【摘要】：卵泡是位于卵巢皮質(zhì),由卵泡膜細(xì)胞、顆粒細(xì)胞等包裹卵母細(xì)胞形成的特殊結(jié)構(gòu),在卵母細(xì)胞正常發(fā)育過(guò)程中具有支持和保護(hù)的重要作用。根據(jù)卵泡的形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征,從原始卵泡到成熟卵泡的整個(gè)卵泡發(fā)育階段,卵泡又可以分為腔前卵泡和有腔卵泡。此前的大量研究主要集中在有腔卵泡,并已證實(shí)發(fā)育動(dòng)態(tài)主要受到促性腺激素FSH和LH的調(diào)控。然而,對(duì)于腔前卵泡發(fā)育的相關(guān)研究非常有限,目前比較明確的是其對(duì)于促性腺激素的依賴程度很低。然而,腔前卵泡發(fā)育的核心調(diào)控機(jī)制是什么,卻一直沒(méi)能得到回答。該研究發(fā)現(xiàn),C型鈉肽(C-type natriuretic peptide,CNP)具有促進(jìn)腔前卵泡發(fā)育的效果。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)提示,CNP在腔前卵泡發(fā)育中,會(huì)被顯著的激活。據(jù)此,本研究推測(cè)CNP在腔前卵泡發(fā)育中具有重要功能。為此,該論文在以下幾方面開(kāi)展了研究:(1)系統(tǒng)分析了在不同階段腔前發(fā)育以及有腔卵泡中CNP及其受體NPR2的表達(dá)特征,發(fā)現(xiàn)CNP和NPR2均定位于腔前卵泡的顆粒細(xì)胞中,并且在腔前卵泡發(fā)育過(guò)程中不斷上調(diào)。(2)利用體外培養(yǎng)的腔前卵泡作為模型,通過(guò)向培養(yǎng)液中添加不同濃度的CNP(0.1、1、10、100、500nM),我們發(fā)現(xiàn)在無(wú)FSH條件下,10nM以上的CNP可以以濃度依賴的方式,單獨(dú)促進(jìn)腔前卵泡的生長(zhǎng)。(3)為了揭示CNP對(duì)腔前卵泡發(fā)育的促進(jìn)作用,我研究了 CNP對(duì)腔前卵泡顆粒細(xì)胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)在低血清體系下,CNP可以以劑量依賴的形式,顯著地促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖,提高顆粒細(xì)胞活力。(4)我們分別利用成年(8周齡)和幼齡(13日齡)小鼠,通過(guò)腹腔注射CNP預(yù)處理后接受超排實(shí)驗(yàn)來(lái)研究CNP在體內(nèi)條件下對(duì)卵泡發(fā)育的影響,結(jié)果顯示CNP可以顯著增加總排卵數(shù)和可用卵數(shù)。(5)為了探究腔前顆粒細(xì)胞中Nppc和Npr2的表達(dá)調(diào)控機(jī)制,我們研究了卵母細(xì)胞來(lái)源的生長(zhǎng)因子對(duì)腔前顆粒細(xì)胞中CNP和NPR2的表達(dá)的影響,結(jié)果顯示BMP15、GDF9等對(duì)Nppc和Npr2表達(dá)有不同程度的促進(jìn)作用,并且這些因子之間表現(xiàn)出協(xié)同作用。(6)為了更準(zhǔn)確的理解CNP對(duì)腔前卵泡生長(zhǎng)影響的作用,我們研究了 CNP對(duì)腔前卵泡中與卵泡發(fā)育、雌激素代謝相關(guān)基因的表達(dá),結(jié)果顯示CNP對(duì)這些過(guò)程可能存在顯著的影響。綜上所述,該研究證實(shí)了 CNP體內(nèi)外均可以促進(jìn)小鼠腔前卵泡生長(zhǎng),同時(shí)證明了 CNP-NPR2信號(hào)促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖是其調(diào)控腔前卵泡發(fā)育的重要調(diào)節(jié)機(jī)制之一;卵母細(xì)胞來(lái)源的生長(zhǎng)因子對(duì)Nppc和Npr2的表達(dá)具有顯著的影響;CNP可能會(huì)通過(guò)影響WNT信號(hào)和雌激素合成進(jìn)而實(shí)現(xiàn)其促進(jìn)腔前卵泡生長(zhǎng)、顆粒細(xì)胞增殖的作用。這些結(jié)果不僅是對(duì)腔前卵泡發(fā)育機(jī)制的重要補(bǔ)充,同時(shí)也豐富了卵泡發(fā)育過(guò)程中卵母細(xì)胞和體細(xì)胞的對(duì)話機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S814.1

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本文編號(hào)：2688587