【摘要】：視黃醇(維生素A)對(duì)雌性生殖具有重要的生理作用。在卵泡細(xì)胞內(nèi),視黃醇經(jīng)氧化產(chǎn)生的視黃酸具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性,能調(diào)控一系列基因轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而調(diào)節(jié)卵泡發(fā)育,類(lèi)固醇激素生成和卵母細(xì)胞成熟等過(guò)程。此外,在卵泡發(fā)育過(guò)程中,卵泡中視黃醇水平動(dòng)態(tài)變化,和小卵泡相比,大的有腔卵泡的卵泡液中的視黃醇濃度更高。然而,在卵泡發(fā)育過(guò)程中,卵巢中視黃醇水平和代謝變化的調(diào)控機(jī)制還不明確。視黃醇結(jié)合蛋白4(retinol-binding protein 4,RBP4)是循環(huán)系統(tǒng)中和細(xì)胞間的重要的視黃醇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,對(duì)細(xì)胞外視黃醇轉(zhuǎn)運(yùn)、積累和跨膜交換具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)果以及他人研究表明,RBP4在大的有腔卵泡中表達(dá)水平高于較小卵泡。因此,RBP4可能在發(fā)育中的卵泡的卵泡液中視黃醇的積累過(guò)程起重要作用。本研究首先探究了小鼠出生后發(fā)育不同時(shí)期和成年后發(fā)情周期不同階段卵巢中RBP4時(shí)空表達(dá)模式以及生殖激素(FSH、LH和E_2)對(duì)其表達(dá)的影響和分子機(jī)制。結(jié)果顯示,RBP4在出生后1~3周小鼠卵巢中表達(dá)穩(wěn)定,在第4周顯著上升;在成年小鼠卵巢中,發(fā)情期表達(dá)最高,發(fā)情間期最低。激素處理實(shí)驗(yàn)表明卵巢中RBP4表達(dá)主要受FSH調(diào)控。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示卵巢RBP4主要分布于有腔卵泡的顆粒細(xì)胞層。用原代卵泡顆粒細(xì)胞作為體外模型,結(jié)果顯示cAMP-PKA信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子HMGA1、SF-1和LRH-1介導(dǎo)了FSH對(duì)RBP4表達(dá)的促進(jìn)作用。因此,卵巢中RBP4表達(dá)主要受FSH-cAMP-PKA通路調(diào)節(jié),FSH也可能參與調(diào)節(jié)卵巢中視黃醇的水平。為進(jìn)一步探究FSH對(duì)小鼠卵巢中視黃醇攝取和代謝的影響,本研究借助液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)了FSH處理的小鼠卵巢和卵泡顆粒細(xì)胞中的視黃醇及其代謝物水平。結(jié)果顯示,在FSH處理后的小鼠卵巢及顆粒細(xì)胞中,視黃醇及其代謝物總體水平升高,同時(shí)視黃醛和視黃酸水平也分別升高。此外,還檢測(cè)了視黃醇攝取和代謝通路中相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和酶的基因的表達(dá)。FSH處理后小鼠卵巢中醇脫氫酶ADH1和醛脫氫酶ALDH1A1基因表達(dá)上調(diào),酯化酶LRAT基因表達(dá)下調(diào);FSH處理的卵泡顆粒細(xì)胞中STRA6、CRBP1、ADH1、ADH7和ALDH1A1基因上調(diào),LRAT基因下調(diào)。綜上,在小鼠卵泡發(fā)育過(guò)程中,FSH通過(guò)cAMP-PKA信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子HMGA1、SF-1和LRH-1促進(jìn)小鼠卵巢中RBP4表達(dá),可能有助于大卵泡中視黃醇積累;同時(shí),FSH通過(guò)促進(jìn)中STRA6和CRBP1表達(dá)促進(jìn)卵泡細(xì)胞中視黃醇的攝取,通過(guò)促進(jìn)ADH1和ADH7表達(dá)促進(jìn)視黃醇向視黃醛轉(zhuǎn)化,通過(guò)促進(jìn)ALDH1A1促進(jìn)視黃醛向視黃酸的轉(zhuǎn)化。因此,FSH能通過(guò)調(diào)節(jié)視黃醇攝取和代謝通路促進(jìn)卵巢中視黃醇的攝取和向視黃酸的轉(zhuǎn)化。本研究創(chuàng)新之處在于借助液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)FSH刺激后的小鼠卵巢中的視黃醇及其代謝物的濃度,并且檢測(cè)相關(guān)通路基因表達(dá)的改變,探究卵巢中維生素A水平的調(diào)控機(jī)制。
【圖文】：

圖 1 細(xì)胞內(nèi)維生素 A 代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)示意圖。Figure 1 Schematic representation of cellular retinoid metabolism and signaling.

20圖 1.1 RBP4 在小鼠出生后發(fā)育和發(fā)情周期不同階段卵巢中的動(dòng)態(tài)表達(dá)。Figure 1.1 Dynamic expression of RBP4 in mouse ovaries during the different stages ofdevelopment and the estrous cycle.注：(A)為出生后 1 周(1w)-5 周（5w）小鼠卵巢中 RBP4 mRNA 表達(dá)變化（n=8）；（B）為發(fā)情間期（D），發(fā)情前期（P），發(fā)情期（E）和發(fā)情后期（M）小鼠卵巢中 RBP4 mRNA 表達(dá)變化（n=8）。圖（D）和（C）分別為 RBP4 蛋白的 western blot 結(jié)果以及其灰度分析（n=3）。不同字母表示差異顯著。1.2.2 生殖激素對(duì)小鼠卵巢 RBP4 表達(dá)的影響卵巢活動(dòng)主要由 FSH、LH 和雌二醇調(diào)節(jié)，，所以本研究探究了這幾種激素對(duì)小鼠卵巢中 RBP4 表達(dá)的影響。為了避免內(nèi)源性激素干擾，本試驗(yàn)使用 3 周
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S814.1

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2 金宏;視黃醇轉(zhuǎn)運(yùn)的分子機(jī)制[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1997年02期

3 付中滇;陳婉蓉;;視黃醇類(lèi)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1985年03期

4 王萃章;;結(jié)腸直腸癌及癌前病變病人血清視黃醇水平[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));1988年01期

5 曾寧心;王家

本文編號(hào)：2698884