本文關(guān)鍵詞：抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條用于禽白血病病毒檢測時(shí)的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)自1908年首次被分離并報(bào)道以來,隨后的幾十年里世界各地都有該病的爆發(fā)與流行,這說明禽白血病已廣泛分布于世界各地,由ALV感染所引發(fā)的臨床和亞臨床感染,給養(yǎng)禽業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失,也引起了世界各地養(yǎng)禽業(yè)的足夠重視。從上世紀(jì)70代以來,世界各大國際跨國育種公司都在雞群中采取了一系列清除和凈化ALV的措施,現(xiàn)如今,各發(fā)達(dá)國家的養(yǎng)禽業(yè)已經(jīng)基本消滅和控制住了經(jīng)典的外源性禽白血病病毒在規(guī)�；B(yǎng)雞場的流行,但在我國雞群中,ALV感染仍十分普遍。隨著ALV的診斷鑒別方法越來越多,國內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)對禽白血病病毒不同鑒別方法的關(guān)注度越來越高。那么,選擇靈敏度高和特異性強(qiáng)的檢測方法無疑可以讓各原種雞場和商品代雞場有效的防控禽白血病,還能減少不必要的損失。1.不同ELISA試劑盒和膠體金試紙條對細(xì)胞上清中P27的檢測比較為比較不同禽白血病病毒(ALV)抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條的靈敏度,本研究將A、B、J三種不同ALV亞群分別以50TCID50、100TCID50、500TCID501000TCID50、10000TCID50五種劑量接種培養(yǎng)于對數(shù)生長期的DF-1細(xì)胞上,2h后換含2%胎牛血清的細(xì)胞維持液,接種后第2-8天每天收取細(xì)胞上清并補(bǔ)充等量的DMEM,每份上清用三種不同的抗原ELISA檢測試劑盒(A、B、C)和兩種膠體金試紙條(D、E)按照各自的說明書同時(shí)檢測。結(jié)果顯示,三種亞群的五種劑量分別應(yīng)用A、B、C三種ELISA檢測試劑盒靈敏度基本一致,但在針對三種亞群病毒接種的的個(gè)別劑量個(gè)別天數(shù)時(shí),ELISA-B試劑盒的靈敏度要略高于A和C;兩種膠體金試紙條的抗原檢出時(shí)間檢測結(jié)果完全一致,但其靈敏度均要比ELISA檢測試劑盒的低,在接種低劑量的病毒時(shí),膠體金試紙條的抗原檢出時(shí)間要比ELISA試劑盒延后1-2天,但在接種高劑量的病毒或者到了低劑量病毒復(fù)制增殖的后期時(shí),膠體金試紙條能夠更快速的做出判定,相比試劑盒節(jié)省了不少時(shí)間。2.不同ELISA試劑盒和膠體金試紙條對蛋清中P27的檢測比較在本研究中,應(yīng)用卵黃囊接種對90只SPF種雞分別接種了A、B、J三個(gè)亞群的ALV病毒,每隔4周對雞采血做病毒分離,選擇持續(xù)產(chǎn)生病毒血癥的母雞,待其生長至產(chǎn)蛋期收集種蛋,收集的蛋與雞編號一一對應(yīng),用抗原ELISA檢測試劑盒A、B和膠體金試紙條D、E對60枚種蛋蛋清進(jìn)行了檢測,并將檢測結(jié)果與病毒分離的結(jié)果相對比,結(jié)果顯示膠體金試紙條與病毒分離的吻合率不超過60%,而檢測試劑盒的吻合率最高的達(dá)到了97.5%,膠體金試紙條的蛋清陽性檢出率遠(yuǎn)低于ELISA試劑盒的檢出率。這說明在某些應(yīng)用方面,膠體金試紙條還無法完全替代ELISA檢測試劑盒。本研究為廣大種雞場和養(yǎng)禽業(yè)開展禽白血病防控與凈化選擇靈敏度高操作簡便的檢測方法及其適用范圍提供了有效借鑒。
【關(guān)鍵詞】：禽白血病病毒 亞群 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 膠體金 禽白血病凈化與防控
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S855.3
【目錄】：

• 符號及縮略詞5-10
• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 1 前言14-28
• 1.1 禽白血病及歷史14-15
• 1.2 禽白血病病原學(xué)15-23
• 1.2.1 形態(tài)學(xué)特征15-16
• 1.2.2 病毒結(jié)構(gòu)16-18
• 1.2.3 不同亞群分型18-19
• 1.2.4 理化及生長特性19
