【摘要】：目的:抵抗素(Resistin,RETN)是2001年Steppan在研究胰島素增敏劑(噻唑烷二酮類(lèi)藥物)的作用機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞因子,與肥胖、胰島素抵抗和2型糖尿病相關(guān)聯(lián)。抵抗素除參與機(jī)體炎癥與免疫反應(yīng),具有促炎作用外;還影響機(jī)體糖脂代謝,具有促胰島素抵抗作用。抵抗素可促使單核或巨噬細(xì)胞的IκB磷酸化并與NF-κB解離,使NF-κB信號(hào)通路激活,釋放IL-6、TNFα等炎癥細(xì)胞因子,引起炎癥反應(yīng);除此外,抵抗素還可促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積,但其作用機(jī)制不明確。已有研究表明,羅西土堿和薯蕷皂苷元等可通過(guò)PI3K/AKT/PPARγ信號(hào)通路抑制巨噬細(xì)胞LPL表達(dá),進(jìn)減少細(xì)胞脂質(zhì)蓄積。抵抗素能夠激活PI3K/AKT/PPARγ信號(hào)通路,發(fā)揮促胰島素抵抗、影響內(nèi)皮細(xì)胞NO生成、抗細(xì)胞凋亡等生物學(xué)作用,但其能否通過(guò)該信號(hào)通路影響LPL表達(dá)并進(jìn)而促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積,尚有待研究證實(shí)。因此,基于PI3K/AKT/PPARγ信號(hào)通路開(kāi)展了抵抗素對(duì)RAW264.7細(xì)胞LPL表達(dá)及脂質(zhì)蓄積的研究。結(jié)果與分析:(1)用終濃度為50 ng/mL,100 ng/mL,150 ng/mL,200 ng/mL的抵抗素孵育RAW264.7細(xì)胞24h,用qRT-PCR和Western blot方法分別檢測(cè)LPL的基因和蛋白表達(dá)結(jié)果,隨抵抗素作用濃度的增高(50-200 ng/mL),RAW264.7細(xì)胞LPL基因和蛋白表達(dá)增加。終濃度為200 ng/mL的抵抗素孵育RAW264.7細(xì)胞,檢測(cè)其LPL在0h,3h,6h,12h,24h,48h的基因和蛋白表達(dá)情況,隨抵抗素作用時(shí)間(24h以?xún)?nèi))的增加LPL基因和蛋白表達(dá)也增加。上述結(jié)果表明,抵抗素具有促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞LPL基因和蛋白表達(dá)的作用。(2)用終濃度為40μmol/L的PI3K特異性抑制劑(LY294002)孵育RAW264.7細(xì)胞1h,加入終濃度為200 ng/mL的抵抗素繼續(xù)孵育24h,qRT-PCR檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞PI3K、Akt、PPARγ、LPL的基因和蛋白表達(dá)變化。LY294002孵育后,添加抵抗素孵育RAW264.7細(xì)胞的LPL、PI3K、Akt、PPARγ基因和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01)。結(jié)果表明,抵抗素通過(guò)激活PI3K促進(jìn)LPL基因和蛋白的表達(dá)。(3)用LPL-siRNA孵育RAW264.7細(xì)胞24h,再添加終濃度為50μmol/mL的ox-LDL孵育1h,加入終濃度為200 ng/mL抵抗素孵育24h,檢測(cè)LPL的基因和蛋白表達(dá)變化,并用油紅O染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂滴蓄積,酶法定量檢測(cè)TG、TC的含量。LPL-siRNA孵育后,添加抵抗素孵育RAW264.7細(xì)胞的LPL基因和蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01),細(xì)胞內(nèi)脂滴蓄積明顯減少,細(xì)胞內(nèi)TG、TC含量顯著降低(P0.01)。結(jié)果表明,LPL是抵抗素促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的關(guān)鍵調(diào)控因子。結(jié)論:(1)抵抗素具有促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞LPL基因和蛋白表達(dá)的作用,并受作用濃度和作用時(shí)間影響。(2)抵抗素具有與PI3K作用活化PI3K/Akt/PPARγ信號(hào)通路進(jìn)而促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞LPL基因和蛋白的表達(dá)的作用。(3)抵抗素導(dǎo)致RAW264.7細(xì)胞的脂質(zhì)蓄積與抵抗素促進(jìn)其LPL基因和蛋白的表達(dá)增加密切關(guān)聯(lián)。
【圖文】：

A 正常狀態(tài)下的 RAW264.7 細(xì)胞（x400） B 分化較嚴(yán)重的 RAW264.7 細(xì)胞（x400）圖 2-1 倒置顯微鏡下觀察到的 RAW264.7 細(xì)胞（A.B）Fig.2-1 The RAW264.7 細(xì)胞 cells observed under inverted microscope(A.B)2.3.2 不同濃度抵抗素對(duì) RAW264.7 細(xì)胞 LPL 的表達(dá)的影響用終濃度的抵抗素（50 ng/mL，100 ng/mL，150 ng/mL，200 ng/mL）孵育 RAW264.7細(xì)胞 24h 后，用 qRT-PCR 和 Western Blot 技術(shù)分別檢測(cè) LPLmRNA 水平及蛋白水平。如圖 2-2 可見(jiàn)各濃度抵抗素孵育細(xì)胞后，RAW264.7 細(xì)胞 LPL 的 mRNA 水平都極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），100 ng/mL 組 LPL mRNA 水平顯著高于 50 ng/mL 組（P＜0.05），150ng/mL 組極顯著高于 100 ng/mL 組（P＜0.01），200 ng/mL 組極顯著高于 150 ng/mL 組（P＜0.01），在 50-200 ng/mL 濃度時(shí)，RAW264.7 細(xì)胞 LPL mRNA 水平隨抵抗素濃度增加而增加；如圖 2-3 可見(jiàn)各濃度抵抗素處理細(xì)胞后，，終濃度為 50 ng/mL，100 ng/mL，150

不同濃度抵抗素對(duì)巨噬細(xì)胞LPLmRNA水平的影響
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.3

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 金仲品;;抵抗素研究的進(jìn)展[J];濱州職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

2 賈燕;王t

本文編號(hào)：2694205