發(fā)布時間：2020-05-30 19:42

【摘要】：木犀草素是一類廣泛存在于植物界的天然黃酮類化合物,具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎癥、抗菌、降血脂血壓、保護神經系統(tǒng)及提高免疫力等多種藥理功效,且可以保護細胞及組織免受損傷,但其作用機制尚不清楚。本研究應用CCK8法測定IEC-6細胞活力,并應用Real-time PCR、Western blot、ELISA等分子生物學技術來測定木犀草素對IEC-6細胞中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6和TNF-α的基因與蛋白表達水平,從TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的角度探討木犀草素對LPS(lipopolysaccharides)誘導IEC-6細胞損傷模型的保護機制。同時,在單因素試驗基礎上,應用響應面法設計并優(yōu)化楊樹花中木犀草素的超聲提取工藝,并采用大孔樹脂法對楊樹花中木犀草素富集工藝進行了優(yōu)化。研究結果如下:1.與對照組相比,0.1、0.5、1.0μg/mL木犀草素組IEC-6細胞生存率均無明顯差異(p0.05),而2.0μg/mL木犀草素組IEC-6細胞生存率顯著下降(p0.05),因此將木犀草素濃度設定為0.1、0.5、1.0μg/mL。與對照組相比,0.1與0.5μg/mL LPS組IEC-6細胞生存率無顯著差異(p0.05),而1.0和2.0μg/mL LPS組IEC-6細胞的生存率顯著降低(p0.05),因此,取1.0μg/mL LPS對細胞進行損傷處理。與LPS組相比,0.5和1.0μg/mL木犀草素顯著提高LPS誘導的IEC-6細胞的生存率(p0.05);與空白組相比,LPS組IEC-6細胞的IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88與NF-κb mRNA及蛋白水平均出現不同程度的上調(p0.05);而與LPS組相比,0.1、0.5與1.0μg/mL木犀草素組IEC-6細胞的IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88與NF-κb的mRNA及蛋白水平顯著下調(p0.05)。2.本試驗利用Box-Behnken模型優(yōu)化楊樹花中木犀草素的超聲提取工藝,應用響應面法評價木犀草素最優(yōu)提取條件,以二次多項式模型與響應曲面圖分別描述木犀草素的提取過程與變量影響提取率,根據以上結果得到的最佳提取參數是:乙醇濃度為63%,提取溫度為68~?C,粒徑為0.18-0.25 mm,提取時間為42 min,液料比為25 mL/g,超聲強度68.12 W/cm~2,提取2次。3.在基于超聲提取優(yōu)化工藝的結果基礎上,研究了十二種大孔樹脂對木犀草素的富集工藝;靜態(tài)吸附試驗結果顯示樹脂SP-825最為適用,其數據符合Langmuir和Freundlich等溫線;為了獲得最佳的分離過程,進一步研究了上樣速率、上樣量與解吸液濃度等因素條件;最終優(yōu)化吸附條件為:木犀草素上樣濃度16.48μg/ml、pH 5.0、上樣量10 BV、流速2 BV/h、溫度25~?C;解吸條件為:蒸餾水洗脫5 BV、20%乙醇洗脫5 BV、50%乙醇洗脫5 BV、流速2 BV/h。本試驗的結果說明,木犀草素能夠保護LPS誘導的IEC-6細胞的活力,下調TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6和TNF-α的基因與蛋白表達水平,從調控TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的角度揭示了木犀草素保護腸黏膜屏障的機制。同時,本研究采用響應面法優(yōu)化了楊樹花中木犀草素的超聲提取工藝,將其提取率提高至8.89±0.34 mg/g;并應用大孔吸附樹脂法優(yōu)化了木犀草素的富集工藝,將其含量提高了3.67倍,此結果在天然藥物的提取與分離方面具有理論意義和實用價值。
【圖文】：

、金銀花與荊芥等[50]。木犀草素具有廣泛的藥理作用，其血脂血壓、抗過敏、抗驚厥、提高免疫力等多重功效，可臨床具有解痙、利膽、消炎及保肝等功效，，多用于治療心草素能夠抑制包括枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌，該抑制效果越顯著[54]。木犀草素的功能之一是可以有效地阻礙了組胺的釋放，從而調控酪氨酸蛋白酶、絲氨酸-蘇氨犀草素可將氫原子提供給自由基，因此木犀草素在某些特氧化能力[56]。有相關研究表明，木犀草素是多靶點抗腫瘤與誘導過程，或者使細胞趨于凋亡狀態(tài)，由此可見，木犀藥物[57]。相關研究人員用不同濃度木犀草素干預心肌細胞定濃度的木犀草素能夠使 SOD 活性增強，保護 H202誘導表明木犀草素具有保護機體心血管的功能[58]。

果與分析犀草素對 LPS 誘導的 IEC-6 細胞的保護作用及分子機木犀草素與 LPS 對 IEC-6 細胞活力的影響圖 3-1（A）所示，與對照組比較，0.1、0.5 和 1.0 μg/mL 的木犀草素對 IEC-6用。如圖 3-1（B）所示，與對照組比較，0.1、0.5 μg/mL LPS 組 IEC-6 細胞的差異，但 1.0 與 2.0 μg/mL LPS 對 IEC-6 細胞的生存率具有抑制作用，因此 L定為 1.0 μg/mL。
【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S853.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前7條

1 欽丹萍;孫佩娜;周毅駿;陳方明;張春麗;韓建新;楊雪靜;;雷公藤多苷對潰瘍性結腸炎大鼠模型炎癥及TLR4/MyD88信號通路的作用[J];中華醫(yī)學雜志;2016年18期

2 尚小飛;胡宏偉;苗小樓;王瑜;汪曉斌;張成虎;潘虎;;復方中藥制劑止瀉散及其口服液防治仔豬腹瀉臨床試驗[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2015年06期

3 周麗芬;;楊樹花的藥理作用及其應用[J];北方牧業(yè);2013年09期

4 何俊慶;亓英修;劉雙平;;楊樹花的飼用及藥用價值[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年06期

5 李O

本文編號：2688623