【摘要】：豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒引起的一種以仔豬發(fā)熱,腦脊髓炎及妊娠母豬流產(chǎn)為主要特征的急性傳染病,是目前嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)的重大傳染病之一。近幾年隨著偽狂犬病病毒各種變異毒株的出現(xiàn),通過疫苗對(duì)偽狂犬病的預(yù)防和治療稍顯局限,因此尋找和開發(fā)有效的抗病毒的藥物來防治豬偽狂犬病成為必要補(bǔ)充手段。近年來喹諾酮類藥物在抗病毒方面研究取得了一定的成果,國(guó)內(nèi)外也報(bào)道了一系列具有皰疹病毒活性的喹諾酮類化合物出現(xiàn)。左氧氟沙星屬于喹諾酮類藥物的一種,雖然國(guó)家已明文規(guī)定禁止使用左氧氟沙星作為獸用抗菌藥,但其具有的抗病毒的作用有待我們進(jìn)一步研究利用,國(guó)內(nèi)外已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道出左氧氟沙星的抗病毒作用,如對(duì)乙型肝炎病毒的抑制作用,對(duì)呼吸道合胞病毒的感染的治療等。本論文探究左氧氟沙星對(duì)PRV增殖的影響,從小鼠和細(xì)胞體內(nèi)外兩個(gè)方面研究藥物抗PRV的活性,為左氧氟沙星對(duì)PRV的臨床防治上提供新的途徑以及挖掘新的抗病毒藥物資源都具有及其重要的意義。1、試驗(yàn)由體外細(xì)胞開展,在96孔板上培養(yǎng)BHK-21細(xì)胞,接種倍數(shù)稀釋的病毒液,觀察細(xì)胞的病變情況,并計(jì)算出PRV-XJ株的病毒滴度為10~6.79.79 TCID_(50)/0.1 mL。2、試驗(yàn)再次培養(yǎng)細(xì)胞和接種倍數(shù)稀釋病毒液,方法與第一次試驗(yàn)步驟相同,但是本次試驗(yàn)同時(shí)加入了不同倍數(shù)稀釋的左氧氟沙星,觀察對(duì)比在加入左氧氟沙星和沒有加入左氧氟沙星下的細(xì)胞病變情況,主要表現(xiàn)在CPE出現(xiàn)時(shí)間、CPE孔數(shù)等,繼續(xù)測(cè)定此條件下病毒滴度為10~6 TCID_(50)/0.1 mL,對(duì)比發(fā)現(xiàn)病毒滴度降低,病毒的增殖受影響,證明左氧氟沙星對(duì)細(xì)胞上PRV的增殖有抑制作用,在試驗(yàn)第18~30 h時(shí),病毒液稀釋度在10~(-4)~10~(-6)下,藥物在10~20倍稀釋下時(shí),藥物對(duì)病毒增殖抑制作用最明顯。3.試驗(yàn)由體內(nèi)小鼠開展,不同倍數(shù)病毒液注射小鼠,觀察小鼠的發(fā)病情況,計(jì)算出PRV-XJ株的病毒滴度為10~3.16.16 LD_(50)/0.1 mL。4.試驗(yàn)繼續(xù)另選小鼠分組重復(fù)攻毒試驗(yàn),但在48 h再對(duì)小鼠注射不同倍數(shù)稀釋的左氧氟沙星,試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小鼠死亡率降低,死亡天數(shù)總體延后了1~2 d;測(cè)得此條件下的病毒滴度為10~2.48.48 LD_(50)/0.1 mL,對(duì)比可知病毒滴度降低,病毒增殖受影響,證明左氧氟沙星對(duì)于小鼠體內(nèi)的PRV的增殖有抑制作用,并且病毒液稀釋度在10~(-1)~10~(-3)下,同時(shí)在藥物10倍稀釋下,藥物對(duì)病毒增殖抑制作用效果最明顯。綜上,通過體外細(xì)胞試驗(yàn)與體內(nèi)小鼠攻毒試驗(yàn),證明左氧氟沙星對(duì)PRV的增殖有抑制作用,為后續(xù)繼續(xù)研究PRV的抗病毒藥物提供試驗(yàn)?zāi)Ｐ秃蛿?shù)據(jù)基礎(chǔ),為研究抗PRV新藥提供新的思想,為治療偽狂犬病開辟新的途徑和方向等。
【圖文】：

每 2 h 在倒置顯微鏡進(jìn)行觀察，根據(jù)倒置顯微鏡下的細(xì)胞病變情況，觀察和拍照，記錄細(xì)胞病變時(shí)間和病變孔數(shù)，連續(xù)觀察 4 d，記錄結(jié)果，制作表格，根據(jù) A~B 行對(duì)照組和 C~H 試驗(yàn)組細(xì)胞變化情況，按 Reed-Muench 法統(tǒng)計(jì) C~H（12×6）孔數(shù)，計(jì)算出病毒 TCID50[50]。2 結(jié)果與分析2.1 PRV 在 BHK-21 細(xì)胞上的增殖情況在倒置顯微鏡進(jìn)行觀察下發(fā)現(xiàn)，在第 4 h，觀察到細(xì)胞開始出現(xiàn)細(xì)胞病變，個(gè)別細(xì)胞發(fā)現(xiàn)逐漸開始變的圓潤(rùn)（圖 2-1），并且透亮，細(xì)胞的折射性液逐漸增強(qiáng)，再觀察的第 24 h 后，發(fā)現(xiàn)倒置顯微鏡下細(xì)胞開始大量變圓，，變亮，在第 72 h 之后細(xì)胞出現(xiàn)了脫落現(xiàn)象，最后有些出現(xiàn)了死亡，并出現(xiàn)了典型的細(xì)胞病變。發(fā)現(xiàn)細(xì)胞病變不再繼續(xù)，開始統(tǒng)計(jì) 96 孔板上細(xì)胞病變孔數(shù)，得出 96 孔細(xì)胞板接毒情況記錄表(表 2-2）
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.28


本文編號(hào)：2693771