【摘要】：抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)作為抗生素的新型替代物,具有抗多種病原性微生物,提高家畜生產(chǎn)性能,提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益等作用。目前已廣泛應(yīng)用于豬、雞養(yǎng)殖中。在集約化養(yǎng)殖中,反芻動物易受病原微生物侵襲,從而導(dǎo)致瘤胃微生物區(qū)系改變,生產(chǎn)性能下降,上述情況受到飼料添加劑的調(diào)控。本研究旨在探究新型飼料添加劑AMPs——蜜蜂肽的抑菌效果,及其對育肥湖羊生產(chǎn)性能和瘤胃微生物區(qū)系的影響,為蜜蜂肽作為反芻動物飼料添加劑應(yīng)用于育肥綿羊提供參考。試驗一體外法研究蜜蜂肽對瘤胃微生物的影響本試驗所用蜜蜂肽由甘肅奧林貝爾生物科技集團有限公司提供,大腸桿菌ATCC10003和沙門氏菌ATCC10467均購自中國工業(yè)微生物菌種保存中心,通過藥敏試驗確定蜜蜂肽對大腸桿菌(E.coli)和沙門氏菌(salmonella)的最小抑菌濃度和最低抑菌效價;體外發(fā)酵試驗采用單因子試驗設(shè)計,共3個處理,分別添加0、0.75 mg、1.5 mg蜜蜂肽,每個處理7個重復(fù)。在試驗前,在每個玻璃發(fā)酵瓶內(nèi)準確稱取1 g飼糧,進行體外發(fā)酵,發(fā)酵24 h冰水終止發(fā)酵,收集產(chǎn)氣和發(fā)酵液,測定瘤胃發(fā)酵液pH,確定蜜蜂肽對發(fā)酵液氣體產(chǎn)量、揮發(fā)性脂肪酸濃度以及部分微生物的影響。試驗結(jié)果:蜜蜂肽對于E.coli、salmonella的最小抑菌濃度均為0.625 g/mL,最低抗菌效價均為533.33 AU/mL。體外發(fā)酵24 h,0.75 mg的蜜蜂肽能顯著提高瘤胃內(nèi)乙酸的濃度和乙酸丙酸比(P0.05),顯著降低丙酸濃度(P0.05),提高CH_4產(chǎn)量(P0.05),有提高普雷沃氏菌含量的趨勢(P=0.078)。試驗二蜜蜂肽對育肥湖羊生產(chǎn)性能和瘤胃微生物區(qū)系的影響選擇2月齡斷奶、體重在25-30 kg的湖羊公羔180只。試驗采用單因素試驗設(shè)計,共5個處理,30個試驗欄位,每個處理6個欄位,每欄飼養(yǎng)6只羊。蜜蜂肽配合飼料時以預(yù)混料形式添加到日糧處理,分別為對照組(無抗生素及蜜蜂肽添加日糧)、100 g/T組(基礎(chǔ)日糧+100 g/T蜜蜂肽)、200 g/T組(基礎(chǔ)日糧+200g/T蜜蜂肽)、400 g/T組(基礎(chǔ)日糧+400 g/T蜜蜂肽)、800 g/T(基礎(chǔ)日糧+800g/T蜜蜂肽)。試驗過渡期14 d、預(yù)飼期14 d,正試期63 d。試驗結(jié)果如下:1.湖羊飼喂蜜蜂肽顯著增加全期平均日增重(Average daily gain,ADG)(P0.05)。全期的體重隨飼料中蜜蜂肽添加量的提高,呈顯著線性增加(P0.05);平均日采食量(Average daily feed intake,ADFI)隨飼料中蜜蜂肽添加量的提高,呈顯著線性增加(P0.05);料重比與飼料中蜜蜂肽含量,呈顯著線性負相關(guān)(P0.05)。2.飼料中添加蜜蜂肽能顯著提高瘤胃中反芻獸新月形單胞菌和產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌的數(shù)量,隨蜜蜂肽濃度的增加,兩種菌數(shù)量均呈先降低后增加的二次變化(P0.05),普雷沃氏菌的數(shù)量變化顯著(P0.05),且隨蜜蜂肽濃度的增加,該菌數(shù)量呈先增加后降低的二次變化趨勢,嗜淀粉瘤胃桿菌的數(shù)量和內(nèi)厚壁菌門的豐度呈顯著線性增加(P0.05)。添加蜜蜂肽顯著提高無壁菌門的豐度,而且隨飼料中蜜蜂肽含量的提高,該菌豐度呈現(xiàn)降低后增加的變化。飼料中的蜜蜂肽能顯著提高瘤胃內(nèi)乙酸比例和降低丙酸比例(P0.05),且隨蜜蜂肽含量的增加,比例均呈先增加后降低的二次變化;能顯著降低瘤胃內(nèi)異丁酸的比例(P0.05),隨蜜蜂肽含量的增加,異丁酸呈先降低后增加的二次變化;還能顯著提高瘤胃內(nèi)乙丙比(P0.05),乙丙比隨蜜蜂肽濃度的提高呈先增加后降低的二次變化。綜上所述,蜜蜂肽能特異性抑制革蘭氏陰性菌大腸桿菌和沙門氏菌,還可以提高乙酸比例,降低丙酸比例,提高乙丙比,促進瘤胃乙酸型發(fā)酵;給育肥湖羊飼喂添加有蜜蜂肽的飼料,能夠提高育肥湖羊的生產(chǎn)性能,調(diào)節(jié)其瘤胃微生物區(qū)系和瘤胃發(fā)酵。
【圖文】：

沙門氏菌的劃線培養(yǎng)結(jié)果

13圖 2-2 大腸桿菌劃線培養(yǎng)結(jié)果Fig.2-2 Marking and culturing results of E.coli配置 LB 液體培養(yǎng)基 30 mL，121℃高壓滅菌 15 min 后，分裝在 10 mL 試管中。用牙簽蘸取單菌落，丟入試管中，，37℃、225 r/min 搖菌 8 h。配置 LB 液體培養(yǎng)基 100 mL，121℃高壓滅菌 15 min，取 1 mL 菌液加入到LB 液體培養(yǎng)基中，37℃、225 r/min 搖菌 15 h。將加熱融化的 LB 固體培養(yǎng)基 15mL 注入到無菌平皿中，待其凝固后于表面放置內(nèi)徑 6 mm，外徑 7.8 mm 的牛津杯，分別吸取活化好的 E.coli 和 Salmonella
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S826.5

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本文編號：2704939