發(fā)布時(shí)間：2020-06-09 13:34

【摘要】：隨著人工授精技術(shù)的推廣和優(yōu)良種畜育種的發(fā)展,精液保存技術(shù)越來(lái)越重要。常溫保存中,現(xiàn)有保存液已經(jīng)可以將豬精液保存12天以上。然而,現(xiàn)有保存液添加成分復(fù)雜,保存效果不一致;受精率和產(chǎn)仔率等方面也存在一些問(wèn)題。大量研究發(fā)現(xiàn),精液保存過(guò)程中,ROS的產(chǎn)生和積累是影響精子質(zhì)量,降低受精能力的關(guān)鍵。在精液保存中,ROS的積累會(huì)引起精子線粒體活性改變,同時(shí)ROS還會(huì)攻擊精子質(zhì)膜的多不飽和脂肪酸,發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),生成大量脂質(zhì)過(guò)氧化物,并引起DNA序列上鳥嘌呤位點(diǎn)發(fā)生突變,導(dǎo)致DNA序列發(fā)生損傷,DNA雙鏈斷裂,+甚至?xí)茐娜旧w結(jié)構(gòu),加劇精子凋亡。因此,在精液保存液中添加抗氧化物質(zhì),提高精子抗氧化和清除ROS的能力,是精液保存的一項(xiàng)重要內(nèi)容。為了研究抗氧化劑水飛薊素對(duì)精液保存效果的影響,本試驗(yàn)在Modena保存液中分別添加12.5μM,25μM,50μM,100μM,200μM的水飛薊素,檢測(cè)在常溫保存中水飛薊素對(duì)精子活力,質(zhì)膜完整性,頂體完整性及線粒體活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),添加25μM水飛薊素能夠顯著提高精子質(zhì)量,延長(zhǎng)精液保存時(shí)間。隨后,為了探究水飛薊素的作用機(jī)制,我們用200μM的叔丁基過(guò)氧化氫誘導(dǎo)精子發(fā)生氧化應(yīng)激,并用25μM水飛薊素處理氧化應(yīng)激的精子,檢測(cè)精子質(zhì)量,MDA含量,H_2O_2含量,GSH含量及凋亡水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),水飛薊素能夠逆轉(zhuǎn)由叔丁基過(guò)氧化氫造成的氧化損傷,提高精子質(zhì)量。為探究水飛薊素在精液冷凍過(guò)程中的作用,我們?cè)诶鋬霰Ｗo(hù)液和解凍液中分別添加12.5μM,25μM,50μM,100μM,200μM,400μM的水飛薊素。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不論在冷凍液中,還是在解凍液中,添加100μM水飛薊素都能顯著提高精子活力和質(zhì)膜完整性,降低MDA含量和H_2O_2含量。最后,我們通過(guò)體外受精試驗(yàn)檢測(cè)了水飛薊素對(duì)精子的受精能力和胚胎發(fā)育能力的影響。結(jié)果顯示,常溫保存下添加水飛薊素能夠提高卵裂率和囊胚率。冷凍保存中,解凍液中添加水飛薊素僅能提高卵裂率,對(duì)胚胎發(fā)育能力沒有影響。通過(guò)以上試驗(yàn)結(jié)果,我們得出以下結(jié)論:(1)在豬精液常溫保存中,添加25μM水飛薊素能夠提高精子質(zhì)量,降低精子ROS水平,提高精子抗氧化能力。(2)添加25μM水飛薊素能夠降低叔丁基過(guò)氧化氫造成的精子氧化損傷。(3)冷凍保存中,添加100μM水飛薊素能夠提高精子質(zhì)量,降低氧化損傷,提高其抗氧化能力。(4)常溫保存添加25μM水飛薊素的精子能夠提高體外受精后卵子的卵裂率和囊胚率;解凍液添加100μM水飛薊素的精子只能提高體外受精后卵子的卵裂率,對(duì)囊胚率沒有影響。
【圖文】：

圖 1-1 鳥嘌呤氧化生成 8-羥基-2-脫氧鳥苷[63]Fig.1-1 Guanine is Oxidized to 8-oxoG[63]的喪失與脂質(zhì)加成物的形成有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)抑制 PI3 激酶活性]。此外，添加 4-HNE 或丙烯醛，精子活力和運(yùn)動(dòng)性也會(huì)呈現(xiàn)劑量電醛類的濃度與作用時(shí)間有關(guān)[68]。傷后，精子運(yùn)動(dòng)性開始減弱，同時(shí)表現(xiàn)出許多凋亡特征，包括 PS）外翻。Koppers 等抑制了精子 PI3K 通路，啟動(dòng)凋亡，發(fā)現(xiàn) 翻之前發(fā)生，4 小時(shí)后，Caspase 開始活化[67]。現(xiàn)用渥曼青霉素誘導(dǎo)精子凋亡，沒有發(fā)現(xiàn) TUNEL 陽(yáng)性表達(dá)，而aspase 的活化和磷脂酰絲氨酸外翻。他們認(rèn)為這是由于精子具有分布在不同區(qū)域，從而導(dǎo)致內(nèi)切酶（如 EndoG 或 CAD）無(wú)法進(jìn)和線粒體時(shí)會(huì)引起精子迅速發(fā)生氧化應(yīng)激，進(jìn)而引起 DNA 的斷循環(huán)產(chǎn)生 ROS 并誘導(dǎo) DNA 氧化損傷，然后激活堿基切除修復(fù)酶堿基，形成無(wú)堿基位點(diǎn)。此時(shí)，基因切除修復(fù)途徑停止，DNA 與 ROS，脂質(zhì)過(guò)氧化物和活化的半胱天冬酶組合促使伴隨細(xì)胞程序啟動(dòng)。精子凋亡啟動(dòng) 48 小時(shí)后，可以觀察到 TUNEL 陽(yáng)性表

圖 1-2 ROS 引起的精子氧化損傷Fig.1-2 Oxidative damage to sperm induced by ROS1.4 精液保存中常用的抗氧化物質(zhì)為了提高精子質(zhì)量，在精液保存中常常添加一些抗氧化物質(zhì)，下面我們將討論幾種常見抗氧藥物。.4.1 維生素類.4.1.1 維生素 E維生素 E 存在于細(xì)胞膜上，能夠破壞 ROS 與脂肪酸側(cè)鏈之間形成的共價(jià)鍵，是一種高效的脂性抗氧化劑。α-生育酚是維生素 E 中最有效的脂溶性抗氧化物，能夠中和脂質(zhì)自由基[70]。直與 ROS 作用，但不影響 ROS 的產(chǎn)生。在體內(nèi)和體外，維生素 E 都可以保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷，，哺乳動(dòng)物中添加維生素 E 可以提高精子質(zhì)量，但效果不一致。在不孕不育患者中，每日 200 毫，連續(xù) 3 個(gè)月可以提高體外受精率。kalthur 等人表明，補(bǔ)充維生素 E（5 mM）能提高解凍后子活力、提高弱精子癥患者的精液量及提高精子 DNA 完整性，最終在輔助生殖中能夠提高受率[71]。Jeong 等人 2009 年發(fā)現(xiàn)，添加 200 μM 的 α-生育酚可通過(guò)降低脂質(zhì)過(guò)氧化物減少氧化應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S828

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 林益川;王燕萍;劉曉紅;劉禮斌;陳洲;;第三丁基過(guò)氧化氫誘導(dǎo)MIN6細(xì)胞損傷[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 金延武;水飛薊素在肺缺血再灌注損傷所致肺血管功能障礙中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2704761