• 1.2.5 病毒的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及翻譯19-21
• 1.2.6 慢性和急性致腫瘤ALV及其致腫瘤機(jī)制21-22
• 1.2.7 ALV的致病性22-23
• 1.3 禽白血病流行病學(xué)23-24
• 1.3.1 感染宿主和傳播方式23
• 1.3.2 免疫反應(yīng)及抗體的產(chǎn)生23
• 1.3.3 ALV在國內(nèi)的流行情況23-24
• 1.4 禽白血病病毒的診斷與檢測24-25
• 1.4.1 病毒的分離與鑒定24
• 1.4.2 斑點(diǎn)雜交技術(shù)24
• 1.4.3 ELISA試劑盒檢測ALV24-25
• 1.4.4 膠體金試紙條檢測ALV25
• 1.5 禽白血病病毒的凈化與防控25-26
• 1.5.1 選擇凈化的種源及凈化原種雞群26
• 1.5.2 原種雞場的核心群外源性禽白血病病毒的凈化26
• 1.5.3 嚴(yán)格預(yù)防使用被外源性ALV污染的弱毒疫苗26
• 1.5.4 雞舍的環(huán)境控制26
• 1.5.5 抗病毒藥物的預(yù)防控制26
• 1.6 本研究的目的及意義26-28
• 2 材料與方法28-40
• 2.1 試驗(yàn)材料28-30
• 2.1.1 試驗(yàn)細(xì)胞和動(dòng)物28
• 2.1.2 試驗(yàn)毒株28
• 2.1.3 試驗(yàn)主要試劑和試劑盒28-29
• 2.1.4 試驗(yàn)主要儀器29
• 2.1.5 液體試劑和培養(yǎng)基的制備29-30
• 2.2 不同試劑盒及膠體金試紙條對細(xì)胞上清中P27的檢測30-37
• 2.2.1 病毒鑒定與培養(yǎng)30-33
• 2.2.2 三種不同的ALV亞群各毒株的培養(yǎng)與檢測樣品的收集33-34
• 2.2.3 不同商品化p27抗原ELISA檢測試劑盒的檢測34-36
• 2.2.4 ALV抗原膠體金檢測試紙條的檢測36-37
• 2.3 不同ELISA試劑盒及膠體金試紙條對蛋清中P27的檢測37-40
• 2.3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及處理37
• 2.3.2 SPF雞的病毒血癥變化37-38
• 2.3.3 不同試劑盒及膠體金試紙條對蛋清中P27的檢測38-40
• 3 試驗(yàn)結(jié)果40-51
• 3.1 病毒分子生物學(xué)鑒定40
• 3.2 病毒細(xì)胞生物學(xué)鑒定與定量40-43
• 3.2.1 A亞群SDAU09C1株的鑒定與定量40-41
• 3.2.2 B亞群SDAU09C2株的鑒定與定量41-42
• 3.2.3 J亞群NX0101株的鑒定與定量42-43
• 3.3 不同抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條對細(xì)胞上清P27抗原檢測時(shí)的比較43-49
• 3.3.1 不同ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條對ALV-A的檢測結(jié)果43-45
• 3.3.2 不同ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條對ALV-B的檢測結(jié)果45-47
• 3.3.3 不同ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條對ALV-J的檢測結(jié)果47-49
• 3.4 不同抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條對蛋清P27抗原檢測時(shí)的比較49-51
• 3.4.1 試驗(yàn)雞只的選擇49-50
• 3.4.2 不同檢測試劑盒和膠體金試紙條對蛋清ALV抗原的檢測結(jié)果50-51
• 4 討論51-55
• 5 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-64
• 致謝64-65
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況65

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  本文關(guān)鍵詞：抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條用于禽白血病病毒檢測時(shí)的比較研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：270549