【摘要】：豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒引起的一種以仔豬發(fā)熱,腦脊髓炎及妊娠母豬流產(chǎn)為主要特征的急性傳染病,是目前嚴重危害養(yǎng)殖業(yè)的重大傳染病之一。近幾年隨著偽狂犬病病毒各種變異毒株的出現(xiàn),通過疫苗對偽狂犬病的預防和治療稍顯局限,因此尋找和開發(fā)有效的抗病毒的藥物來防治豬偽狂犬病成為必要補充手段。近年來喹諾酮類藥物在抗病毒方面研究取得了一定的成果,國內(nèi)外也報道了一系列具有皰疹病毒活性的喹諾酮類化合物出現(xiàn)。左氧氟沙星屬于喹諾酮類藥物的一種,雖然國家已明文規(guī)定禁止使用左氧氟沙星作為獸用抗菌藥,但其具有的抗病毒的作用有待我們進一步研究利用,國內(nèi)外已有多篇文獻報道出左氧氟沙星的抗病毒作用,如對乙型肝炎病毒的抑制作用,對呼吸道合胞病毒的感染的治療等。本論文探究左氧氟沙星對PRV增殖的影響,從小鼠和細胞體內(nèi)外兩個方面研究藥物抗PRV的活性,為左氧氟沙星對PRV的臨床防治上提供新的途徑以及挖掘新的抗病毒藥物資源都具有及其重要的意義。1、試驗由體外細胞開展,在96孔板上培養(yǎng)BHK-21細胞,接種倍數(shù)稀釋的病毒液,觀察細胞的病變情況,并計算出PRV-XJ株的病毒滴度為10~6.79.79 TCID_(50)/0.1 mL。2、試驗再次培養(yǎng)細胞和接種倍數(shù)稀釋病毒液,方法與第一次試驗步驟相同,但是本次試驗同時加入了不同倍數(shù)稀釋的左氧氟沙星,觀察對比在加入左氧氟沙星和沒有加入左氧氟沙星下的細胞病變情況,主要表現(xiàn)在CPE出現(xiàn)時間、CPE孔數(shù)等,繼續(xù)測定此條件下病毒滴度為10~6 TCID_(50)/0.1 mL,對比發(fā)現(xiàn)病毒滴度降低,病毒的增殖受影響,證明左氧氟沙星對細胞上PRV的增殖有抑制作用,在試驗第18~30 h時,病毒液稀釋度在10~(-4)~10~(-6)下,藥物在10~20倍稀釋下時,藥物對病毒增殖抑制作用最明顯。3.試驗由體內(nèi)小鼠開展,不同倍數(shù)病毒液注射小鼠,觀察小鼠的發(fā)病情況,計算出PRV-XJ株的病毒滴度為10~3.16.16 LD_(50)/0.1 mL。4.試驗繼續(xù)另選小鼠分組重復攻毒試驗,但在48 h再對小鼠注射不同倍數(shù)稀釋的左氧氟沙星,試驗發(fā)現(xiàn)小鼠死亡率降低,死亡天數(shù)總體延后了1~2 d;測得此條件下的病毒滴度為10~2.48.48 LD_(50)/0.1 mL,對比可知病毒滴度降低,病毒增殖受影響,證明左氧氟沙星對于小鼠體內(nèi)的PRV的增殖有抑制作用,并且病毒液稀釋度在10~(-1)~10~(-3)下,同時在藥物10倍稀釋下,藥物對病毒增殖抑制作用效果最明顯。綜上,通過體外細胞試驗與體內(nèi)小鼠攻毒試驗,證明左氧氟沙星對PRV的增殖有抑制作用,為后續(xù)繼續(xù)研究PRV的抗病毒藥物提供試驗模型和數(shù)據(jù)基礎,為研究抗PRV新藥提供新的思想,為治療偽狂犬病開辟新的途徑和方向等。
【圖文】：

每 2 h 在倒置顯微鏡進行觀察，根據(jù)倒置顯微鏡下的細胞病變情況，觀察和拍照，記錄細胞病變時間和病變孔數(shù)，連續(xù)觀察 4 d，記錄結(jié)果，制作表格，根據(jù) A~B 行對照組和 C~H 試驗組細胞變化情況，按 Reed-Muench 法統(tǒng)計 C~H（12×6）孔數(shù)，計算出病毒 TCID50[50]。2 結(jié)果與分析2.1 PRV 在 BHK-21 細胞上的增殖情況在倒置顯微鏡進行觀察下發(fā)現(xiàn)，在第 4 h，觀察到細胞開始出現(xiàn)細胞病變，個別細胞發(fā)現(xiàn)逐漸開始變的圓潤（圖 2-1），并且透亮，細胞的折射性液逐漸增強，再觀察的第 24 h 后，發(fā)現(xiàn)倒置顯微鏡下細胞開始大量變圓，，變亮，在第 72 h 之后細胞出現(xiàn)了脫落現(xiàn)象，最后有些出現(xiàn)了死亡，并出現(xiàn)了典型的細胞病變。發(fā)現(xiàn)細胞病變不再繼續(xù)，開始統(tǒng)計 96 孔板上細胞病變孔數(shù)，得出 96 孔細胞板接毒情況記錄表(表 2-2）
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S858.28


本文編號：2693771