡逑ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邋ｉ邋ｒ逡逑０．０邋０．５邐１．０邐１．５邐２．０邐２．５邐３．０邐３．５邐４．０逡逑Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ＢＨＢＡ邋（ｍｍｏｌ／Ｌ）逡逑圖２－２比較實驗室ＢＨＢＡ酶循環(huán)微量檢測法和ＢＨＢＡ試劑盒同時檢測１４３份奶牛血漿酮體結逡逑果Ｐａｓｓｉｎｇ－Ｂａｂｌａｋ回歸散點圖，虛線表示兩方法均值，實線為回歸擬和線逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ邋ＢＨＢＡ邋ｅｎｚｙｍｅ邋ｃｙｃｌｅ邋ｍｉｃｒｏａｓｓａｙ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ａｎｄ邋ＢＨＢＡ邋ｋｉｔ邋ｆｏｒ逡逑ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｌａｓｍａ邋ｋｅｔｏｎｅ邋ｂｏｄｉｅｓ邋ｉｎ邋１４３邋ｃｏｗｓ．邋Ｐａｓｓｉｎｇ—Ｂａｂｌａｋ邋ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ邋ｓｃａｔｔｅｒ邋ｐｌｏｔ，逡逑ｄａｓｈｅｄ邋ｌｉｎｅ邋ｉｎｄｉｃａｔｅｓ邋ｔｈｅ邋ｍｅａｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｔｗｏ邋ｍｅｔｈｏｄｓ
【學位授予單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.23

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本文編號：2706488