【摘要】：豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染會(huì)引起機(jī)體免疫功能紊亂、免疫抑制,多種病原繼發(fā)感染和混合感染,給養(yǎng)豬業(yè)造成極大的損失。PCV2持續(xù)性感染導(dǎo)致豬群的血清抗體陽(yáng)性率居高不下,接種疫苗產(chǎn)生的抗體與自然感染產(chǎn)生的抗體無(wú)法有效區(qū)分,這是目前疫苗免疫防控面臨的最大挑戰(zhàn)。鑒于此,本研究通過(guò)監(jiān)測(cè)豬群中IgG和IgM抗體的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)PCV2特異性IgM抗體的存在時(shí)間和存在狀態(tài)在區(qū)分疫苗免疫和病毒感染方面發(fā)揮重要作用,基于此,分別建立了基于SPG的檢測(cè)PCV2 IgG抗體的捕獲ELISA和以抗豬IgM多抗為捕獲抗原的檢測(cè)PCV2 IgM抗體的捕獲ELISA方法,綜合兩種抗體診斷方法的判定結(jié)果可為判斷豬群感染狀態(tài)和疫苗接種時(shí)機(jī)提供科學(xué)指導(dǎo)。研究?jī)?nèi)容可分為以下三個(gè)部分:1.分析PCV2感染和免疫后豬群產(chǎn)生的IgG和IgM抗體消長(zhǎng)規(guī)律利用PCV2商品化滅活疫苗和細(xì)胞分離毒株分別免疫和感染抗體陰性豬,接種后定期采集外周血并分離血清,進(jìn)口試劑盒INGEZIM IgG/IgM Kit檢測(cè)血清樣品。通過(guò)監(jiān)測(cè)抗體的消長(zhǎng)變化,發(fā)現(xiàn)免疫和感染后IgM抗體首先產(chǎn)生,隨后轉(zhuǎn)變?yōu)镮gG抗體,且持續(xù)存在;人工感染PCV2細(xì)胞毒產(chǎn)生的IgM存在時(shí)間為20-30 d,自然感染(感染組的陽(yáng)性對(duì)照)產(chǎn)生的IgM持續(xù)55 d,而接種滅活疫苗的免疫組IgM的存在時(shí)間不超過(guò)14 d。PCV2 IgM抗體產(chǎn)生特點(diǎn)可以優(yōu)化免疫程序,區(qū)分病毒感染和疫苗免疫,首先免疫前應(yīng)該避開(kāi)IgM抗體陽(yáng)性期;免疫后若IgM抗體變?yōu)殛幮?在下次接種疫苗之前若檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,那么必定出現(xiàn)了新一輪的PCV2感染,此時(shí)不建議追加免疫。2.基于SPG建立檢測(cè)PCV2 IgG的捕獲ELISA通過(guò)比較SPA、SPG和PPL三種免疫球蛋白結(jié)合蛋白作為捕獲抗原、HRP標(biāo)記的PCV2 Cap作為二抗的捕獲法ELISA,確定SPG為包被抗原,優(yōu)化反應(yīng)條件,繪制ROC曲線確定臨界值(cut-off point,cut-off值)為0.61,此時(shí)對(duì)應(yīng)的敏感性和特異性分別為93.9%和90.3%。187例臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果顯示,該方法與商業(yè)化的INGEZIM Circovirus IgG Kit的總符合率為96.23%。3.建立捕獲ELISA檢測(cè)PCV2 IgM抗體以兔抗豬native IgM高免血清做包被抗原,HRP標(biāo)記的R2346作為二抗,建立檢測(cè)豬抗PCV2IgM抗體的ELISA方法。優(yōu)化該方法的最佳反應(yīng)條件后,繪制ROC曲線判定cut-off值為0.492,對(duì)應(yīng)的敏感性和特異性分別為96.7%和97.2%;檢測(cè)田間血清樣品IgM與INGEZIM IgM Kit試劑盒符合率為92.7%。本研究分別建立檢測(cè)PCV2 IgG和IgM抗體的捕獲ELISA,為優(yōu)化疫苗免疫程序、PCV2的早期快速診斷和區(qū)分病毒感染和疫苗免疫提供了簡(jiǎn)單有效的途徑,為進(jìn)一步控制PCV2在豬場(chǎng)中的流行傳播提供了可靠依據(jù)。
【圖文】：

