【摘要】：豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引發(fā)的一種高度接觸性的豬腸道傳染性疾病,其主要特征為腹瀉、脫水和嘔吐。感染可發(fā)生在所有年齡的豬群中,但臨床癥狀有些不同,其中,以哺乳仔豬的臨床癥狀最為嚴(yán)重,死亡率高。自2010年10月PED在南方大面積爆發(fā),迅速蔓延至全國(guó)以來,對(duì)PEDV的流行情況進(jìn)行持續(xù)的監(jiān)測(cè)十分必要。本研究通過收集全國(guó)部分地區(qū)不同豬場(chǎng)的22份豬腹瀉病料,采用RT-PCR方法檢測(cè)病料。其中,呈現(xiàn)PEDV陽性的病料13份。對(duì)13份呈現(xiàn)PEDV陽性的病料進(jìn)行核酸提取,并擴(kuò)增其S基因。與CV777疫苗株S基因序列相比較,核苷酸同源性為93.8%~94.9%,推導(dǎo)的氨基酸序列同源性為93.1%~94.1%。進(jìn)化樹分析表明,13份PEDV陽性病料的S基因均屬于G2亞群,且為non S-INDEL型,與北美毒株的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。進(jìn)一步的病原分離,將PEDV陽性病料處理后接種至Vero細(xì)胞,用含4‰胰酶的DMEM作維持液,觀察病變情況。通過RT-PCR試驗(yàn)、電鏡觀察以及蝕斑純化試驗(yàn)鑒定,成功分離3株P(guān)EDV毒株,分別命名為HuB-WH-2017、HLJ-JMS-2018和HLJ-2018。穩(wěn)定傳代至第F25,檢測(cè)病毒的TCID_(50),分別為10~(5.62) TCID_(50)/mL、10~(5.6) TCID_(50)/mL和10~(6.33) TCID_(50)/mL。對(duì)3株病毒的S基因進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序,并與CV777毒株的S基因進(jìn)行氨基酸比對(duì),結(jié)果發(fā)現(xiàn),3株病毒在抗原表位上均有氨基酸點(diǎn)突變發(fā)生。繼而,對(duì)分離到的3株病毒HuB-WH-2017、HLJ-JMS-2018和HLJ-2018分別培養(yǎng),經(jīng)蔗糖密度梯度離心的方法純化病毒后,分別免疫小鼠,并監(jiān)測(cè)血清中中和抗體水平的變化。免疫前小鼠體內(nèi)中和抗體呈陰性,在免疫后14 d,3株病毒的中和抗體水平上升至1:478、1:489和1:502,并且隨著免疫次數(shù)的增加,血清中中和抗體水平也隨之提升。最終在加強(qiáng)免疫后第7 d,獲得的血清中和效價(jià)達(dá)到1:614、1:614和1:631。以不同毒株的免疫后血清分別與3株分離株與1株疫苗株CV777進(jìn)行抗原抗體中和試驗(yàn),結(jié)果表明,3株新分離毒株與CV777疫苗株之間中和活性存在差異,但差異不顯著。
【圖文】：

1圖 1-1 PEDV 基因組結(jié)構(gòu)（Lee et al . 2015）Figure 1-1 The structure of PEDV genome（Lee et al. 2015）

近年中國(guó)地區(qū)PEDV的陽性檢出率
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.651

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