【摘要】：我國已逐步進(jìn)入老齡化社會(huì),因此老年人身體健康問題越來越受到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的關(guān)注。骨質(zhì)疏松癥是一種常見病、多發(fā)病,它嚴(yán)重地威脅著中、老年人的身體健康,由此引起的骨折等并發(fā)癥,除了給患者本人造成極大的痛苦外,也給社會(huì)和家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)和生活負(fù)擔(dān)。骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少、骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征的,致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。我國60歲以上人群骨質(zhì)疏松癥總體患病率為36%,其中男性為23%,女性為49%。在動(dòng)物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域也有類似的發(fā)現(xiàn)。寵物多發(fā)病逐漸從傳染病轉(zhuǎn)向慢性病和老年病,包括骨質(zhì)疏松癥等骨病。寵物的骨質(zhì)疏松,常表現(xiàn)為老年動(dòng)物的骨折、椎體變形、骨痛等。淫羊藿(Epimedium brevicornu)是我國傳統(tǒng)中藥材,具有補(bǔ)腎陽,強(qiáng)筋骨,祛風(fēng)濕的功效,對老年骨質(zhì)疏松具有較好的療效。朝藿定A是淫羊藿有效成分群中含量較高的成分。因此,本研究為闡釋淫羊藿“補(bǔ)腎主骨生髓”的科學(xué)內(nèi)涵,以去勢誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松雌雄SD大鼠和ICR小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?探究淫羊藿及其單體成分朝藿定A抗骨質(zhì)疏松的作用,揭示朝藿定A對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞增殖、礦化、成脂分化的影響以及對原代破骨細(xì)胞的骨吸收的影響及作用機(jī)制,為淫羊藿臨床應(yīng)用及新藥研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)由5部分組成:1.將0.5g/kg、1g/kg和2g/kg淫羊藿水提物用于去卵巢/睪丸造成激素缺乏型骨質(zhì)疏松大鼠模型。檢測血清骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物、脛骨直徑和骨微結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示給藥組較模型組骨體積、骨面積、骨小梁數(shù)顯著升高、骨小梁厚度顯著降低(P0.05、0.01),脛骨直徑顯著升高(P0.05)。證明受試劑量淫羊藿水提物對去勢誘導(dǎo)的雌雄大鼠骨質(zhì)疏松有改善作用。2.將淫羊藿中含量最高的5種黃酮類單體淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、朝藿定A、B、C在原代成骨和破骨細(xì)胞上進(jìn)行體外篩選,檢測成骨、破骨關(guān)鍵指標(biāo)ALP和TRACP。結(jié)果表明,五種黃酮類成分分別對MSCs的ALP分泌有促進(jìn)作用(P0.05、0.01),各給藥組間沒有顯著差異;朝藿定A、B、C對破骨細(xì)胞TRACP活力有顯著抑制作用(P0.05、0.01)。證明淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、朝藿定A、B、C均能發(fā)揮一定的骨保護(hù)作用。其中朝藿定A骨保護(hù)作用最強(qiáng),故選用朝藿定A進(jìn)行后續(xù)研究。3.將5、10、20mg/kg朝藿定A用于去勢誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松ICR雌雄小鼠觀察其抗骨質(zhì)疏松作用,給藥結(jié)束后處死小鼠并進(jìn)行血清生化、三點(diǎn)力學(xué)實(shí)驗(yàn)和骨微結(jié)構(gòu)檢測。結(jié)果表明,ICR雌雄小鼠灌胃給予朝藿定A 8周后,小鼠骨量、骨小梁數(shù)目和骨強(qiáng)度顯著上升,骨小梁間隙顯著下降,骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)有顯著改善。表明朝藿定A對于去勢誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松雌雄小鼠具有改善骨微結(jié)構(gòu),增加骨強(qiáng)度的作用。4.將朝藿定A用于正常小鼠骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察其對間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化、成脂分化和礦化能力的影響,應(yīng)用ELISA和Western Blotting技術(shù),研究其促進(jìn)骨形成的相關(guān)分子機(jī)制。結(jié)果表明,朝藿定A可以促進(jìn)MSCs細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化并抑制其成脂分化,可以促進(jìn)成骨細(xì)胞礦化并提高成骨細(xì)胞OPG/RANKL水平和ERK蛋白磷酸化水平,從而促進(jìn)骨形成。5.將朝藿定A用于正常小鼠骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)形成的破骨細(xì)胞,觀察其對破骨細(xì)胞分化和骨吸收能力的影響,應(yīng)用MSD、Western Blotting等生物學(xué)手段,研究其抗骨質(zhì)疏松作用及相關(guān)分子機(jī)制。結(jié)果表明,朝藿定A可以抑制破骨細(xì)胞的形成、分化和骨吸收作用,可能是通過調(diào)控MAPK通路中的cjun和AKT通路中的Akt蛋白磷酸化發(fā)揮作用。綜上所述,淫羊藿水提物對去勢誘導(dǎo)的雌雄大鼠骨質(zhì)疏松均有改善作用。在淫羊藿含量最高的五種黃酮類成分中,朝藿定A促進(jìn)骨形成、抑制骨吸收的綜合能力最強(qiáng)。朝藿定A對去勢雌雄小鼠均具有抗骨質(zhì)疏松的作用,與其促進(jìn)MSCs向成骨細(xì)胞分化、抑制其成脂分化,減少破骨細(xì)胞形成與分化有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),朝藿定A可能通過OPG/RANKL、MAPK和AKT信號通路發(fā)揮骨保護(hù)作用。
【圖文】：

