【摘要】：目的:肌內(nèi)脂肪(IMF)作為影響肌肉風味的重要物質(zhì),其含量對肉質(zhì)的影響極為顯著,是評價肉制品優(yōu)劣的重要指標。但目前對于雞胚胎發(fā)育早期IMF沉積相關(guān)的miRNA及其靶基因的研究較少。本研究以胚胎發(fā)育早期的玫瑰冠雞和科寶雞腿肌為研究對象,采用高通量測序技術(shù)獲得與IMF沉積相關(guān)的關(guān)鍵miRNA及其靶基因,并研究其涉及的通路及生物學(xué)過程,以期探明肌內(nèi)脂肪(IMF)對肌肉風味調(diào)控的分子機理,利用miRNAs靶向干預(yù)IMF沉積相關(guān)基因,為提高肌肉風味研究提供新思路。方法:(1)采用索氏提取法、高效液相色譜法、試劑盒法分別測定兩種雞肌肉中肌內(nèi)脂肪、肌苷酸和氨基酸、還原糖和硫胺素的含量;(2)通過對兩種雞肌肉壓片的組織學(xué)觀察,確定兩種雞腿肌和胸肌脂滴開始沉積的時間點;(3)構(gòu)建兩種雞腿肌的小RNA文庫,并通過生物信息學(xué)分析方法對測序結(jié)果進行分析、用Real-time-qPCR驗證庫的可靠性;(4)采用miRanda、PITA和RNAhybrid軟件預(yù)測gga-miR-3532-5p的靶位點,并用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)對其與靶基因的靶向關(guān)系進行鑒定。結(jié)果:(1)玫瑰冠雞的總氨基酸、必需氨基酸總量、鮮味氨基酸總量均高于科寶雞(P0.05);玫瑰冠雞的肌苷酸(IMP)和矯正肌苷酸(IMPc)含量均高于科寶雞;玫瑰冠雞的硫胺素、還原糖含量高于或者持平于科寶雞;玫瑰冠雞的肌內(nèi)脂肪(IMF)含量大部分高于科寶雞;總體來說,玫瑰冠雞肉品質(zhì)風味較科寶雞更優(yōu)。兩種雞母雞的五種風味物質(zhì)含量部分高于公雞。兩種雞肌肉IMF含量隨著日齡的增長部分呈上升趨勢。(2)兩種雞腿肌均在胚胎發(fā)育第7天開始有脂滴沉積,胸肌均在胚胎發(fā)育第8天開始有脂滴沉積,腿肌發(fā)育早于胸肌;肌肉中脂滴沉積隨胚齡增加呈 波浪狀‖變化趨勢;玫瑰冠雞脂滴沉積量大于科寶雞,但沉積速率低于科寶雞。(3)miRNA測序結(jié)果發(fā)現(xiàn):玫瑰冠公雞的腿肌vs科寶公雞的腿肌(MGT vs KGT)庫共得到差異表達顯著的miRNAs 306個(其中154個上調(diào)、152個下調(diào)),包括已知miRNAs 273個,新預(yù)測miRNAs 33個;玫瑰冠母雞的腿肌vs科寶母雞的腿肌(MMT vs KMT)庫共得到差異表達顯著的miRNAs 335個(其中171個上調(diào)、164個下調(diào)),包括已知miRNAs 286個,新預(yù)測miRNAs 49個。GO和KEGG通路分析顯示,差異表達的miRNA主要涉及胚胎發(fā)育過程和PPAR信號通路(PPAR signaling pathway)等肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)的信號通路。對庫中6個差異表達顯著miRNA的qRT-PCR驗證結(jié)果與高通量測序結(jié)果一致。(4)篩選到與肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)的gga-miR-3532-5p及其靶基因FABP5,通過雙熒光素酶報告基因鑒定顯示,gga-miR-3532-5p極顯著的抑制了FABP5-3’-UTR區(qū)的報告基因活性,使熒光素酶活性下調(diào)19.2%(P0.01)。說明gga-miR-3532-5p與FABP5基因存在靶向關(guān)系,并抑制其表達。結(jié)論:(1)玫瑰冠雞的營養(yǎng)價值及肌肉風味優(yōu)于科寶雞,且母雞均稍優(yōu)于公雞。(2)腿肌在胚胎發(fā)育第7天開始有脂滴沉積,胸肌在胚胎發(fā)育第8天開始有脂滴沉積,胚胎發(fā)育第7天可以作為研究脂滴開始沉積的關(guān)鍵點。(3)兩種雞腿肌的miRNA文庫構(gòu)建成功,分析獲得了表達差異顯著的miRNAs,其中MGT vs KGT庫306個,MMT vs KMT庫335個。(4)證明了FABP5是gga-miR-3532-5p的靶基因,推測gga-miR-3532-5p可能通過作用于FABP5基因,參與IMF沉積負調(diào)控。
【圖文】：

圖 2-1A 兩種雞 E5~E6 期腿肌組織壓片染色結(jié)果（100×10） Staining results of leg muscle tissue compression of two chickens with E5 to注：K：科寶雞；M：玫瑰冠雞；T：腿肌

圖 2-1 B 兩種雞 E7~E8 期腿肌組織壓片染色結(jié)果（100×10）Staining results of leg muscle tissue compression of two chickens with E7 toK：科寶雞；M：玫瑰冠雞；T：腿�。粓D中紅色箭頭標注的紅色小滴即為脂肪滴
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S831

【參考文獻】

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本文編號：2693810