【摘要】：米渣是以大米為原料生產(chǎn)有機(jī)酸、淀粉糖和發(fā)酵工業(yè)中的副產(chǎn)物,蛋白含量高達(dá)50%以上,與大米蛋白質(zhì)具有幾乎相同的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,氨基酸配比合理,然而因其溶解性低,在中性pH下消化率差被用作廉價(jià)的動(dòng)物飼料。米渣經(jīng)酶解其功能和營(yíng)養(yǎng)特性能得到改善,可以提高米渣利用率。本課題通過(guò)物理超微粉碎輔助復(fù)合酶水解制備米渣蛋白肽,進(jìn)而研究了肽抗腫瘤活性和功能特性,然后將米渣酶解物作為微膠囊壁材,研究對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響,為大米蛋白活性肽、斷奶仔豬日糧營(yíng)養(yǎng)添加物產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:(1)超微粉碎結(jié)合復(fù)合酶法制備了6種大米蛋白酶解肽,其水解度、蛋白回收率、短肽含量研究結(jié)果表明,三種蛋白酶(胰蛋白酶、中性蛋白酶及風(fēng)味蛋白酶)復(fù)配比例為2:5:1結(jié)果最佳,氨基酸配比合理,米渣蛋白肽乳化性較差,但溶解性大于90%,RDPH-e起泡性較好,可能是因?yàn)槌⒎鬯槭沟鞍踪|(zhì)的部分結(jié)構(gòu)得以展開,改變了米渣蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu),分子容易吸附在氣液界面,各蛋白肽抗氧化活性隨著濃度增加均有不同程度增加。(2)米渣酶解大米蛋白肽經(jīng)超濾制得不同肽組分RDPH-e-1(3-10k)、RDPH-e-2(1-3k)、RDPH-e-3(1k),對(duì)HepG2細(xì)胞增殖、凋亡、周期、遷移等抗腫瘤結(jié)果顯示,相對(duì)于對(duì)照組各組分處理組對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖均具有不同程度抑制作用,RDPH-e-1、RDPH-e-2對(duì)HepG2的最高抑制率超過(guò)了60%,有良好的量效關(guān)系。RDPH-e-1半數(shù)抑制濃度為(63.51±0.10)μg/mL,與其它各組有顯著性差異,活性最高。細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示蛋白肽處理組相對(duì)于空白對(duì)照組均出現(xiàn)染色質(zhì)聚集,細(xì)胞核皺縮,且凋亡率與濃度呈正相關(guān)。流式細(xì)胞法檢測(cè)不同肽組分對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞周期的影響,證明大米蛋白肽組分作用于HepG2細(xì)胞發(fā)生了G1期的阻滯,阻止了HepG2細(xì)胞向S期過(guò)渡,抑制了DNA復(fù)制。Transwell小室遷移試驗(yàn)可以看出,不同分子量肽組分能有效抑制HepG2細(xì)胞的遷移,且以RDPH-e-1作用遷移能力最小。(3)制備米渣酶解肽為壁材微膠囊產(chǎn)品,以包埋率為目標(biāo)參數(shù)進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化,最優(yōu)結(jié)果為乳化劑含量3.01%、壁材配比3.35:1、芯材含量29.17%,理論包埋率為81.78%�？紤]到實(shí)際應(yīng)用,將工藝參數(shù)設(shè)定為乳化劑含量3.0%、壁材配比3:1、芯材含量30.00%。以此優(yōu)化工藝制備大米糖漿和米渣酶解蛋白肽為壁材椰子油微膠囊粉,其水分為2.07%,包埋率為81.68%,溶解性能良好。其粒徑分布10μm占90%,電鏡表征可見微膠囊多呈圓球形,表面完整光滑。在25℃貯藏條件下,第30 d椰子油和椰子油微膠囊的過(guò)氧化值分別為6.21 meq/kg和5.02 meq/kg,在60℃加速氧化條件下,原料椰子油的過(guò)氧化值迅速增加,微膠囊化椰子油緩慢上升,貯藏30 d椰子油的過(guò)氧化值達(dá)到36.42 meq/kg;3種濕度條件下椰子油微膠囊的過(guò)氧化值分別為4.49 meq/kg,6.64 meq/kg,11.46 meq/kg,顯示微膠囊產(chǎn)品應(yīng)在通風(fēng)干燥環(huán)境下保藏。(4)在日糧中添加以米渣酶解物和糖漿為壁材的椰子油微膠囊,評(píng)價(jià)其對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及其腸道菌群的影響,發(fā)現(xiàn)在斷奶仔豬飼糧中添加3%以大米蛋白肽-糖漿為壁材的椰子油微膠囊后與對(duì)照組相比,平均日增重高24.00%,日采食量高14.81%,干物質(zhì)、粗脂肪和粗蛋白的表觀消化率與對(duì)照組相比分別高4.51%、17.34%、18.76%。對(duì)血清總蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯有顯著影響,對(duì)腸道菌群有改善趨勢(shì)。表明椰子油微膠囊粉可以在仔豬飼料添加,為科學(xué)制定仔豬蛋白、油脂需要模式及大米蛋白肽應(yīng)用提供科學(xué)了依據(jù)。
【圖文】：

圖 2.1 酶篩選實(shí)驗(yàn)Fig 2.1 Election of comparison蛋白酶的篩選試驗(yàn)結(jié)果如圖 2.1 所示。胰蛋白酶酶解產(chǎn)物水解，，其水解度可達(dá) 12%以上，胰蛋白酶的酶切位點(diǎn)為賴氨酸和精荷的堿性氨基酸，有研究表明胰蛋白酶是制備大米免疫活性肽性蛋白酶酶解產(chǎn)物還原力最高，水解度僅低于胰蛋白酶，馬海性蛋白酶是最佳酶解制備大米抗氧化肽的蛋白酶。風(fēng)味蛋白酶外切酶組成的混合酶，和其它的內(nèi)切酶一同使用時(shí)可以有效的提高底物轉(zhuǎn)化率，可以看出因蛋白酶來(lái)源不同酶學(xué)特性不同，解作用存在較大差異，為了生產(chǎn)出高抗氧化活性，高免疫活性解的基礎(chǔ)上選擇胰蛋白酶、中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行復(fù)PH 理化性質(zhì)測(cè)定解度測(cè)定

RDPH水解度測(cè)定Fig.2.2HydrolysisdegreeofRDPH
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S828.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2698766