圖 2.1 部分標(biāo)準(zhǔn)血清的 IFA 結(jié)果Fig 2.1 Partial reference serum immunofluorescence results3.2.2 PCV2 Cap 蛋白的表達(dá)及鑒定通過(guò)SDA-PAGE證實(shí)PCV2 Cap重組蛋白在大腸桿菌中成功表達(dá)，鎳離子柱純化效果較好（圖2.2）。Western blot 顯示抗體能夠識(shí)別純化的 Cap 蛋白，說(shuō)明具有反應(yīng)原性（圖 2.2）。

圖 2.2 PCV2 Cap 蛋白的 SDS-PEGE 和 Western Blot 分析Fig 2.2 SDS-PAGE and Western Blot analysis of PCV2 Cap0 kDa)；1 和 2：IPTG 未誘導(dǎo)和誘導(dǎo)后的重組 PCV2 Cap；3：t。Marker(10-170 kDa); Line1 and Line2: Uninduced and IPTG-induap; Lane 4: Western Blot of purified proteins.件的優(yōu)化明，無(wú)論 OD450還是 P/N 值均顯示 SPG 為最佳捕獲875 ng(1:800)，血清的最佳稀釋度為 1:80（圖 2.3 和圖 0.5 h、1 h 和 2 h，結(jié)果顯示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，表 2.1）。Akerstrom 等人曾報(bào)道 SPG 與 IgG 在 30-4使 16.5 h 后，它仍在緩慢上升(Akerstrom and Bjorck,為 1 h（圖 2.5a）。此外，緩沖溶液的 pH 值對(duì) SPG 結(jié)合而，這一結(jié)論與以前的報(bào)告不一致(Akerstrom and B，，這表明 SPG 能夠很好地適應(yīng)反應(yīng)環(huán)境的酸堿度。因
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.4

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4 Ruo-Fan Sheng;Chang-Wen Zhai;Yuan Ji;Cai-Zhong Chen;Li Yang;Meng-Su Zeng;;Role of MR in the differentiation of IgG4-related from non-IgG4-related hepatic inflammatory pseudotumor[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2017年06期

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3 Hai Chen;Jianping Jia;Zheng Liu;Shimeng Liu;Huiqing Dong;;Cerebrospinal Fluid Features of MS,NMO and NMOSD in Chinese Cases[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2014年

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6 李翠枝;趙貞;趙靜;王云霞;張文;郭軍;;牛初乳中IgG含量的測(cè)定[A];首屆中國(guó)奶業(yè)大會(huì)論文集(下冊(cè))[C];2010年

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9 孫瑜;溫曉曄;;IgG4相關(guān)硬化性膽管炎1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];第十屆全國(guó)疑難及重癥肝病大會(huì)論文匯編[C];2019年

10 楊旭;徐學(xué)新;楊訊;許詞;雷哲;;孕婦血清中IgG亞型與新生兒溶血病相關(guān)性分析[A];中國(guó)中藥雜志2015/專集：基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)從業(yè)人員科技論文寫作培訓(xùn)會(huì)議論文集[C];2016年

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5 本報(bào)記者 楊奉潤(rùn) 蒲剛 馬穎;健康生活引領(lǐng)高效工作[N];廣元日?qǐng)?bào);2012年

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3 馬娜;疏水電荷誘導(dǎo)膜吸附劑的制備及其對(duì)IgG純化性能的研究[D];天津工業(yè)大學(xué);2018年

4 羅穎娣;混合模式介質(zhì)吸附抗體的選擇性及分離應(yīng)用研究[D];浙江大學(xué);2018年

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6 楊曉宇;莎能奶山羊初乳理化性質(zhì)及其免疫球蛋白（IgG）的研究[D];陜西師范大學(xué);2006年

7 許海云;中樞神經(jīng)系統(tǒng)IgG的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1996年

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本文編號(hào)：2692703