＃Ｐ邋＜邋０．０５邐＃＃Ｐ邋＜０．０１邋Ｖ５邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ；邋＊／＊邋＜０＃．０５邐＊＊邋Ｐ邋＜０．０１邋ｖｓ邋ｍｏｄｅｌ邋ｇｒｏｕｐ逡逑４．３．３骨微結(jié)構(gòu)逡逑由圖８￣１０可見，用ＶｉｖａＣＴ邋４０骨密度儀對小鼠脛骨進(jìn)行骨ＣＴ掃描，逡逑雎性小鼠對照組脛骨骨小梁及鈣化區(qū)底部的過渡骨小梁形成較多，但不飽逡逑滿，較細(xì)長或團(tuán)塊狀，部分間隙較大；模型組脛骨上端骺板軟骨細(xì)胞柱狀逡逑排列不甚整齊。中劑量組骨小梁數(shù)目及形態(tài)結(jié)構(gòu)稍有改善。雄性小鼠對照逡逑組骨小梁及鈣化區(qū)底部的過渡骨小梁形成較多，但不飽滿，較細(xì)長或團(tuán)塊逡逑狀，部分間隙較大；模型組骨小梁及過渡骨小梁數(shù)０較空白對照組有所減逡逑少，似數(shù)Ｈ及形態(tài)結(jié)構(gòu)與交丨＇丨對照組比較差好不明顯；Ｉ邋Ｐ９８組軟骨細(xì)胞和逡逑骨小梁數(shù)目及形態(tài)結(jié)構(gòu)與模型組比較未見明顯改善。朝藿定Ａ高、中、低逡逑劑量組骨小梁數(shù)目及形態(tài)結(jié)構(gòu)與模型組比較均有所改善，以高劑量組改善逡逑較為明顯。逡逑與對照組比較，雌性小鼠模型組ＢＳ、ＢＳ／ＢＶ、Ｔｂ．Ｎ、Ｃｏｒｍ．邋Ｄ均顯著降逡逑低（Ｐ＜０．邋０５、０？邋０１）

４．邋３．４脛骨ＨＥ染色逡逑雌性小鼠觀察結(jié)果：逡逑由圖１１可見，空白對照組：脛骨上端骺板軟骨細(xì)胞柱狀排列整齊，各逡逑區(qū)軟骨細(xì)胞分界清楚，骨小梁及鈣化區(qū)底部的過渡骨小梁形成較多，但不逡逑飽滿，較細(xì)長或團(tuán)塊狀，，部分間隙較大。逡逑模型組：脛骨上端骺板軟骨細(xì)胞柱狀排列不甚整齊
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S853.74

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本文編號：2703884