【摘要】：貓泛白細(xì)胞減少癥(feline panleukopenia,FP)是由貓泛白細(xì)胞減少癥病毒(feline panleukopenia virus,FPV)引起的高度接觸性傳染病,以白細(xì)胞的嚴(yán)重減少和出血性腸炎為典型特征。該病呈世界范圍流行,對(duì)寵物貓及野生貓科動(dòng)物構(gòu)成巨大威脅。FPV是一種無(wú)囊膜的單鏈DNA病毒,基因組兩端含有發(fā)卡結(jié)構(gòu),中間部分編碼兩種蛋白:非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2)和結(jié)構(gòu)蛋白(VP1、VP2)。本研究分離了一株FPV,并進(jìn)行了生物學(xué)特性、基因組分析及VP2優(yōu)勢(shì)抗原區(qū)的原核表達(dá),為研究北京地區(qū)FPV毒株的流行變異奠定基礎(chǔ)。本研究從某動(dòng)物醫(yī)院一例FPV膠體金試紙條檢測(cè)為強(qiáng)陽(yáng)性的患病貓的糞便中分離到一株病毒,在CRFK細(xì)胞上盲傳5代后,可以觀(guān)察到明顯的病變。經(jīng)間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)、電鏡觀(guān)察及分子生物學(xué)等試驗(yàn)鑒定后,證實(shí)為FPV,命名為BJ04株。經(jīng)動(dòng)物感染試驗(yàn)證實(shí)該毒株能引起典型的臨床癥狀和組織病理學(xué)變化。對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行克隆和序列測(cè)定,利用DNAstar軟件對(duì)BJ04株與GenBank上公布的FPV、犬細(xì)小病毒(CPV)和水貂細(xì)小病毒(MEV)共28株細(xì)小病毒的VP2基因進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)BJ04株與其余27株的核苷酸同源性為98.3%~99.9%,氨基酸同源性為97.3%~100%;其中BJ04株VP2蛋白上的6個(gè)關(guān)鍵氨基酸與其他FPV毒株一致,也證實(shí)BJ04株的宿主為貓;利用DNAstar軟件對(duì)BJ04株與GenBank上登錄的FPV、CPV和MEV共26株細(xì)小病毒的NS1基因序列比較,顯示核苷酸同源性為98.5%~99.9%,氨基酸同源性為98.1%~99.9%。使用生物信息學(xué)軟件對(duì)BJ04株的VP2蛋白進(jìn)行了抗原表位預(yù)測(cè),確定了VP2蛋白上的第307~408位氨基酸為優(yōu)勢(shì)抗原區(qū)域,對(duì)該區(qū)域的基因進(jìn)行原核表達(dá)。蛋白純化后,進(jìn)行Western blot試驗(yàn),結(jié)果表明表達(dá)的重組蛋白具有很好的反應(yīng)活性。
【圖文】：

圖 1.1 細(xì)小病毒的結(jié)構(gòu)示意圖Figure 1.1 The model diagram of parvovirus（https://viralzone.expasy.org/103?outline=all_by_protein）V 編碼的蛋白及功能是一種線(xiàn)性、單鏈 DNA 病毒，基因組長(zhǎng)約為 5123 bp，兩端由獨(dú)特的回文結(jié)配對(duì)形成發(fā)卡雙鏈體（Astell et al., 1985），中間部分編碼兩個(gè)開(kāi)放閱讀框VP1 和 VP2）和非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1 和 NS2）。構(gòu)蛋白與大多數(shù)細(xì)小病毒粒子的結(jié)構(gòu)基本相同，根據(jù)編碼結(jié)構(gòu)蛋白的開(kāi)放閱讀框（現(xiàn) VP1 蛋白編碼 727 個(gè)氨基酸，其蛋白大小約為 73 kD，VP2 蛋白編碼 58小約為 60 kD。VP1 和 VP2 是從可變剪接的 mRNA 中翻譯來(lái)的，VP2 序列中，且 VP1 具有額外的氨基末端序列（Jongeneel et al., 1986）。VP2 蛋白要成分，該蛋白中某些關(guān)鍵位點(diǎn)的氨基酸變化會(huì)導(dǎo)致細(xì)小病毒的抗原特性

碩士學(xué)位論文 第二章 貓泛白細(xì)胞減少癥病毒（BJ04），并收集糞便進(jìn)行排毒情況檢測(cè)。待攻毒貓死亡后立即進(jìn)行剖檢，采集攻%的福爾馬林固定液固定組織，后續(xù)送至北京華百泰生物公司進(jìn)行蘇木精病理組織學(xué)的觀(guān)察。體金試紙條檢測(cè)便上清液滴加至 FPV 膠體金試紙條的加樣孔中，，如圖 2.1 所示。在免疫膠出現(xiàn) C 線(xiàn)和 T 線(xiàn)，表明樣品中含有 FPV。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2692672