【摘要】：Ⅰ群4型禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV-4)可引起雞心包積液-肝炎綜合征(Hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS)。2015年以來HHS在我國河南、河北、山東、江蘇、安徽、廣東等地均有發(fā)生和流行,可發(fā)生于肉雞、蛋雞和三黃雞等,傳播速度快,死亡率高,給養(yǎng)雞業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究從臨床病例中分離病毒,制備滅活疫苗和卵黃抗體,為有效防控該病提供技術(shù)支持。1Ⅰ群4型禽腺病毒的分離鑒定及致病性試驗(yàn)2015-2018年,對(duì)來自山東、湖北、河北的疑似HHS的臨床病例進(jìn)行了病原的分離鑒定;用分離毒株分別人工感染SPF雞胚、1日齡和21日齡SPF雞,采用病理組織學(xué)及PCR方法,檢測(cè)各組織器官的病理學(xué)變化、病毒分布及排毒情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),感染雞胚至8dpi全部死亡,6 dpi時(shí)死亡胚出現(xiàn)心包積液、肝臟腫大出血等典型病變。1日齡SPF雞在4dpi時(shí)全部死亡,21日齡人工感染的SPF雞與同居雞死亡率皆為60%;死亡雞主要病變?cè)诟闻K、心臟及腎臟等器官,其肝臟、心臟、脾臟、胰腺、小腸、腎臟等多器官均檢測(cè)到該病毒DNA;21日齡感染雞于3、5、7、14 dpi時(shí)均檢出泄殖腔排毒,口腔排毒只在7、14 dpi時(shí)檢出。結(jié)果表明該毒株感染性強(qiáng),致死率高,具有一定的泛嗜性,水平傳播能力強(qiáng),泄殖腔排毒是其主要的排毒方式。2Ⅰ群4型禽腺病毒滅活疫苗的研制從分離毒株中篩選出免疫原性高的毒株,制備油乳滅活疫苗,并用該疫苗接種21日齡SPF雞,3周后用兩個(gè)毒株分別攻毒;采用PCR方法檢測(cè)排毒和病毒的分布情況;采用ELISA方法監(jiān)測(cè)抗體及白介素-2的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),免疫攻毒雞均無死亡,在3、5、14 dpi時(shí)均未檢測(cè)到排毒,僅在7 dpi時(shí)檢出少量排毒,14 dpi時(shí)存活雞的各臟器均未檢出病毒DNA;免疫后2周抗體水平逐漸升高,攻毒后開始下降,至第5周時(shí)抗體水平開始回升;白介素2含量在攻毒前2-3周變化較小,7 dpi時(shí)白介素2含量明顯升高。結(jié)果表明該疫苗具有良好的免疫原性,使機(jī)體對(duì)兩個(gè)毒株的感染均具有強(qiáng)的抵抗力。3Ⅰ群4型禽腺病毒卵黃抗體的制備及應(yīng)用采用上述疫苗免疫健康商品蛋雞,制備卵黃抗體,肌肉注射于SPF雞,兩天后采用FAdV-4分離株進(jìn)行攻毒,檢測(cè)病毒的分布及排毒情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),至14 dpi試驗(yàn)組、對(duì)照組死亡率分別為6.67%和60%(P0.01差異極顯著);試驗(yàn)組只有肝臟檢測(cè)到該病毒的DNA,而對(duì)照組心臟、脾臟、胰腺等多臟器均能檢到;試驗(yàn)組只在7dpi時(shí)檢到零星排毒,對(duì)照組3-7 dpi時(shí)均可排毒。表明制備的卵黃抗體能有效中和病毒,使其感染局限在肝臟,抑制機(jī)體排毒,為SPF雞提供有效保護(hù)。綜上所述,本試驗(yàn)分離毒株致病性強(qiáng),具有一定的泛嗜性,泄殖腔排毒是其主要的排毒方式;所制備的滅活疫苗和卵黃抗體均能有效保護(hù)SPF雞,使其對(duì)Ⅰ群4型禽腺病毒的感染具有較強(qiáng)的抵抗力。
【圖文】：

聊城大學(xué)碩士學(xué)位論文對(duì)稱的二十面體結(jié)構(gòu)，這種對(duì)稱性是腺病毒科所有成員的典型特征[16-18]。主要由衣殼（Capsid）、纖突（Fiber）、核酸芯髓（Core）以及相關(guān)蛋白構(gòu)成。其衣殼具有 252個(gè)殼粒，在二十面體的頂角有 12 個(gè)頂角殼粒，，稱為五鄰體（Penton）。每個(gè)五鄰體有 1 條或兩條纖維突起，長(zhǎng)度為 100-370A，這些纖突在衣殼的五鄰體蛋白上延伸，在纖維的頂端形成頭節(jié)區(qū)（knob）。在病毒的感染過程中主要是病毒的五鄰體和纖維的頭節(jié)區(qū)與細(xì)胞表面的病毒受體結(jié)合。衣殼的其他 240 個(gè)非頂角殼粒，叫做六鄰體（hexon）。六鄰體蛋白是腺病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，它與五鄰體蛋白和纖維蛋白一起構(gòu)成了腺病毒的外殼，并且包含了主要的屬和亞屬特異性抗原決定簇和次要抗原決定簇。

毒情況檢測(cè)7、14 dpi 時(shí)，隨機(jī)采取 5 只攻毒雞和對(duì)照組的口腔和中，加入含雙抗的 PBS 1 mL，將棉拭子頭部在管壁反m 離心 10 min，取上清提取病毒 DNA，利用 PCR 方法基因，方法同 2.2.1 和 2.2.2。離鑒定結(jié)果禽腺病毒的分離情況均擴(kuò)增出約 1219 bp 的條帶，與預(yù)期目的條帶相符，說病毒。電泳結(jié)果見圖 2-1，Hexon 基因進(jìn)化樹見圖 2-2，病毒代表株在同一分支，說明分離株為血清 4 型禽腺病別命名為 SD201501 株、SD201601 株、HeB201801 株、
【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2693745